9. Tình hình nhiễm HPV tại Việt Nam và trên thế giới 1 Tình hình nhiễm HPV trên thế giớ
3.2.1.1.Kết quả xác định genotype HPV bằng phương pháp DNA microarray
Tiến hành khuếch đại DNA HPV từ bệnh phẩm cổ tử cung bằng phản ứng Multiplex PCRbởi 23 cặp mồi đã được thiết kế đặc hiệu với 23 genotype HPV có thể được phát hiện từ bộ sinh phẩm GeneSquare HPV Typing DNA Microarray Kit. Sản phẩm Multiplex PCR tiếp tục được lai với các kháng thể đặc hiệu nhờ enzym gắn Streptavidin-Alkaline Phosphatase đã đánh dấu huỳnh quang Cy3 fluorescence. Phức hợp lai DNA HPV được phát hiện trên máy microarray scan GenePix4000B ở bước sóng 532nm, cường độ laser 100%, vị trí Focus 30 μm và kích thước điểm ảnh 10 μm .
Hình 3.2. Kết quả xác định genotype HPV bằng kỹ thuật DNA microarray Nhận xét:
+ Trong tổng số 246 mẫu HPV DNA dương tính, 229 mẫu đã xác định được genotype HPV và 17 mẫu không xác định được genotype HPV bằng kỹ thuật lai trên DNA chíp (DNA microarray) với Kít GeneSquare HPV Typing DNA Microarray. Như vậy, 17 mẫu có HPV DNA dương tính nhưng chưa xác định genotype HPV cần tiếp tục xác định genotype HPV bằng phương pháp giải trình tự sau dòng hóa.
+ Hình ảnh phát màu huỳnh quang của từng genotype HPV trong các giếng rõ ràng, sắc nét, không có hiện tượng lai giữa các giếng. Kết quả này cho phép xác định chính xác các genotype HPV.
3.2.1.2.Kết quả xác định genotype HPV bằng phương pháp giải trình tự gen sau tách dòng.
Tiến hành ghép trực tiếp đoạn gen L1 đã được khuếch đại bằng phản ứng PCR sử dụng mồi GP5+/GP6+ original và GP5+/GP6+ modifile của 17 mẫu HPV DNA dương tính nhưng không xác định được genotype HPV bằng phương pháp DNA microarray vào vectơ tách dòng pCR®2.1 và biến nạp plasmid vào tế bào khả biến E.coli chủng
sạch DNA plasmid và tiến hành giải trình tự gen. Hình ảnh kết quả giải trình tự gen được thể hiện trong phần phụ lục.
Bảng 3.4. Kết quả xác định genotype HPV bằng giải trình tự gen sau dòng hóa
TT Mã bệnh nhân HPV DNA Kết quả giải trình tự gen
1. HPC-005-09 Dương tính HPV-26, HPV-622. HPV-2-024 Dương tính HPV-81 2. HPV-2-024 Dương tính HPV-81 3. HPV-2-043 Dương tính HPV-90 (JC9710) 4. HPV-2-045 Dương tính HPC-70 5. HPV-2-068 Dương tính HPV-JBE2 6. HPV-2-087 Dương tính HPV-70 7. HPV-2-090 Dương tính HPV-81 8. HPV-2-125 Dương tính HPV-CP8304 9. HPV-2-134 Dương tính HPV-26 10. HPV-2-171 Dương tính HPV-JBE2 11. HPV-2- 209 Dương tính HPV-70, HPV-81 12. FSW-10-045 Dương tính HPV-CP8304 13. FSW-10-095 Dương tính HPV-90 14. FSW-10-125 Dương tính HPV 81