trường hiện nay
1.3.3.1. Thuốc Detazofol
SĐK: VNA-4212-01
Dạng thuốc: Viờn nộn Đúng gúi: hộp 10 vỉ x 20 viờn/vỉ
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn
Nhà sản xuất: Cụng ty cổ phần Dược phẩm H Nội.
Nhúm dược lý: Thuốc giảm đau, hạ sốt, nhúm chống viờm khụng steroit, thuốc điều trị gỳt và cỏc bệnh xương khớp
Thành phần: paracetamol, clopheniamin maleat.
1.3.3.2. Thuốc slocol
Dạng thuốc: Viờn nộn Đúng gúi: Hộp 1 chai x 100 viờn nộn.
Hộp 25 vỉ x 10viờn nộn.
Nhà sản xuất: Cụng ty cổ phần Dược phẩm Hậu Giang .
Nhúm Dược lý: Thuốc giảm đau, hạ sốt, nhúm chống viờm khụng steroit, thuốc điều trị gỳt và cỏc bệnh xương khớp
Thành phần: paracetamol, clopheninamin maleat.
1.3.3.3. Thuốc coldtefyy
Dạng thuốc: Viờn nộn Đúng gúi: Hộp 25 vỉ x 4 viờn.
Hộp 25 vỉ x 10viờn nộn.
Nhà sản xuất: Cụng ty cổ phần Dược phẩm Phỳ Thọ tại Hà Nội. Nhúm Dược lý: Thuốc giảm đau, hạ sốt, nhúm chống viờm
Thành phần: Mỗi viờn nộn chứa: paracetamol 500mg, Clopheninamin maleat 4mg.
1.3.3.4. Thuốc pamin
SĐK: VNA-4516-01
Dạng thuốc: Viờn nộn Đúng gúi: Vỉ 10 viờn
Nhà sản xuất: Cụng ty cổ phần Dược phẩm Hậu Giang .
Nhúm Dược lý: Thuốc giảm đau, hạ sốt, nhúm chống viờm khụng steroit, thuốc điều trị gỳt và cỏc bệnh xương khớp
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn
1.3.3.5. Thuốc pacemin
SĐK: VNB-0036-02
Dạng thuốc: Viờn nang Đúng gúi: Hộp 10 vỉ x 10 viờn nang
Nhà sản xuất: Cụng ty cổ phần Dược phẩm Hà Tõy
Nhúm Dược lý: Thuốc giảm đau, hạ sốt, nhúm chống viờm khụng steroit, thuốc điều trị gỳt và cỏc bệnh xương khớp
Thành phần: Paracetamol: 325mg, clopheninamin maleat: 4mg. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Cỏc thuốc trờn đều cú cụng dụng: Trị núng sốt, cảm, sổ mũi, nghẹt mũi, viờm mũi dị ứng, nhức đầu đau dõy thần kinh, đau răng và đau nhức cơ khớp
Chống chỉ định: Quỏ mẫn với thành phần thuốc, người suy tế bào gan.
1.4. Phƣơng phỏp xỏc định riờng paracetamol và clopheninamin maleat
1.4.1. Phương pháp xác định paracetamol
1.4.1.1. Xác định paracetamol dạng nguyờn liệu
Hũa tan 0,3000 gam chế phẩm vào hỗn hợp gồm 10 mL nước và 30 mL axit sunfuric loóng. Đun hồi lưu trong 60 phỳt, sau đú làm lạnh, thờm nước thành 100 mL. Lấy 20 mL dung dịch trờn thờm 40 mL nước, 40 gam nước đỏ, 15 mL axit clohidric loóng và 0,1 mL dung dịch feroin. Chuẩn độ bằng dung dịch amoni ceri sunfat 0,1M cho đến khi xuất hiện màu vàng. Tiến hành phõn tớch mẫu trắng song song với mẫu thật trong cựng điều kiện [2, 3, 21].
1mL dung dịch amoni ceri sunfat tương đương với 7,56 mg paracetamol.
