I. Kĩ thuật di truyền:
Vector chuyển gen
Vector chuyển gen là phân tử AND cĩ khả
năng tự nhân đơi, tồn tại độc lập trong tế bào và mang được gen cần chuyển.
Cĩ các loại vector chuyển gen:
Plasmid nằm trong tế bào chất của vi khuẩn, là
AND vịng, mạch kép. Trong tế bào vi khuẩn cĩ chứa hàng chục plasmid.
Vector chuyển gen cũng cĩ thể là thể thực
khuẩn λ (phage λ), đĩ là virus lây nhiễm vi khuẩn, đoạn AND của tế bào cho (gen cần cấy) được
gắn vào AND của nĩ thành AND tái tổ hợp.
Khâu thứ 3: Chuyển ADN tái tổ hợp vào tế bào nhận.
Phương pháp biến nạp: để đưa AND tái tổ hợp vào trong tế bào, các nhà khoa học cĩ thể dùng muối CaCl2 hoặc dùng xung điện để làm dãn màng sinh chất của tế bào. Khi đĩ, phân tử AND tái tổ hợp dễ dàng chui qua màng vào trong tế bào.
Trường hợp thể truyền là phage, khi chúng
mang gen cần chuyển và xâm nhập vào tế bào vật chủ (vi khuẩn) được gọi là phương pháp tải nạp.
Khi đã chuyển được vào tế bào chủ, AND tái tổ
hợp điều khiển tổng hợp loại protein đặc thù đã được mã hĩa trong nĩ.
Tách dịng tế bào chứa AND tái tổ hợp:
Để nhận biết được tế bào vi khuẩn nào đã nhận
được AND tái tổ hợp, các nhà khoa học phải chọn thể truyền cĩ các dấu chuẩn hoặc các gen đánh dấu. Nhờ đĩ mới cĩ thể nhận biết sự cĩ mặt của AND tái tổ hợp.
Gen đánh dấu cĩ thể là gen kháng kháng sinh.
Ví dụ, tế bào nhận là loại mẫn cảm với chất kháng sinh (như tetracycline).
Khi plasmid đã được chuyển gen cĩ gen kháng
với tetracycline vào trong tế bào mẫn cảm, nĩ sẽ trở nên kháng được thuốc kháng sinh.
Do đĩ, khi bổ sung tetracycline vào mơi trường
nuơi, tất cả các tế bào khơng chứa AND tái tổ hợp sẽ bị chết, trong bình nuơi lúc này chỉ cịn lại các tế bào cĩ chứa AND tái tổ hợp. Dịng tế bào này
Cơng nghệ di truyền:
Cơng nghệ di truyền hay cịn gọi là cơng nghệ gen là một ngành kỹ thuật hay một lĩnh vực cơng nghệ về quy trình ứng dụng kỹ thuật gen, gồm 4 bước:
Tạo ra các đoạn AND mang gen mong muốn và
tách các phân tử ADN dùng làm vector.
Tạo ADN tái tổ hợp bằng cách nối.
Đưa AND tái tổ hợp vào tế bào chủ để nhân lên
(tách dịng).
Thành tựu nổi bật nhất trong ứng dụng cơng
nghệ di truyền là khả năng cho tái tổ hợp thơng tin di truyền giữa các lồi đứng xa nhau trong bậc
thang phân loại mà lai hữu tính khơng thể thực hiện được.
Cơng nghệ gen được ứng dụng nhằm tạo ra các
sinh vật chuyển gen.