Các loại mẫu đƣợc thu thập từ các địa điểm khác nhau. Nấm men đen có trong các mẫu đƣợc làm giàu trong các môi trƣờng có nồng độ đƣờng cao. Sau đó đƣợc phân lập trên môi trƣờng Malt-Glucose 2Bx có thành phần nhƣ đã nêu ở mục 2.3.
Quy trình tiến hành phân lập như sau:
Nấm men đen có trong mẫu đƣợc làm giàu trong môi trƣờng có nồng độ đƣờng cao. Cho mẫu vào mỗi ống falcon 50ml môi trƣờng đã chuẩn bị, vặn chặt nắp.
Để ống trong tủ nuôi cấy ở 28°C, quan sát trong vòng từ 3-10 ngày.
Khi mẫu có hiện tƣợng lên men, dùng pipet hút 75 l dịch vào đĩa thạch malt-glucose 2Bx 1‰ axit lactic. Dùng que trang vô trùng chang đều lên đĩa thạch thứ nhất, sau đó giữ nguyên que chang chang đều tiếp lên đĩa thạch thứ hai và ba. Nhƣ vậy ta đƣợc các đĩa thạch với nồng độ tế bào giảm dần.
Các đĩa petri đƣợc nuôi cấy trong tủ nuôi cấy ở 28°C trong 7 ngày.
Sau khi nuôi từ 2 đến 7 ngày, lấy các đĩa petri ra quan sát. Các khuẩn lạc nghi ngờ là nấm men đen đƣợc làm tiêu bản và soi dƣới kính hiển vi quang học. Chọn lấy các khuẩn lạc đại diện tiến hành làm sạch và giữ giống.
2.4.2. Làm sạch và giữ giống
Lấy một ít nấm men cần làm sạch và cấy ria lên đĩa Petri chứa môi trƣờng Malt- Glucose 2Bx không có axit lactic, sau đó đem nuôi ở nhiệt độ 28C trong 2-3 ngày. Khi thấy nấm men đã mọc mà không thấy xuất hiện khuẩn lạc khác lạ thì chọn lấy
một khuẩn lạc riêng rẽ và cấy giữ giống vào trong ống nghiệm nút cao su chứa môi trƣờng Malt-Glucose 2Bx. Đem các ống nghiệm nuôi cấy ở nhiệt độ phòng khoảng 1-2 ngày, sau đó cất giữ trong tủ mát. Trƣờng hợp nấm men chƣa sạch (có khuẩn lạc lạ) thì phải làm sạch lại nhƣ cách trên.