1.4.1.2. Xác định paracetamoldạng viờn nộn
Cõn 20 viờn nộn, tớnh khối lượng trung bỡnh của bột thuốc trong một viờn thuốc, đem nghiền mịn, trộn đều. Cõn chớnh xỏc một lượng bột thuốc tương đương với khoảng 0,15 gam paracetamol cho vào bỡnh định mức 200 mL, thờm 50 mL NaOH 0,1N, thờm 100 mL nước cất, khuấy 15 phỳt thờm nước đến vạch. Lắc đều rồi lọc bỏ 10 mL dung dịch đầu. Lấy chớnh xỏc 10 mL dung dịch lọc vào bỡnh định mức 100 mL rồi thờm nước pha loóng đến vạch định mức, lắc đều. Lấy 10 mL dung dịch vừa pha cho vào bỡnh định mức 100 mL, thờm 10 mL NaOH 0,1N, thờm nước
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn
đến vạch định mức lắc đều. Đo độ hấp thụ của dung dịch thu được ở bước súng 257 nm (cu vột dày 1cm). Mẫu trắng là dung dịch NaOH 0,1N. Dựa vào độ hấp thụ quang A, tớnh được hàm lượng paracetamol [18].
1.4.2. Phương pháp xác định clopheninamin maleat. 1.4.2.1. Xác định định tớnh
Sử dụng phương phỏp sắc ký lớp mỏng.
Bản mỏng: Silicagel GF254, sấy 105oC trong 30 phỳt trước khi sử dụng. Dung mụi khai triển: Axit axetic 1M – metanol – etyl axetat (20 : 30 : 50)
Dung dịch thử: Lắc kỹ một lượng bột viờn tương đương khoảng 5 mg clopheninamin maleat với cloroform , lọc, bay hơi dịch lọc đến cắn. Hũa tan cặn trong 1 mL cloroform.
Dung dịch đối chiếu: Dung dịch clopheninamin maleat chuẩn đối chiếu 0,5% trong cloroform.
Cỏch tiến hành: Chấm riờng biệt lờn bản mỏng 2 àL mỗi dung dịch trờn. Sau khi triển khai, lấy bản sắc ký ra, để khụ ngoài khụng khớ và quan sỏt dưới ỏnh sỏng tử ngoại ở bước súng 254 nm. Hai vết chớnh trờn sắc ký đồ của dung dịch thử phải tương ứng về vị trớ và màu sắc với hai vết chớnh trờn sắc ký đồ của dung dịch đối chiếu. Sau đú, phun dung dịch kali iodobismuthat lờn bản sắc ký. Vết chớnh thu được trờn sắc ký đồ của dung dịch thử phải tương ứng về vị trớ và màu sắc với vết chớnh trờn sắc ký đồ của dung dịch đối chiếu.
Phương phỏp sắc ký lớp mỏng . Bản mỏng: Silicagel GF254
Dung mụi khai triển: Dietylamin – cloroform – xyclohexan (10 : 40 : 50)
Dung dịch (1): Lắc kỹ một lượng bột viờn tương đương khoảng 50 mg clopheninamin maleat với cloroform, lọc, bay hơi dịch lọc đến cắn. Hũa tan cắn trong 1 mL cloroform.
Dung dịch (2): Pha loóng 1 thể tớch dung dịch (1) với cloroform thành 500 thể tớch.
Cỏch tiến hành: Chấm riờng biệt lờn bản mỏng 10L mỗi dung dịch trờn. Triển khai sắc k ý đến khi dung mụi đi được khoảng 12 cm. Lấy bản sắc k ý ra, để
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn
khụ ngoài khụng khớ và quan sỏt dưới ỏnh sỏng tử ngoại ở bước súng 254 nm. Bất kỳ vết phụ nào trờn sắc ký đồ của dung dịch (1) khụng được đậm màu hơn vết trờn sắc ký đồ của dung dịch (2) (0,2%). Loại bỏ cỏc vết tại điểm xuất phỏt [2, 3, 21].
1.4.2.2. Xác định định lượng
Cõn 20 viờn, tớnh khối lượng trung bỡnh viờn và nghiền thành bột mịn. Tiến hành theo một trong hai phương phỏp sau đõy:
Phương phỏp 1
Tiến hành theo phương phỏp quang phổ hấp thụ tử ngoại .
