- Nhuộm vỏ nhầy (Capsule): phương pháp nhuộm âm bản, phương pháp Đỏ Congo và phương pháp dùng Tím kết tinh (Crystal violet).
c. Các phương pháp dựa trên các phản ứng sinh hóa:
2.4.3.3. Nghiên cứu lactase từ nấm sợ
Điển hình là từ Trichoderma sp, Aspergillus sp, Fusarium sp. Đặc trưng chung là các enzyme này là ngoại bào nên quy trình tinh sạch khá dễ dàng. Phần lớn là enzyme chịu nhiệt và chịu pH acid yếu (3.0-5.0). Bên cạnh ưu điểm trên thì nhược điểm lớn nhất là hoạt tính riêng của enzyme khá thấp so với vi khuẩn và nấm men. Lactase từ Aspergillus sp được nghiên cứu nhiều hơn cả đó là các enzyme từ loài Aspergillus niger và Aspergillus oryzae. Một vài nghiên cứu tiêu biểu sau:
Park, Y.K và cộng tác viên (1979) [45] đã tinh sạch lactase từ Aspergillus oryzae bằng kết tủa amon sulphate và sau đó là sắc kí cột thu được enzyme khá ổn định pH 3.0-8.0 và hoạt động tốt ở nhiệt độ 500c. Tuy nhiên enzyme này trong môi trường bò sữa đã giảm hoạt tính đáng kể.
Sanjeev Agrawal và cộng tác viên (1982) [43] đã phân lập được 48 chủng nấm sợi có hoạt tính lactase, trong đó có 8 chủng thuộc Aspergillus sp. Nghiên cứu cũng cho thấy là enzyme ngoại bào và thuộc tính enzyme thuộc dang chịu nhiệt
Gần đây Zhang W và công tác viên (2005) [40] đã chuyển gene lactase của Aspergillus candidus vào nấm men Pichia pastoris, tinh sạch enzyme và thu được enzyme có trọng lượng 113kDa, hoạt tính là 3600U/mg, tối ưu ở pH 5.2 và nhiệt độ 600C.
Đối với lactase từ Trichoderma sp, Francisco J. Castillo và cộng sự (1984) [42]đã nuôi chìm
Trichoderma reesei Rut-C30 trong môi trường chứa lactose thu được hoạt tính enzyme ngoại bào 27.3U/L. Hoạt tính enzyme đạt được cưc đại ở 600c và pH 4.6. Loại lactase này được gọi là lactase axit và phù hợp dùng trong môi trường có pH tương đối axit như nước chiết rút từ len men phomai.
Lactase cũng có thể tách chiết từ nấm sợi Fusarium sp. Macris BJ, Markakis P (1981)[44] đã thu nhận enzyme ngoại bào từ chủng Fusarium moniliforme nuôi bằng nước chiết rút từ sản xuất phomai (whey) và tủa bằng amonium sulphate. Kết quả là enzyme có hoạt tính tốt nhât ở pH 3.8 và nhiêt độ 500c. Tương tự như với enzyme từ Trichoderma sp, enzyme này thuộc dạng lactase axit và thích hợp để thủy phân lactose trong nước chiết. Trong điều kiện thích hợp, 10 đơn vị hoạt tính enzyme có thể thủy phân 50% lượng lactose trong vòng 5h.