108 có thiết bị đáp ứng chuẩn nhu cầu của nghiên cứu.
2.2.4.1. Chuẩn bị bệnh nhân
thêm các thuốc hoặc chất có ảnh hƣởng đến ngƣng tập tiểu cầu.
Bệnh nhân đƣợc lấy máu tại buồng tiêm lúc đói buổi sáng (có tối thiểu 8 giờ không ăn), bệnh nhân đi lại khó khăn sẽ lấy máu tại giƣờng bệnh.
Bệnh nhân lấy máu ở tƣ thế nằm, tránh vận động tay trong quá trình lấy máu để thành mạch không bị tổn thƣơng nhiều.
Mỗi bệnh nhân lấy 6,5 ml máu vào 02 , chứa 2 ml máu để làm xét nghiệm tổng phân tích máu, chứa 4,5 ml máu để làm xét nghiệm ngƣng tập tiểu cầu với 2 chất kích tập ADP và AA.
2.2.4.2. Phƣơng tiện kỹ thuật
Hình 2.1. Thiết bị đo ngưng tập tiểu cầu Chrono - Log CA – 560 (Mỹ)
Các phƣơng tiện kỹ thuật để đo độ ngƣng tập tiểu cầu, đánh giá kháng aspirin đƣợc thực hiện tại Khoa xét nghiệm Huyết học, Bệnh viện Trung ƣơng quân đội 108.
Mẫu máu đƣợc ly tâm bằng máy KUBOTA 2010 của hãng KOBUTA, Nhật Bản.
Đếm số lƣợng tiểu cầu: số lƣợng tiểu cầu đƣợc đếm trên máy phân tích tế bào máu tự động CD 1700 của hãng Abbott, Mỹ.
Đo độ ngƣng tập tiểu cầu:sử dụng máy chuyên dụng đo ngƣng tập tiểu cầu Chrono - Log CA - 560 của Mỹ để đo độ ngƣng tập tiểu cầu trong huyết tƣơng giầu tiểu cầu bằng phƣơng pháp quang học. Máy có thể đo đồng thời 4 kênh với 4 chất kích tập khác nhau.
2.2.4.3. Lấy mẫu máu và chuẩn bị mẫu xét nghiệm: lấy máu tĩnh mạch vào
buổi sáng, để ở nhiệt độ phòng thí nghiệm (240
C – 270C), các xét nghiệm đƣợc tiến hành sớm sau khi lấy máu, trong vòng 3 giờ.
Máu để đếm số lƣợng tiểu cầu: chống đông bằng EDTA (Ethylene Diamin Tetraacetic Acid) với tỷ lệ 1 mg EDTA cho 1 mL máu.
Máu làm ngƣng tập tiểu cầu và các xét nghiệm đông máu: chống đông bằng natri citrat 3,8% với tỷ lệ 9 thể tích máu/1thể tích natri citrat 3,8% trong ống nhựa.
Huyết tƣơng giầu tiểu cầu: đƣợc chuẩn bị từ mẫu máu chống đông bằng natri citr
5 phút). Sau ly tâm phần huyết tƣơng giầu tiểu cầu đƣợc chuyển sang một nhựa khác để chuẩn bị cho đo độ ngƣng tập tiểu cầu.
Huyết tƣơng nghèo tiểu cầu:
trong 10 phút để sử dụng trong kỹ thuật đo độ ngƣng tập tiểu cầu.
2.2.4.4. Kỹ thuật xét nghiệm:
Nguyên lý của phƣơng pháp: thiết bị đo độ ngƣng t
. Khi đo, sử dụng một mẫu huyết tƣơng giầu tiểu cầu của mẫu máu cần đo để thiết lập điểm chuẩn ở đó ánh sáng bị cản hoàn toàn và độ dẫn truyền ánh sáng là 0%. Đồng thời sử dụng huyết tƣơng nghèo tiểu cầu của cùng mẫu máu để thiết lập điểm chuẩn ở đó ánh sáng đi qua hoàn toàn và độ dẫn truyền ánh sáng là 100%. Khi cho chất kích tập vào huyết tƣơng giầu tiểu cầu sẽ xẩy ra hiện tƣợng các tiểu cầu ngƣng tập với nhau tạo thành đám vì vậy độ dẫn truyền ánh sáng sẽ tăng lên. Độ dẫn truyền ánh sáng phản ánh mức độ ngƣng
tập tiểu cầu. Kết quả đƣợc thể hiện bằng % độ dẫn truyền ánh sáng của huyết tƣơng giầu tiểu cầu trong đó tiểu cầu đã ngƣng tập tối đa.
2.2.4.5. Tiêu chuẩn đánh giá kháng aspirin sử dụng trong nghiên cứu
Hình 2.2. Mẫu phiếu kết quả đo ngưng tập tiểu cầu trên máy Chrono - Log CA – 560 của bệnh nhân nghiên cứu
- t
nghiên cứu về kháng aspirin bằng phƣơng pháp quang học do Gum và cộng sự đề nghị bao gồm: kháng aspirin khi có đủ hai tiêu chuẩn [68]:
0,5 mg/ml Acid Arachidonic gây ngƣng tập tiểu cầu ≥20% và 10 µM/l ADP gây ngƣng tập tiểu cầu ≥70%.