+ Phõn tớch As tổng số và một số kim loại nặng khỏc trong đất [40]
Cỏc mẫu đất được lấy khoảng 200 g bằng một xẻng chuyờn dụng sạch, đựng trong tỳi búng kớnh và mang về phũng thớ nghiệm. Mẫu đất được phơi khụ tự nhiờn trong khoảng 5 ngày, nghiền, rõy qua rõy 1 mm và được cất giữ trong tỳi búng kớnh màu đen để trong tủ lạnh 4oC cho đến lỳc phõn tớch. Phỏ hủy mẫu kim loại nặng trong đất được thực hiện theo phương phỏp US EPA 3051. Lấy 1g±1mg mẫu đất cho vào ống li tõm, thờm 2,35 ml HNO3 65%, 7 ml HCl 37 % và lắc hỗn hợp này rất cẩn thận để axit thấm đều vào mẫu. Sau đú cho ống này vào hệ thống phản ứng lũ vi súng tăng tốc (DAP-100+, Berghof Products Instruments, Germany). Mẫu phõn hủy được thực hiện bằng một chu trỡnh như sau: mẫu được phõn hủy trong 8 phỳt và đẩy nhiệt độ lờn đến 140oC, giữ tiếp mẫu ở nhiệt độ này trong vũng 15 phỳt, sau đú làm lạnh ở nhiệt độ phũng. Toàn bộ hỗn hợp sau khi phỏ mẫu được cho vào một chai nhựa chịu được axit và định mức tới 10 ml bằng nước cất. Hỗn hợp cỏc kim loại nặng As, Pb, Cd, Zn trong dung dịch đú được xỏc định bằng phương phỏp quang phổ hấp thụ nguyờn tử (AAS, AA- 6800 Shimadzu, Nhật Bản) và phương phỏp quang phổ Plasma ghộp nối khối phổ
+ Phõn tớch As tổng số và một vài kim loại nặng khỏc trong thực vật [40]
Trong cỏc mẫu thu được ngoài khu vực khai thỏc mỏ của Thỏi Nguyờn, một mẫu thực vật là hỗn hợp của ba cõy cựng loài được phõn tớch hàm lượng KLN (As) trong thõn và rễ của chỳng. Mẫu thực vật thu về được rửa thật sạch qua vũi nước chảy để loại bỏ toàn bộ đất và bụi bẩn, sau đú được trỏng bằng nước cất và được sấy trong tủ sấy ở 60oC trong 3-5 ngày. Phỏ hủy mẫu thực vật để phõn tớch KLN cũng được thực hiện bằng phương phỏp US EPA 3051 với một số thay đổi, phần rễ và phần thõn của cõy được tỏch riờng biệt, một khối lượng mẫu khụ 400mg được bỏ vào ống li tõm, bổ sung vào 5 ml HNO3 65%, 3 ml H2O2 30 % và lắc hỗn hợp này rất cẩn thận và đợi ớt nhất 20 phỳt trước khi đúng nỳt. Phõn hủy mẫu bằng lũ vi súng. Sau khi phỏ hủy mẫu, dung dịch cú KLN được làm lạnh tới nhiệt độ phũng, định mức thành 50 ml bằng nước cất và chuyển sang chai nhựa chịu được axit. Hỗn hợp cỏc kim loại nặng As, Pb, Cd, Zn trong dung dịch đú được xỏc định bằng phương phỏp Quang phổ hấp thụ nguyờn tử (AAS, AA- 6800 Shimadzu, Nhật Bản) và phương phỏp Quang phổ phỏt xạ Plasma (ICP-MS, ELAN 9000, Perkin Elmer, Mỹ)
Cỏc mẫu phõn tớch về hàm lượng As trong cõy và đất đều được kiểm tra bằng mẫu tham khảo TORT-2 do Canada sản xuất.
+ Xỏc định hàm lượng As linh động trong đất bằng CH3COONa
Lấy 1 g đất cú kớch thước nhỏ hơn 250àm cho vào ống li tõm dung tớch 50 ml. Bổ sung vào ống 20 ml dung dịch CH3COONa 1M, điều chỉnh về pH = 5 rồi được lắc trờn mỏy lắc trong 1 h và sau đú li tõm ở 8000 vũng / phỳt trong 5 phỳt. Dung dịch trờn được lọc qua màng lọc. Giữ dung dịch này trong tủ lạnh ở 4oC và xỏc định ngay As bằng phương phỏp AAS.
Cỏc chỉ tiờu lý húa của đất được xỏc định theo những phương phỏp thụng dụng hiện nay trong cỏc phũng thớ nghiệm phõn tớch đất [18],[34], [98].
2. pH (KCl) được xỏc định bằng phương phỏp cực chọn lọc hyđro (đo bằng mỏy đo pH Toledo 320 D)
3. Nitơ tổng số được xỏc định bằng phương phỏp Kjeldahl
4. Phốtpho tổng số được xỏc định bằng phương phỏp so màu quang điện sau khi phỏ hủy mẫu bằng hỗn hợp H2SO4 và HClO4 (đo trờn mỏy UV-VIS 2450)
5. Thành phần cơ giới đất được xỏc định theo phương phỏp Katrinski
6. Dung tớch trao đổi cation của đất (CEC) được xỏc định theo phương phỏp Schachtchabel
7. Chất hữu cơ của đất được xỏc định theo phương phỏp Walkley - Black 8. Phương phỏp xỏc định dạng As linh động trong đất [88]
2.4.4. Phương phỏp đỏnh giỏ thụng qua hệ số BF
Hệ số BF được dựng để đỏnh giỏ khả năng hấp thu As của dương xỉ ở những mụi trường đất khỏc nhau. Đõy là hệ số được tớnh bằng tỷ lệ giữa hàm lượng As trong phần trờn mặt đất của cõy so với hàm lượng As trong mụi trường nơi cõy mọc. Hàm lượng As được tớnh theo khối lượng khụ. Loài “siờu tớch tụ” As là loài cú BF > 1[39], [45]
Theo Reeves và Baker (2000) [46], cỏc loài thực vật siờu tớch luỹ là những thực vật cú chứa hơn 0,1% cỏc nguyờn tố như Ni, Co, Cu, Cr, As, Pb hoặc 1% Zn trong thõn của chỳng ở trọng lượng khụ, khụng phụ thuộc vào hàm lượng kim loại ở trong đất.
2.4.5. Phương phỏp phõn tớch và xử lớ số liệu
Cỏc kết quả nghiờn cứu được tổng hợp và xử lý theo cỏc phương phỏp thống kờ toỏn học, bao gồm: phương phỏp thống kờ mụ tả (Descriptive Statistics), phõn tớch
phương sai ANOVA R. Phõn tớch phương sai là cụng cụ chủ yếu để phõn tớch số liệu theo dừi ảnh hưởng của cỏc nhõn tố thớ nghiệm.
Dựng LSD0,05 là sự sai khỏc nhỏ nhất cú ý nghĩa để so sỏnh. Độ chớnh xỏc (độ tin cậy) được chọn là 95%.
Cỏc số liệu về trung bỡnh cộng, độ lệch chuẩn được xử lý trờn chương trỡnh Excel 5.0, với cỏc cụng thức để xử lớ cỏc số liệu như sau:
- Giỏ trị trung bỡnh cộng: 1 1 n i i X X n - Độ lệch chuẩn: 2 1 1 n i i X X S n