a. Định lượng RTD bằng phương pháp đo quang
Tham khảo DĐ VN IV, phát triển phương pháp định lượng RTD trong các dung môi hòa tan khác nhau: methanol, dd HCl pH 1,2[1].
Mẫu chuẩn:
- Cân chính xác khoảng 0,0500 g RTD hòa tan vừa đủ trong 100ml dung môi được dung dịch A (dd A).
- Pha loãng dd A để thu được dãy chuẩn có nồng độ trong khoảng 10-50µg/ml. Mẫu trắng là dung môi hòa tan lựa chọn. Đo độ hấp thụ quang của dãy dung dịch chuẩn tại bước sóng 281nm.
Mẫu thử: pha loãng mẫu thử bằng dung môi ở tỉ lệ nhất định để được nồng độ dung dịch thử trong khoảng 5-50μg/ml.Đo độ hấp thụ quang của mẫu thử và mẫu chuẩn tại bước sóng 281nm. Xây dựng đường chuẩn và phương trình biểu diễn mối quan hệ độ hấp thụ và nồng độ RTD để tính toán kết quả.
b. Định lượng RTD bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC)
Điều kiện tiến hành định lượng RTD bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao được tham khảo trong DĐ VN IV[1].
Pha động: Dung dịch đệmphosphat pH 4,5(0,05M) - acetonitril (70 : 30). Lọc qua màng lọc cellulose acetate (CA)có cỡ lỗ 0,45 µm, siêu âm đuổi bọt trong 30 phút.
Dung dịch chuẩn: Hoà tan RTDtrong pha động để thu được dung dịch có nồng độ khoảng 0,05 mg/ml.
Điều kiện sắc ký:
Cột thép không gỉ Agilent (250 mm x 4 mm) được nhồi pha tĩnh C18 (5 m) Detector quang phổ tử ngoại đặt ở bước sóng 283 nm.
Tốc độ dòng: 1,5 ml/phút. Thể tích tiêm: 20 l.
2.4.2.Các phương pháp đánh giá vi nhũ tương
a. Đánh giá kích thước và phân bố kích thước tiểu phân
Sử dụng phương pháp tán xạ laser trên thiết bị Zetasizer NanoZS90(Anh). Chuẩn bị mẫu: 0,5g hệ TVNH được phân tán vào khoảng 30 ml nước cất,lắc nhẹ để tạo vi nhũ tương. Nhũ tương tạo được có tốc độ đếm tiểu phân (count rate)
nằm trong khoảng 200-400 kcps.Sử dụng cuvet thuỷ tinh, chỉ số khúc xạ RI là 1,34 và độ hấp thụ là 0,001.
b. Đánh giá khả năng tự vi nhũ hóa của hệ
Tiến hành đánh giá khả năng tự nhũ hóa của hệ theo phương pháp của Holm R. và cộng sự [13]. Cho200ml nước cất vào cốc thử hòa tan của thiết bị thử độ hòa tan Erweka-DT (Đức) sau đó cho 3g hệ TVNH, bật cánh khuấy với tốc độ 50 rpm, nhiệt độ môi trường t0= 37 ± 0,5 0C. Sau khoảng 1 phút hút nhũ tương 1 lần và đo kích thước và phân bố kích thước tiểu phân.