Xác định hoạt tính chống oxy hóa bằng phương pháp bẫy gốc tự do DPPH ( Zhang, D., & Hamauzu, Y.,2004).
Nguyên tắc
Các chất có khả năng kháng oxy hóa sẽ trung hòa gốc DPPH bằng cách cho hydrogen, làm giảm độ hấp thụ tại bước sóng cực đại và màu của dung dịch phản ứng sẽ nhạt dần, chuyển từ tím sang vàng nhạt.
Phản ứng trung hòa gốc DPPH của các chất kháng oxy hóa được minh họa
bằng phản ứng được mô tả sau:
Hình 2.10 Phản ứng trung hòa gốc DPPH Chuẩn bị dịch mẫu:
+ Trong phần so sánh hoạt tính chống oxy hóa của dịch chiết polyphenol từ phụ phẩm cây súp lơ với các loại cải khác thì dịch mẫu được sử dụng là dịch chiết thô (được chuẩn bị theo sơ đồ qui trình như trong hình 2.8) được pha loãng 20 lần bằng ethanol 80%.
+ Trong phần so sánh hoạt tính chống oxy hóa dịch chiết polyphenol từ phụ phẩm súp lơ với chất chuẩn (ascorbic acid) thì dịch chiết thô được chưng cất đuổi dung môi thu cao polyphenol. Sau đó cân 3,6mg cao polyphenol này
hòa tan trong 30ml cồn 80% để được dung dịch mẫu gốc có nồng độ
120 g/ml. Tiếp tục pha loãng dịch mẫu gốc thành dung dịch mẫu sử dụng ở
các nồng độ 120, 90, 60, 30, 12 g/ml.
- Chuẩn bị dung dịch chuẩn: Cân 3.6 mg L-acid ascorbic, sau đó pha
dịch chuẩn gốc thành dung dịch chuẩn sử dụng ở các nồng độ 120, 90, 60, 30, 12 g/ml.
- Chuẩn bị dung dịch DPPH: Cân 0.00197 g DPPH và hòa tan vào trong
50 ml methanol để được nồng độ 0.1mM.
Tiến hành
Dùng pipet lấy 1 ml dịch mẫu cho vào ống nghiệm. Sau đó thêm
3ml DPPH 0.1mM vào, lắc đều. Sau khi ủ trong bóng tối 30 phút tiến hành đo OD ở bước sóng 517nm.
Đường chuẩn tiến hành tương tự, thay 1ml dịch mẫu là dịch chuẩn ascorbic acid.
Mẫu kiểm soát gồm 1 ml nước cất +3ml DPPH.
Mẫu trắng là mẫu sử dụng 4ml methanol 80%
Tính kết quả
Hoạt tính kháng oxy hóa (%) được tính như sau:
1 2 1 ) *100 ( OD OD OD H
Trong đó: OD1: Giá trị mẫu kiểm soát
OD2: Giá trị của mẫu phân tích
Giá trị IC 50 của chuẩn và mẫu sẽ được ngoại suy từ đồ thị đường chuẩn.