ilịch nuôi I'.IV. chúng CÓI dã xư dụng các plurơng pháp sãc kỷ theo các con đưung sau
i
ỉ)iclì nuôi cấy vi khuàn
l > >11 p k l i 61 )ich c ô i l ãc ! 0 lán 1 )ich c ô i l ãc ! 0 lán I s.ìc k> c ó t S r p l u d r x Í J - l f J 0 < 'ác phàn (loan có lio.it lính en /vm I S ủ t k ' I | i i a l ó i IH". \ K S e p h ; u U ' \ A Õ O Dịch nuôi c.ív vi kluuin I S í í c k ỷ CÔI D E . V K S c p h . u l c x A - 5 0 V
Các phán đoan có hoạt lính en/.vm
('. 1 c 1‘hj.il (.loạn có hoai tinh enzvm
ftũ \j7 m h jì S õ ũ v u m h l
Tronụ hai quy ninh tinh sạch, quy trinh 2 dơn giản hon và cho kẽt qua tươm; dm mi! với quy trinh 1. Vì vây. quy trình 2 đã được lưa chọn đế tinh sạch proieina/. cỏ Iioim dịch nuôi cấy vi khuân Xcnnrhabdưs sp. XS4. Kết quà trên hình 1 cho thay: các PÍÌ.ÌI1 tlo.m Li') hoạt tính pmteinaz chù yếu là nhữỉiu phàn đoạn khõne 1'iap phụ Ui-n cột và i!u>v rua kill’ll cọt trone moi sò lần rứa đáu tién bãnc đêm Tris-HCI 2 0m M , [>il 8,0.
hi'k'iiuz. vi .í (lược lách ra khói các protein hấp phu trên cột.
: o 30 P h a n í ỉ n a n 40 - ] - 0. 8 ■ 0 6 - O A - 0.2 - 0 5 ("1 l l i nl i 1 :i \i■>: ■ " \ - ■: I:: n e : :r.M. ì i !_ ■ I '- 1 : 11 Hi ! 1.1. > M t
; ::L'.n ! v,n: 3 ,T.i . 1 íJi:■ r:i.: ■
Di iru v c n hoc Vd lin g (Jung. C h u yê n san C ons nghê Sinn hoc
I G c n c u c s a n d A p p lic a tio n s, S p c c u l Issue Biotechnology
2. f c g h i t ’ii c ử u l í n h c h ấ t c ủ a p r o l c i n a z
Tính chill cua p r o t e i n a z đ ã ciược x á c đ ị n h v ớ i c a d ị c h n u ò i c ã \ c h ư a l i n h s . t ch ( X S ) v à c á c p h á n đ o ạ n c ó h o a i lính p r o t e i n a z d ư ợ c d o n lại s a u kill qu. i CỐI D E A Ỉ : S c p h a d c x A -5 0 fXS A - 5 0 ) .
2.1. p ỉ l thích hợp c ủ a p r o te in a z
Sử dụng các đệm có nóng độ 0.2M để xác định pH thích hạp của proicinaz dã cho iliíìy: v ớ i x s , e n z y m h o ạ t đ ộ n c manh ờ p H 8. ờ p l ! 10. h o ạ t d ỏ e n z v m <jiàm m a n h
chỉ còn khoáng 309? so với hoai độ cực đai. Với mau x s A-50. hoai dò cua enzvm (.lụt
c ự c d ạ i ờ p H 8 - 9 . Tại p H 7 . hoạt đ ộ c h i bằne khoang 6 S s o \'ới h o ạ t đ õ c ự c d ạ i ( h ì n h 2) . K ế t q u à n à y c ũ n g p h ù h ợ p v ớ i c á c nghiên c ứ u k h á c v é p r o i e i n u z c ù a VI k h u ẩ n c ỏ n e sinh với luyến ưùng [1 4.15.16 ].
Hình2: Ảnh hường của pH đ ín hoat độ proteinaz của vi khuẩn cộng sinh với tuyến trùng
Xenorhabdits sp. XS4 ,
2.2. Ả n h h ư ở n g các c h ấ t ức c h ế đ ặ c hiệu n h ỏ m đến h o a i dô cuzyin
Các chất ức c h ế đặc hiệu nhóm được sử dụng g ồ m :'P M S F , pCMB. E D T A , o- phenanthroline \’ới n ồ n s độ cuối cùng trong hỗn hợp phản ứng bằng lO'-’.M. Két qua cho thôY enzvm bi ức ché m anh bỏi E13TA và o-phciKínthrolinc, hoẠt dọ chi con kJ~icuin2
’’09c so với đối chứn° (bản2 1 ). ED T A và o-phenanthroline là hai chat ưc chê đặc hiệu với nhóm protcinaz kim loại.
B ans): Anh huờna của các chất ức chế đặc hiệu nhóm lèn hoạt độ proteinaz cua VI khuẩn Xrnorliabdits sp. XS-Í
... ■ J ( i, r . I i s h c Smh ili’C l)
' r ■ ■ :• i ■ ••••.'•ri.’ f.’i v r v . Í / > .. . « p K O ie c h r .c ic " :
2..Ỉ. Ì i : h Inrun” C l i n i o n k i m I t i a i h o á t r i h a i í ỉ ế n h o a t d o e n z v t t i
i ; r.j so s ion kim kụti hóa trị hai được thứ M s :". M n ‘:. F c:*. Co'*. c. u ' \ Z : r \ I I : ’ J . cn/.ym bị ức chẽ m a n h bời H a: ' (ức c h ế trẽn 9 0 ^ 1 . sau đó đèn Cir* và /.IV'
(iK ché khoáng 70 -S 0f r), neưac lai các ion Ca:\ M s :* và M n:* dã làm tănẹ hoai ilô e : i / \ ĩ ' -' IV1 nhát là Ca .
]Ì.U1.:2: Aiih luroìie cùa các 1011 kim loai hoa (li hai đèn hoạt dò protemu/ a i a ,v< ' ■:■!! Iu.\ ■/-' XS4
lon kim loai X óne (Jộ cuòi ciine (Mì