- Phản ứng miễn dịch huỳnh quang gián tiếp
2. Nguyên liệu:
4.3. TỔN THƯƠNG VI THỂ CHỦ YẾU CỦA LỢN NGHI MẮC PC
Nghiên cứu các đặc điểm bệnh lý vi thể có vai trò quan trọng trong nghiên cứu bệnh lý học, có có thể giúp chúng ta biết được đích tác động của virus cũng như các tổn thương bệnh lý ở cấp độ mô bào.
Để tiến hành nghiên cứu bệnh tích vi thể chúng tôi tiến hành lấy các cơ quan đã mổ khám khi quan sát bệnh tích đại thể ở trên là: Phổi, gan, thận, lách ruột, tim và hạch (lấy khu vực có bệnh tích đại thể rõ, khu vực trung gian giữa vùng có bệnh tích đại thể rõ và vùng không có bệnh tích đại thể). Ngâm các cơ quan này trong formol 10% rồi mang đi đúc block. Mỗi block chúng tôi tiến hành cắt, nhuộm tiêu bản sau đó chọn ra 1 tiêu bản tốt nhất của mỗi cơ quan để soi kính hiểm vi đọc kết quả bệnh tích vi thể theo từng con.
Để đánh giá sự có mặt của PCV2 trong tiêu bản vi thể: Chỉ cần mỗi block có ít nhất một tiêu bản có xuất hiện tổn thương vi thể do PCV2 được coi là dương tính.
Kết quả nghiên cứu của chúng tôi trên những tiêu bản dương tính điển hình được trình bày bảng 4.4.
Bảng 4.4. Biến đổi bệnh tích vi thể một số cơ quan lợn sau cai sữa mắc PCV2 STT quanCơ Tổn thương vi thể Sung huyết (n = 8) Xuất huyết (n = 8) Hoại tử tế bào (n = 8) Thoái hóa tế bào (n =8 ) Thâm nhiễm tế bào viêm (n =8 ) n(+) % n(+) % n(+) % n(+) % n(+) % 1 Gan 8 100 2 25,0 3 37,5 8 100 7 87,5 2 Phổi 7 87,5 8 100 2 25,0 4 50,0 7 87,5 3 Thận 7 87,5 6 75,0 1 12,5 5 62,5 6 75,0 4 Lách 7 87,5 6 75,0 1 12,5 3 37,5 1 12,5 5 Hạch 6 75,0 7 87,5 0 0 7 87,5 3 37,5 6 Ruột 5 62,5 7 87,5 0 0 1 12,5 5 62,5 7 Tim 2 25,0 4 50,0 0 0 1 12,5 2 25,0 Trong đó:
n - số block nghiên cứu n (+) - số block dương tính
Qua bảng 4.4 cho thấy tỷ lệ các cơ quan bị sung huyết, xuất huyết, thâm nhiễm tế bào viêm, thoái hóa tế bào chiếm tỷ lệ cao. Các bệnh tích khác chiếm tỷ lệ thấp hơn, cụ thể như sau:
* Hạch lympho có bệnh tích vi thể đáng chú ý nhất với sự suy giảm tế bào
lympho, đặc biệt là trong các nang lympho (hình 4.19). Hạch lympho xuất huyết, đứt nát, không còn rõ các cấu trúc nang lympho và không tìm thấy các trung tâm sinh trưởng và miền vỏ, các vách ngăn dày lên. Các tế bào lympho bị thoái hóa và thâm nhiễm tế bào viêm là các tế bào thực bào được minh họa ở hình 4.20; 4.21, đặc biệt trong tế bào chất thường chứa ít nhiều hạt nhỏ, thể vùi.
+ Tổ chức liên kết vỏ hạch lympho có hiện tượng xơ, nát, hồng cầu xâm nhập nhiều tạo thành đám.
+ Miền vỏ hạch lympho có hiện tượng dịch nhầy và tế bào mô hạch thoái hóa lan tràn. Khi lợn bị nhiễm virus circo, virus này xâm nhập vào các tế bào đại thực bào phế nang, kích thước của tế bào này xảy ra sự hòa màng vào tạo ra các tế bào khổng lồ. Đây là nguyên nhân dẫn tới việc tế bào miễn dịch: Đa nhân trung tính, đơn nhân lớn, lympho bào, tương bào được tìm thấy với số lượng rất ít. Ngoài ra còn quan sát thấy xơ phát triển trong miền vỏ hạch, hạch xuất huyết với sự xuất hiện của hồng cầu.
+ Miền tủy: Do hạch bị thoái hóa, toàn hạch chỉ quan sát thấy dịch nhầy và các tế bào tràn lan, dày đặc. Không còn thừng nang ở miền tủy.
Tại hầu hết các tiêu bản đều quan sát thấy hiện tượng dịch nhầy và tế bào mô hạch thoái hóa lan tràn ở các tế bào khổng lồ nhiều nhân hay còn gọi là thể hợp bào được minh họa ở hình 4.23. Các tế bào này có cơ chế hình thành tương tự như các tế bào khổng lồ ở phổi. Xuất hiện các tế bào khổng lồ cũng là nguyên nhân dẫn tới việc các tế bào miễn dịch như: Đa nhân trung tính, đơn nhân lớn, lympho bào, tương bào được tìm thấy với số lượng rất ít. Giải thích này phù hợp với hiện tượng suy giảm của tế bào lympho trong các nang lympho.
