Hoạt tính tổng cộng của các chất điều hòa tăng trưởng thực vật của khối tiền phôi (1gram) PEM trên môi trường trưởng thành sau 0, 10, 25 ngày được xác định nhờ các sinh trắc nghiệm. Các chất điều hòa tăng trưởng thực vật: auxin (2,4-D), acid abcisic (ABA) của khối sinh phôi trên môi trường trưởng thành MLV với ABA 60 µM được ly trích.
Sự phân đoạn chất điều hòa tăng trưởng thực vật được thực hiện nhờ phương pháp sắc ký trên bản mỏng silicagel với dung môi di chuyển gồm chloroform: methanol: acid acetic (tỉ lệ theo thể tích 80:15:5). Hoạt tính của các chất này được xác định nhờ
Sinh trắc nghiệm đo hoạt tính ABA:
- Chuẩn bị khây có các ô chứa:
• Ô 1: 10ml dịch ngâm AIA mẫu (Rf = 0.84 – 0.88) sau 24 giờ.
• Ô 2: 10ml dịch ngâm ABA mẫu (Rf = 0.88 – 0.92) sau 24 giờ.
• Ô 3: 10ml dung dịch AIA 1mg/l.
• Ô 4: 10ml dung dịch ABA 1mg/l.
• Ô 5: 10ml nước cất. - Bóc vỏ khoảng 200 hột lúa và ngâm trong dung dịch KMnO4 5%0 (15 phút) để kích thích sự nảy mầm. Hột được rửa sạch và ngâm bão hòa nước khoảng 2 giờ. Sau đó, hột được gieo trên giấy thấm ẩm (hoặc gòn thấm nước) trong thau được
đậy bằng giấy, trong tối. Khoảng 2 ngày sau, diệp tiêu mọc đứng thẳng, cao khoản 15mm. - Cắt diệp tiêu (dưới ánh sáng đỏ): cắt bỏ một đoạn khoảng 5mm ngọn diệp tiêu, cắt bỏ gốc diệp tiêu về phía hột và rút lá mầm ra khỏi diệp tiêu. Dùng dao cắt chuyên biệt (để tạo các khúc cắt diệp tiêu dài Sơđồ2.2: Phương pháp ly trích các CĐHSTTV
bằng nhau). Ởđây nhóm đã dùng các mảnh lam ghép lại với lưỡi lam để tạo thành dao cắt, kích thước đoạn diệp tiêu cắt được dài 2mm
- Các khúc cắt được cho vào một hộp petri chứa nước cất . Sau khi cắt đủ số khúc diệp tiêu cần thiết , dùng kẹp gắp ngẫu nhiên 10 khúc cắt diệp tiêu cho vào mỗi ô trong khây đã chuẩn bị ở phần trên. Đặt các hộp so với chuẩn sẽ thể hiện tác động của các chất kích thích hay cản tăng trưởng. Sai biệt của các chỉ số tăng trưởng diệp tiêu từ
mẫu trích, mẫu chuẩn tinh khiết và đối chứng (trong nước cất) sẽ xác định được hoạt tính tương đương ABA