Cõn chớnh xỏc một lượng bột viờn tương đương khoảng 3 mg clopheninamin maleat cho vào bỡnh gạn cú chứa sẵn 20 mL dung dịch axit sunfuric 0,05M, lắc kỹ 5 phỳt, thờm 20 mL ete, lắc kỹ và lọc lớp axit vào một bỡnh gạn thứ hai. Chiết lớp ete thờm 2 lần, mỗi lần với 10 mL dung dịch axit sunfuric 0,05M. Rửa phễu và lọc bằng dung dịch axit sunfuric 0,05M. Tập trung dịch lọc và dịch rửa, kiềm húa bằng dung dịch natri hydroxyt 1M đến khi làm xanh giấy quỳ đỏ, thờm lượng thừa 2 mL dung dịch natri hydroxyt 1M. Lắc đều, chiết 2 lần, mỗi lần với 50 mL ete, rửa mỗi dịch chiết ete với 20 ml nước. Tập trung dịch chiết ete, chiết 3 lần với 20 mL, 20 mL và 5 mL dung dịch axit sunfuric 0,25M. Tập trung dịch chiết axit vào bỡnh định mức 50 mL, thờm dung dịch axit sunfuric 0,25M tới vạch định mức, lắc đều. Lấy chớnh xỏc 10 mL dung dịch này pha loóng với dung dịch axit sunfuric 0,25M vừa đủ 25 mL. Lắc đều và lọc. Đo độ hấp thụ của dung dịch thu được ở bước súng 265 nm, cốc đo dày 1 cm, dựng dung dịch axit sunfuric 0,25M làm mẫu trắng.
Tớnh hàm lượng clopheninamin maleat, C16H19ClN2.C4H4O4, theo A (1%,1 cm). Lấy giỏ trị A (1%, 1 cm) là 212 ở bước súng cực đại 265 nm. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Phương phỏp 2
Tiến hành theo phương phỏp sắc ký lỏng.
Pha động: Hỗn hợp metanol – nước (60 : 40) cú chứa 0,34g kali dihydrophotphat; 0,3g trietylamin hydroclorit; 0,15g natri laurylsunfat và 0,1mL axit photphoric trong mỗi 100 mL dung dịch, điều chỉnh tỉ lệ nếu cần.
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn
Dung dịch chuẩn: Cõn chớnh xỏc và hũa tan vào nước một lượng clopheninamin maleat chuẩn để thu được dung dịch cú nồng độ khoảng 0,8 mg/mL. Tiếp tục pha loóng dung dịch này bằng dung dịch axit photphoric 0,1% để thu được dung dịch cú nồng độ khoảng 8 àg/mL.
Dung dịch thử: Cõn 20 viờn, tớnh khối lượng trung bỡnh viờn và nghiền thành bột mịn. Cõn chớnh xỏc một lượng bột viờn tương ứng với khoảng 2 mg clopheninamin maleat vào bỡnh định mức 250 mL, thờm 25 mL metanol, siờu õm cho bột phõn tỏn hoàn toàn, thờm 1 mL axit photphoric, pha loóng với nước vừa đủ đến vạch, trộn đều.
Điều kiện sắc ký: Cột thộp khụng gỉ (15 cm x 4,6 mm) được nhồi pha tĩnh silicat liờn kết với cỏc nhúm phenyl (hạt 5 -10 m).
Detector quang phổ tử ngoại đặt ở bước súng 214 nm. Tốc độ dũng: 2 mL/phỳt.
Thể tớch tiờm: 10 L.
Kiểm tra tớnh thớch hợp của hệ thống sắc ký: Tiến hành sắc ký với dung dịch chuẩn, hệ số đối xứng của pic clopheninamin maleat khụng được lớn hơn 2,0 và độ lệch chuẩn tương đối của cỏc diện tớch đỏp ứng từ lần tiờm lặp lại khụng quỏ 2,0%.
Tiến hành sắc ký lần lượt với dung dịch chuẩn và dung dịch thử. Tớnh hàm lượng clopheninamin maleat, C16H19ClN2.C4H4O4, cú trong viờn dựa vào diện tớch pic trờn săc ký đồ thu được từ dung dịch thử, dung dịch chuẩn và hàm lượng C16H19ClN2.C4H4O4 của clopheninamin maleat chuẩn [18, 21].
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn
Chƣơng 2
NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIấN CỨU 2.1. Nội dung nghiờn cứu
Áp dụng phương phỏp phõn tớch trắc quang dựng phổ toàn phần kết hợp với thuật toỏn của chương trình lọc Kalman để xõy dựng qui trỡnh định lượng đồng thời paracetamol (PAR) và clopheninamin maleat (CPM) trong thuốc giảm đau, hạ sốt detazofol, slocol, pamin và pacemin cú trờn thị trường.
Cỏc nghiờn cứu cụ thể:
- Khảo sỏt trờn toàn phổ từ 200 nm đến 900 nm để xỏc định bước súng hấp thụ quang cực đại phự hợp khi quột phổ.
- Tiến hành khảo sỏt sơ bộ phổ hấp thụ phõn tử của PAR và CPM trong cỏc dung mụi cú pH = 1 đến 11 để tỡm dung mụi thớch hợp cho phép đo quang .
