2.3.3.1. Định tính phenolic trong mẫu nguyín liệu
Lấy 2 mL dịch chiết cho văo ống nghiệm, thím từng giọt dung dịch FeCl3 0,1% nếu dung dịch xuất hiện kết tủa mău xanh nđu: phản ứng dương tính.
2.3.2.2. Định tính nhóm chất flavonoid trong mẫu nguyín liệu (a) Phản ứng Shinoda
Cho 1 mL dịch chiết văo ống nghiệm, thím một ít bột Mg hoặc Zn vă văi giọt HCl đậm đặc rồi đun câch thủy, khoảng văi phút sau nếu dung dịch đổi sang mău hồng thì kết luận: phản ứng dương tính.
(b) Phản ứng với dung dịch FeCl3 5%
Cho 1 mL dịch chiết văo ống nghiệm, thím văi giọt FeCl3 5%, nếu dung dịch xuất hiện kết tủa mău xanh nđu thì kết luận: phản ứng dương tính.
(c) Phản ứng với thuốc thử KOH/ cồn
Thuốc thử KOH/ cồn: bao gồm ethanol 50% được trộn với KOH 50%.
Lấy 2 mL dịch chiết cho văo ống nghiệm, thím văo ống nghiệm từng giọt dung dịch thuốc thử. Nếu dung dịch đổi sang mău văng chứng tỏ có flavonoid.
2.3.2.3. Định tính nhóm chất alkaloid trong mẫu nguyín liệu
Chuẩn bị thuốc thử Dragendorff. Thuốc thử Dragendorff được pha từ hai dung dịch sau:
- Dung dịch 1: Hòa tan 8,0 g Bi(NO3)3 trong 20 mL HNO2. - Dung dịch 2: Lấy 27,2 g KI hòa tan trong 50 mL nước cất.
Cho hai dung dịch trín trộn lẫn văo nhau vă định mức bằng nước cất đến 100 mL thu được thuốc thử Dragendorff.
Cho 1 mL dịch chiết tâc dụng với thuốc thử Dragendorff, nếu thấy kết tủa đỏ da cam thì kết luận: phản ứng dương tính.
2.3.2.4. Định tính nhóm chất steroid trong mẫu nguyín liệu
Lấy 1 g cao hòa tan trong 10 mL CHCl3, lọc lấy phần dịch.
Pha thuốc thử Liebermann – Burchard: anhydride acetic (1 mL), CHCl3 (1 mL), lăm lạnh ống nghiệm rồi thím 1 giọt H2SO4 đậm đặc.
Tiến hănh: lấy 1 mL dịch chiết cho văo ống nghiệm. Sau đó, thím tiếp thuốc thử văo ống nghiệm trín, lắc đều trong 5 phút, để ổn định trong 20 phút. Quan sât sự
thay đổi mău vă cường độ mău. Nếu xuất hiện câc mău xanh nhạt, lục, hồng, cam hoặc đỏ, câc mău năy bền vững trong một thời gian thì kết luận: phản ứng dương tính.
2.3.2.5. Định tính nhóm chất terpenoid trong mẫu nguyín liệu
Lấy 5 ml dịch chiết cho văo ống nghiệm, thím văo ống nghiệm 2 mL CHCl3 vă 3 mL dung dịch H2SO4 đậm đặc. Nếu dung dịch xuất hiện mău nđu đỏ thì kết luận: phản ứng dương tính.
2.3.2.6. Định tính saponin trong mẫu nguyín liệu
Dùng pipet lấy 2 mL dịch nước cho văo ống nghiệm, bịt miệng ống nghiệm, lắc mạnh trong 1 phút, để yín một lúc rồi quan sât cột bọt trong ống. Nếu cột bọt bền vững thì kết luận: phản ứng dương tính.
2.3.2.7. Định tính glycoside tim trong mẫu nguyín liệu
Phản ứng với thuốc thử Baljet
Thuốc thử Baljet: pha 1 thể tích dung dịch acid pycric 1% với 9 thể tích dung dịch NaOH 10%.
Cho 2 mL dịch chiết văo ống nghiệm, thím văo ống nghiệm từng giọt thuốc thử, nếu dung dịch xuất hiện mău hồng thì kết luận: phản ứng dương tính.
2.3.2.8. Định tính nhóm chất carotenoid trong mẫu nguyín liệu
Lấy 2 mL dịch chiết cho văo ống nghiệm nhỏ, đun câch thủy thănh cao, cho thím 2 giọt H2SO4 đậm đặc văo thấy mău dung dịch chuyển sang mău lục thì kết luận: phản ứng dương tính.
2.3.2.9. Định tính acid hữu cơ
Lấy 5 mL dịch chiết cho văo ống nghiệm, sau đó cho văo một ít tinh thể NaHCO3, nếu thấy bọt khí xuất hiện thì kết luận: phản ứng dương tính.
2.3.2.10. Định tính carbohydrate
Lấy 1 mL dịch chiết nước, thím văo đó 1 mL phenol 5%, rồi thím tiếp 5 mL H2SO4 đậm đặc. Phản ứng thấy mău văng da cam xuất hiện thì kết luận: phản ứng dương tính.
2.3.2.11.Định tính đường khử trong mẫu nguyín liệu
Lấy 4 – 5 mL dịch chiết cho văo 4 – 5 mL thuốc thử Fehling, đun câch thủy 2 – 3 phút, có kết tủa mău đỏ gạch thì kết luận: phản ứng dương tính.
Cao PS thô
Hòa tan bằng lượng nước cất vừa đủ Dịch nước
1. Lắc qua butanol: chloroform (4:1), 2. Thu phđn lớp nước
3. Tủa bằng EtOH 960, – 4 0C, để qua đím 4. Cất đuổi dung môi
PS tinh khiết
2.3.2.12. Định tính protein
Lấy 1 ml dịch chiết văo ống nghiệm, thím 1,4 mL dung dịch Lowry, lắc nhẹ vă để trong bóng tối 20 phút. Thím 0,2 mL Folin – ciocalteu (pha loêng 2 lần) rồi ủ trong bóng tối 30 phút. Nếu dung dịch chuyển sang mău xanh thì kết luận: phản ứng dương tính