1. ƯU ĐIỂM VÀ KHUYẾT ĐIỂM:
2.2. Thực hiện tiêu bản hiển vi cố định noãn sào chuột đồng:
2.2.1. Lấy mẫu:
Chọn chuột cái kích thước trung bình 11.5cm, nặng khoảng 150-200gr.
Trong thao tác thực hiện phải nhẹ nhàng tránh bóp mạnh, nếu không mẫu sẽ bị biến dạng, các nang trứng sẽ bị vỡ nhất là các noãn nang trứng có xoang sẽ không còn hình dạng đặc trưng.
2.2.2. Cố định:
Cố định mẫu trong dung dịch Bouin (công thức pha xem phụ lục) trong 4 giờ. Thể tích dung dịch gấp 30 - 40 lần thể tích mẫu.
Trong khi cố định nên thường xuyên lắc mẫu tránh hiện tượng 1 mặt mẫu luôn tiếp xúc với lọ đựng.
Thời gian cố định phải thích hợp nhằm:
+ Tránh tình trạng mẫu bị giòn khi thời gian cố định lâu.
+ Tránh trường hợp mẫu bị hoại tử, mềm khi cắt mẫu vì vậy thời gian bảo quản sẽ không lâu khi cố định với thời gian ngắn.
Để xác định thời gian cố định thích hợp, thí nghiệm được bố trí như sau:
Chất cố định Thời gian Kết quả
Bouin 18 giờ
Mẫu bị giòn khó cắt, sau khi nhuộm và quan sát thấy mẫu bị rạn nứt với nhiều đường khá lớn
12 giờ Mẫu ít giòn hơn nhưng vẫn còn nhiều đường rạn nứt
8 giờ
Đối với những mẫu noãn sào nhỏ mẫu vẫn còn bị rạn
Nhưng đối với những mẫu noãn sào chuột đồng lớn có từ 2 thể vàng trở lên thì mẫu còn răng nhẹ. Mẫu ăn màu rõ đẹp nhất là thể vàng.
4 giờ Mẫu vừa cứng, dễ cắt, bắt màu phẩm nhuộm tốt, rõ đẹp.
* Kết luận chung: thời lượng được chọn để cố định mẫu noãn sào là 4 giờ. 2.2.3 Khử nước:
Để giảm bớt màu vàng của Bouin và để mẫu bắt màu tốt khi nhuộm. Vì vậy trước khi khử nước cần rửa nước mẫu dưới vòi nước 2 - 3 giờ, rồi chuyển vào nước cất, sau đó khử nước theo trình tự nồng độ cồn tăng dần.
Mục đích của việc khử nước là loại dần nước ra khỏi mẫu khi cho mẫu lần lượt vào các lọ có nồng độ cồn tăng dần.
Do cồn nhẹ hơn nước nên ta phải thường xuyên lắc lọ mẫu để tăng hiệu quả khử nước khi nước được đẩy ra từ mẫu lắng ở đáy lọ.
Thể tích cồn trong từng lọ phải gấp 20 lần thể tích mẫu, mỗi nồng độ cồn phải 2 lọ/ 1 nồng độ.
Nghiệm
thức Vật liệu Thời gian Kết quả
I cồn 500 cồn 700 cồn 900 n-butanol 1h x 2 lần 1h x 2 lần 1h x 2 lần 1h x 2 lần
Mẫu sau khi nhuộm mờ, đục, chưa nhận rõ cấu trúc mô. II cồn 500 cồn 700 cồn 900 n-butanol 2h x 2 lần 2h x 2 lần 2h x 2 lần 1h x 2 lần
Mẫu trong, rõ, ăn màu tốt
* Kết luận: chọn nghiệm thức II để tiến hành khử nước trước khi tẩm parafin..