- Khảo sỏt sự ổn định độ hấp thụ quang của PAR và CPM theo thời gian, nhiệt độ để lựa chọn khoảng thời gian và nhiệt độ thớch hợp khi thực hiện cỏc phép đo quang.
- Khảo sỏt sự ảnh hưởng của tinh bột đến độ hấp thụ quang của PAR và CPM. - Kiểm tra tớnh cộng tớnh độ hấp thụ quang của hỗn hợp PAR và CPM trờn toàn phổ.
- Khảo sỏt khoảng tuyến tớnh của PAR và CPM từ đú xỏc định giới hạn phỏt hiện (LOD) và giới hạn định lượng (LOQ).
- Xỏc định đồng thời PAR và CPM trong cỏc mẫu tự pha chế.
- Xõy dựng quy trỡnh phõn tớch mẫu thuốc giảm đau - hạ sốt detazofol, slocol, pamin và pacemin từ đú đỏnh giỏ độ tin cậy của phương phỏp thụng qua việc tớnh toỏn độ đỳng và độ lặp lại của phép đo.
- Định lượng đồng thời PAR và CPM trong mẫu thuốc detazofol, slocol, pamin và pacemin cú trờn thị trường . Đỏnh giỏ độ tin cậy của phương phỏp thụng qua xác định độ thu hồi (Rev) của PAR và CPM [1, 6, 8, 9, 20].
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn
2.2. Phƣơng phỏp nghiờn cứu
2.2.1. Phương pháp nghiờn cứu tài liợ̀u
Nghiờn cứu tài liợ̀u trong và ngoài nước vờ̀ xác định PAR, CPM trong hụ̃n hợp từ đó lựa chọn phương phỏp xỏc định PAR, CPM phự hợp [1, 6, 8, 9, 20, 25, 26, 29, 31, 34].
2.2.2. Phương pháp thực nghiợ̀m
Pha chế dung dịch chuẩn PAR, CPM và hỗn hợp của chỳng. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Tiến hành đo phổ hấp thụ phõn tử của PAR, CPM trong vựng bước súng khảo sỏt , ghi cỏc dữ liệu và sử dụng chương trỡnh lọc Kalman để tớnh toỏn hàm lượng của PAR, CPM trong hụ̃n hợp tự pha và trong cỏc mõ̃u thuụ́c.
2.3. Đỏnh giỏ độ tin cậy của quy trình phõn tớch 2.3.1. Giới hạn phát hiện (LOD)
LOD được coi là nồng độ thấp nhất của chất nghiờn cứu mà hệ thống phõn tớch cho tớn hiệu phỏt hiện phõn biệt với tớn hiệu nền . Trong phõn tớch trắc quang LOD tớnh theo phương trỡnh hồi quy có cụng thức như sau:
y
3.S LOD =
B (2.1)
Trong đú:
Sy: là độ lệch chuẩn của tớn hiệu y trờn đường chuẩn.
B: độ dốc của đường chuẩn chớnh là độ nhạy của phương phỏp trắc quang.
2.3.2. Giới hạn định lượng (LOQ)
LOQ được coi là nồng độ thấp nhất của chất nghiờn cứu mà hệ thống phõn tớch định lượng được với tớn hiệu phõn tớch khỏc, cú ý nghĩa định lượng với tớn hiệu nền và đạt độ tin cậy tối thiểu 95% và thường người ta sử dụng cụng thức:
10.Sy LOQ =
B (2.2)
2.3.3. Đánh giá độ tin cậy của phương pháp
- Đỏnh giỏ độ đỳng của phương phỏp đối với cỏc hụ̃n hợp PAR và CPM tự pha chế thụng qua sai số tương đối RE. Sai số tương đối của cỏc phộp phõn tớch đối
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn
với mẫu chuẩn tự pha chế thụng qua việc tớnh tỷ số giữa độ sai lệch của nồng độ tớnh toỏn được với nồng độ thực đó biết của mẫu theo cụng thức:
Tinh toan 0 0
C - C
RE% = .100%
C (2.3)
Trong đú: RE% là sai số tương đối của phộp xỏc định nồng độ cỏc cấu tử.
CTinh toan (àg/mL) là nồng độ tớnh toỏn được từ chương trỡnh lọc Kalman.