* Phổi là cơ quan có biến đổi khá rõ ràng, thường gặp nhất là xuất huyết,
sung huyết và thâm nhiễm tế bào viêm. Tỷ lệ block phổi xuất huyết là 100% với sự tập trung hồng cầu thành từng đám che khuất các tế bào phổi, hồng cầu tràn ngập trong lòng phế nang (hình 4.17). Trong lòng phế quản, phế nang có chứa dịch phù. Nguyên nhân là do thành mạch ở phổi bị tổn thương hoặc bị phá vỡ nên các thành phần của máu chảy ra ngoài lòng mạch quản. Bên cạnh đó là sự sung huyết với các mao quản vách phế nang, phế quản giãn rộng, chứa đầy hồng cầu trong lòng mạch tạo thành một màu đỏ dày đặc.
Các tiêu bản vi thể còn thấy một đặc trưng nữa là sự thâm nhiễm các tế bào viêm như tế bào bạch cầu ái toan, tế bào khổng lồ ở hạch, tế bào gan ở các mức độ khác nhau với sự có mặt của các tế bào đơn nhân lớn, bạch cầu đa nhân trung tính, lâm ba cầu.
Vách phế nang dày lên, điều này phù hợp với bệnh tích đại thể thu được ở trên là viêm phổi kẽ, xuất huyết (hình 4.18) và giải thích cho hiện tượng khó thở gặp ở lợn con sau cai sữa mắc PCV2: Vách phế nang dày lên làm diện tích trao đổi khí giảm cùng với dịch phù trong lòng phế quản, phế nang làm cho hô hấp của con vật gặp khó khăn.
* Gan có vị trí xung yếu và có chức năng rất phức tạp nên nó rất dễ bị tổn
thương, diễn biến quá trình bệnh lý của gan phụ thuộc vào thời gian của các tác nhân gây bệnh vào cơ thể. Sự tổn thương của gan tập trung vào tế bào gan như sung huyết, thoái hóa tế bào và thâm nhiễm tế bào viêm.
Các tiêu bản gan trong nghiên cứu của chúng tôi thấy: 100% tiêu bản sung huyết và thâm nhiễm tế bào viêm, thoái hóa tế bào và xuất hiện viêm u hạt hay tế bào khổng lồ như nghiên cứu của Chae (2004), được minh họa ở hình 4.13 và 4.14.
+ Tổ chức liên kết vỏ không biến đổi nhiều, hồng cầu xuất hiện nhiều do gan bị xuất huyết nặng.
+ Các tiểu thùy gan, các tế bào gan bị thoái hóa, hoại tử, màng tế bào không còn, nguyên sinh chất và nhân lan tràn; cấu trúc nan hoa xe đạp bị phá hủy, chỉ còn số ít có thể quan sát được. Vùng trung tâm tiểu thùy gan sung huyết, thâm nhiễm tế bào viêm. Tĩnh mạch trung tâm tiểu thùy gan sung huyết, thâm nhiễm tế bào viêm. Tĩnh mạch trung tâm tiểu thùy chứa đầy hồng cầu. Một số tiêu bản gan quan sát được hiện tượng xuất huyết rất nặng, hồng cầu xuất hiện với số lượng rất lớn, chèn ép các tế bào gan, phá hủy cấu trúc bình thường của tiểu thùy gan, bè Remark hay cấu trúc nan hoa và cả tĩnh mạch trung tâm tiểu thùy đều bị phá vỡ hoàn toàn. Tế bào Kuffer xuất hiện nhiều.
+ Quãng cửa bị các tế bào xơ phát triển, khó quan sát được các cấu trúc động mạch, tĩnh mạch và ống mật. Một số tiêu bản quan sát được hiện tượng thành ống dày lên, trong lòng chứa dịch nhầy.
* Lách có hiện tượng sung huyết và thâm nhiễm tế bào viêm, đặc biệt có sự xuất hiện của tế bào khổng lồ (hình 4.21), một dấu hiệu đặc trưng của bệnh do PCV2 gây ra như nghiên cứu của Chae (2004). Tế bào khổng lồ được hình thành do sự hợp nhất bào tương của các tế bào đại thực bào. Trong một tế bào có chứa nhiều nhân, hình thái tế bào không có quy tắc, có thể là hình tròn hoặc bầu dục. Thường có 2 loại tế bào khổng lồ: tế bào langhans với sự sắp xếp nhân quanh ngoại vi bào tương và tế bào khổng lồ dị vật có nhân sắp xếp lộn xộn. Tổn thương xuất hiện tế bào khổng lồ chứng tỏ tổn thương đó là tổn thương mãn tính.
* Thận sung huyết, mạch quản chứa đầy hồng cầu. Thâm nhiễm tế bào
viêm. Tế bào thận bị thoái hóa. Thận xuất huyết, hồng cầu nằm ở các kẽ thận. Khi xâm nhập và gây bệnh tích trên cơ thể lợn, một trong số các tế bào đích của virus PCV2 là tế bào biểu mô ống thận. Đây có thể là nguyên nhân khiến toàn bộ ống thận viêm thoái hóa. Viêm thoái hóa là một dạng tổn thương cho cấu trúc tế bào biến đổi cả về lượng và chất, kèm theo chức năng tế bào không bình thường do rối loạn chuyển hóa các chất ở tế bào gây ra.
* Ruột xuất huyết, sung huyết cao; lông nhung ruột bị đứt nát, các tế bào
biểu mô ruột thoái hóa. Thâm nhiễm tế bào viêm: Bạch cầu đa nhân trung tính (hình 4.24)
* Cơ tim giãm rộng (thoái hóa cơ tim), là biểu hiện có thể giải thích là do
rối loạn hô hấp, quá trình viêm ở phổi làm cho lợn con mắc PCV2 khó thở, suy hô hấp. Để đáp ứng nhu cầu oxy cho hô hấp, vận chuyển tới các mô bào thì tim phải tăng cường co bóp, hoạt động bù. Lâu dần dẫn tới viêm cơ tim, nên có hiện tượng thâm nhiễm tế bào viêm, cơ tim giãn rộng (hình 4.16).