Hoạt tính kháng khuẩn của polyphenol được xác định theo phương pháp xác định đường kính vòng vô khuẩn.
Nguyên lý
Dịch chiết phụ phẩm súp lơ xanh được nhỏ vào các lỗ thạch trong môi
trường nuôi cấy, dưới tác dụng của hoạt chất kháng khuẩn sẽ ức chế sự phát
triển của vi khuẩn có sẵn trong môi trường. Đo đường kính vòng vô khuẩn.
Từ đó đưa ra kết luận về khả năng kháng khuẩn của phụ phẩm súp lơ.
Tiến hành
Phương pháp hoạt hóa, chuẩn bị dịch vi khuẩn
Vi khuẩn được tồn trữ trong ống thạch nghiêng và bảo quản lạnh. Từ
ống tồn trữ, cấy 1 vòng que cấy vào ống nghiệm có chứa 1ml nước muối sinh lý ( Nước muối sinh lý dùng làm tan sinh khối của vi khuẩn).
Chuẩn bị môi trường
Cân 2,25g môi trường PCA pha với 100ml nước cất, lắc đều và cho vào
bình tam 100ml, hấp khử trùng ở 1210C/15 phút. Để thạch nguội xuống
khoảng 40-450C, đổ 25ml môi trường vào mỗi đĩa pettri.
Chuẩn bị dịch chiết
Tiến hành trích ly dịch theo những thông số tối ưu. Sử dụng ngay dịch chiết sau khi trích ly, không pha loãng.
Dùng que cấy lấy một lượng vi khuẩn và cho vào ống nghiệm có chứa nước muối sinh lý, lắc đều cho tan hết.
Dùng micropipet với đầu típ vô trùng, chuyển 200μl nước muối vi
khuẩn vào các đĩa petri. Tiến hành cấy trang và để yên 15 phút.
Sau đó tiến hành đục lỗ thạch với đầu típ vô trùng, đường kính 6mm. Nhỏ 110μl ethanol 80% vào lỗ thạch đối chứng, và nhỏ 110μl dịch chiết vào 3 lỗ thạch ở mỗi đĩa pettri. Sau đó chuyển các đĩa petri đi ủ ở nhiệt độ phòng trong 24h.
Đọc kết quả
Sau 24h đọc kết quả.
Hoạt tính kháng khuẩn của dịch chiết từ phụ phẩm súp lơ được tính
bằng:
D-d
Trong đó: D: đường kính vòng vô khuẩn (mm). d: đường kính lỗ thạch (mm).
Bố trí thí nghiệm
Mỗi đĩa pettri trang một chủng vi khuẩn. Trên đĩa pettri, tiến hành đục 4 lỗ, đường kính lỗ 6mm, mỗi lỗ cách nhau ít nhất 20mm. 03 lỗ được truyền
dịch chiết của phụ phẩm súp lơ, lỗ thứ 4 (trung tâm) làm đối chứng. Thí
nghiệm lặp lại 3 lần.