C 0 (àg/mL) là nồng độ đã biờ́t của dung dịch PAR, CPM trong hỗn hợp. - Đỏnh giỏ độ đỳng của phương phỏp đối với cỏc mẫu thuụ́c nghiờn cứu thụng qua độ thu hồi bằng phương pháp thờm chuẩn . Độ thu hồi (Rev) được tớnh theo cụng thức sau:
C - T Re = .100% a a C v (2.4)
Trong đú: CT: nồng độ (àg/mL) của dung dịch PAR hoặc CPM xỏc định được trong mẫu sau khi thờm chuẩn;
Ca: nồng độ (àg/mL) của dung dịch PAR hoặc CPM xỏc định được trong mẫu khi chưa thờm chuõ̉n.
a: nồng độ (àg/mL) của dung dịch chuẩn PAR hoặc CPM thờm vào mẫu (đó biết). - Độ lặp lại của phương phỏp được đỏnh giỏ thụng qua độ lệch chuẩn (S) hoặc đụ̣ lợ̀ch chuõ̉n tương đụ́i (RSD).
n n 2 2 i i i=1 i=1 -μ -C S = = k k C C (2.5) RSD = .100(%) C S (2.6) Trong đú: Ci là các giá trị nồng độ (àg/mL) của dung dịch PAR hoặc CPM tớnh được lần thứ i;
là giỏ trị nồng độ thực của mẫu; (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
C là giỏ trị nồng độ trung bỡnh tớnh được sau n lần xỏc định; k là số bậc tự do.
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn
2.3.4. Đánh giá kết quả phộp phõn tớch theo thống kờ
Khoảng tin cậy của phộp xỏc định nồng độ được tớnh theo cụng thức:
P,k
t .S X ± ε = X ±
n (2.7)
Với tP, k là hệ số phõn bố chuẩn Student ứng với xỏc suất P và bậc tự do k được tra trong bảng (t0,95; 3 = 3,18; t0,95; 5 = 2,57 ); X là giỏ trị trung bỡnh của tập số liợ̀u các kờ́t quả nghiờn cứu; S là độ lệch chuẩn, được tớnh theo cụng thức (2.5); n là số phộp đo.
2.4. Thiết bị , dụng cụ và hoỏ chất
2.4.1. Thiết bị
- Mỏy đo phổ UV-VIS Spectrophotometer UV-1700-SHIMADZU (Nhật Bản) cú khả năng quột phổ trong khoảng bước súng 190 - 1100 nm, cú kết nối mỏy tớnh.
- Bộ cuvột thạch anh.
- Cõn điện tử cú độ chớnh xỏc đạt 0,1mg; Mỏy đo pH; Bếp cỏch thuỷ; Mỏy cất nước.
2.4.2. Dụng cụ
- Cỏc dụng cụ thủy tinh cần thiết như: bỡnh định mức, pipet, phễu, lọ đựng húa chất, ống nghiệm, cốc thuỷ tinh...
- Chương trỡnh lọc Kalman tớnh toỏn đồng thời nồng độ cỏc cấu tử [9, 20]. - Một số dụng cụ khỏc.
2.4.3. Húa chất
Chất chuẩn paracetamol và clopheninamin maleat đạt tiờu chuẩn dược dụng Việt Nam do Viện kiểm nghiệm dược sản xuất.
Cỏc húa chất: HCl, H2SO4, HNO3, CH3COOH, NaOH, KH2PO4, Na2HPO4., CH3COONa, Na2B4O7, NH4Cl ... dựng để pha chế cỏc dung dịch đều thuộc loại tinh khiết của Merck.
Nguyờn liệu phõn tớch:
- Thuốc viờn nộn Detazofol do Cụng ty cổ phần dược phẩm Hà Nội sản xuất. - Thuốc viờn nộn Slocol do Cụng ty cổ phần dược phẩm Hậu Giang sản xuất.
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn
- Thuốc viờn nộn Pamin do Cụng ty cổ phần dược phẩm Hậu Giang sản xuất. - Thuốc viờn nang Pacemin do Cụng ty cổ phần dược phẩm Hà Tõy sản xuất.
Chuẩn bị các dung dịch.
- Dung dịch HCl 0,1M, 0,01M, 0,001M - Dung dịch H2SO4 0,05M, 0,005M, 0,0005M - Dung dịch HNO3 0,1M, 0,01M, 0,001M
Cỏch pha chế cỏc dung dịch trờn:
Lấy 41,8 mL dung dịch HCl 37% (d = 1,18) đem pha loãng bằng nước cṍt 2 lõ̀n và định mức thành 500mL thu được dung dịch HCl 1M (pH = 0). Sau đó pha