3. Ý nghĩa khoa học của ựề tài
1.2.2 Xác ựịnh type virus LMLM bằng phương pháp ELISA
Có nhiều phương pháp chẩn ựoán bệnh LMLM, nhưng phương pháp tương ựối thông dụng hiện nay, cho kết quả nhanh và chắnh xác cao là
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 18 phương pháp ELISA gián tiếp phát hiện kháng nguyên virus LMLM (Tô Long Thành, 2000).
- Phương pháp này thực hiện cần nhất phải là có một bộ KIT ELISA kháng nguyên, một số dung dịch bổ trợ khác và máy ựọc ELISA.
- Kết quả chẩn ựoán phụ thuộc vào một quá trình bao gồm: + Phương pháp lấy mẫu bệnh phẩm
+ Bảo quản và bao gói bệnh phẩm + Kỹ thuật xét nghiệm
Nguyên lý:
Phản ứng ELISA dùng kháng thể hoặc kháng kháng thể gắn enzym cho kết hợp trực tiếp hoặc gián tiếp với kháng nguyên, rồi cho cơ chất vào.
Nếu kháng thể tương ứng với kháng nguyên thì kháng thể hoặc kháng kháng thể gắn enzym không bị rửa trôi, enzym sẽ phân giải cơ chất tạo lên màu, khi có màu trong quang phổ kế thì sẽ ựịnh lượng ựược mức ựộ phản ứng.
Phân loại phản ứng ELISA: ựược phân thành ba loại chắnh như sau
- Phản ứng ELISA trực tiếp (direct ELISA): dùng kháng thể gắn enzym ựể xác ựịnh kháng nguyên nghi cố ựịnh trên ựĩa chuyên dụng.
- Phản ứng ELISA gián tiếp (indirect ELISA): dùng kháng nguyên chuẩn và kháng kháng thể gắn enzym ựể phát hiện kháng thể nghi.
- Phản ứng Sandwich ELISA gồm 2 loại:
+ Phản ứng Sandwich ELISA trực tiếp (direct Sandwich ELISA): kháng nguyên chuẩn ựược kẹp giữa kháng thể chuẩn và kháng thể gắn emzym.
+ Phản ứng Sandwich ELLISA gián tiếp (indirect Sandwich ELISA): kháng nguyên chuẩn ựược kẹp giữa kháng thể chuẩn và kháng thể nghi, sau ựó kháng thể nghi ựược nhận diện bằng kháng kháng thể loài gắn enzym.
Ứng dụng phản ứng ELISA trong chẩn ựoán bệnh LMLM:
Phản ứng ELISA phát hiện kháng nguyên virus LMLM:
Phương pháp ELISA thường ựược sử dụng ựể xác ựịnh sự có mặt của kháng nguyên virus LMLM trong mẫu bệnh phẩm lấy từ gia súc bị nghi ngờ
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 19 nhiễm virus. Nếu mẫu ựược lấy từ nơi chứa ắt virus hay chất lượng mẫu không ựảm bảo thì trước khi ựịnh type virus bằng phương pháp ELISA sẽ tiến hành nuôi cấy virus trên môi trường tế bào sau ựó phân lập virus từ môi trường nuôi cấy.
Phản ứng ELISA phát hiện kháng thể kháng virus LMLM:
- Phương pháp ELISA cũng ựược sử dụng ựể phát hiện và giám ựịnh các serotype của virus LMLM trong huyết thanh gia súc. Trong phản ứng, mỗi ựĩa ELISA chỉ làm với một type virus LMLM chuẩn, ựể phát hiện kháng thể nghi trong huyết thanh của gia súc cần chẩn ựoán.
- Có thể sử dụng cả ba phương pháp ELISA ựể phát hiện kháng thể kháng virus LMLM. Nhưng hiện nay phương pháp Sandwich ELISA gián tiếp thường ựược sử dụng phổ biến hơn cả. Bởi vì, kĩ thuật ELISA này có thuận lợi hơn hẳn các phản ứng thông thường khác do có tắnh ựặc hiệu rất cao, rất nhạy lại kinh tế vì nhiều ứng dụng:
- Trong chẩn ựoán phát hiện bệnh, với phương pháp Sandwich ELISA gián tiếp chúng ta có thể phát hiện và ựịnh type kháng nguyên virus LMLM từ mẫu bệnh phẩm biểu mô, dịch tiết hay có thể phát hiện kháng thể và giám ựịnh serotype virus LMLM từ mẫu bệnh phẩm huyết thanh.
- đối với gia súc ựã tiêm phòng vacxin, ựể ựánh giá khả năng ựáp ứng miễn dịch của gia súc sau tiêm phòng cũng như hiệu quả sử dụng vacxin người ta cũng sử dụng phương pháp Sandwich LISA gián tiếp ựể ựịnh lượng kháng thể kháng virus LMLM.