Việc tâch câc polymer protein phụ thuộc văo phđn tử lượng polymer, pH vă nồng độ câc muối vô cơ của dung dịch. Ở đđy, chúng tôi sử dụng muối (NH4)2SO4 lăm câc hetero-PS chứa protein kết tủa vă tâch thănh hai pha.
Hình 2.4. Sơ đồ phđn đoạn câc loại polysaccharide trong cao polysaccharide
2.3.7. Phương phâp tạo dẫn xuất của monosaccharide vă phđn tích bằng GC-MS để xâc định tỷ lệ thănh phần câc monosaccharide [1]
2.3.7.1. Nguyín tắc
Thủy phđn PS thănh câc monosaccharide, chuyển câc monosaccharide sang dẫn xuất alditol acetate, rồi định tính vă định lượng bằng GC-MS.
100 ml PS 5 mg/ml
100 ml (NH4)2SO4 60% Để 24 giờ, 25 0C
Ly tđm 8500 vòng/phút, 20 phút
Kết tủa Dung dịch Hòa tan bằng nước
Thẩm tâch Tủa bằng EtOH
Thẩm tâch Tủa bằng EtOH
2.3.7.2. Câch tiến hănh
Hình 2.5. Quy trình xử lý mẫu để phđn tích GC – MS
2.3.7.3. Hệ thống GC-MS sử dụng: GCMS – Shimadzu (2010)
Điều kiện lăm việc của thiết bị sắc ký:
- Cột tâch: cột mao quản DB-5 (chiều dăi: 30 m, đường kính trong: 0,32 mm, độ dăy lớp pha tĩnh: 0,25 μm).
- Khí mang: He (độ tinh khiết 99,9999%). - Nhiệt độ buồng bơm mẫu: 275 0C. Điều kiện lăm việc của thiết bị khối phổ:
- Nguồn ion hoâ: nguồn EI (Ion hoâ trín cơ sở bắn phâ điện tử) Thủy phđn PS Khử monosaccharide Acetyl hóa alditol alditol alditol acetate Phđn tích GC-MS 5 (mg) mẫu PS 4 mL TFA 2 M/ 2 giờ, 120 0C 5 mL MeOH Bay hơi bằng dòng N2/ 2 lần monosaccharide 4 mL NaBH4 0,25 M/ NH4OH 1M 5 mL CH3COOH 10%/MeOH Bay hơi bằng dòng N2/ 2 lần
2 mL dd. anhydride acetic : pyridin = 1:1 (v/v)/100 0C, 20 phút
5 mL MeOH
- Nhiệt độ nguồn MS: 230 0C - Thời gian cắt dung môi: 5 phút - Chế độ phđn tích: Scan
- Nhiệt độ lò: 65 0C - Tốc độ dòng: 2 mL/phút
Chương trình nhiệt độ được cho ở bảng 2.1.
Bảng 2.1. Chương trình nhiệt độ phđn tích mẫu trín thiết bị sắc ký GCMS-DB
Tốc độ (0C/phút) Nhiệt độ cuối (0C) Thời gian giữ (phút)
- 8,00 2,00 65 250 280 1,00 10,00 5,00 Tổng thời gian : ≈ 54 phút