3. Kết quả và thảo luận
3.3.1. Các gen độc lực cps2J, epf, mrp và sly
Với mục đích so sánh sự hiện diện của các gen độc lực (cps2J, epf, mrp và
sly) trong các chủng S. suis 2, tôi đã sử dụng phương pháp multiplex PCR để khảo sát đồng thời sự hiện diện của những gen này (Hình 3.6).
Luận văn thạc sĩ HVTH: Nguyễn Thanh Tòng Hình 3.6: Khảo sát sự hiện diện của các gen độc lực cps2J, epf, mrp và sly bằng multiplex PCR. Giếng 1 – 4: các chủng S. suis 2 phân lập từ heo bệnh, giếng 5 – 8: các chủng S. suis 2 phân lập từ heo khỏe, giếng 9 – 14: các chủng S. suis 2 phân lập từ bệnh nhân, giếng 15: chứng dương (+) là chủng S. suis 31533 có kiểu gen cps2J+sly+epf+mrp+, giếng 16: chứng âm (−) là chủng S. suis 89-1591 có kiểu gen cps2J+sly−epf−mrp+, giếng 17: chứng âm (−) là nước, M: thang 100 bp DNA. Sản phẩm PCR được điện di trên gel agarose 2%.
Kết quả khảo sát sự hiện diện của các gen độc lực cho thấy 68,18% (15/22) chủng phân lập từ heo khỏe, 100% (17/17) chủng phân lập từ heo bệnh và 98,28% (57/58) chủng phân lập từ bệnh nhân đều chứa cả 4 yếu tố độc lực. Trong đó, khoảng 31,82% (7/22) chủng phân lập từ heo khỏe không chứa gen epf và sly.
90 (92,78%) chủng trong nghiên cứu này chứa gen sly. Trong một nghiên cứu trước đây, S. suis 2 chứa gen sly chiếm khoảng 95% chủng phân lập ở châu Âu và châu Á nhưng chỉ chiếm 7% chủng phân lập ở Bắc Mỹ [43].
Vecht và cộng sự nghiên cứu về protein của các chủng S. suis 2 phân lập từ heo mang trùng và heo bệnh, kết quả cho thấy khoảng 77% chủng phân lập từ heo bệnh chứa protein phóng thích muramidase (MRP) và yếu tố protein ngoại bào (EF) nhưng khoảng 86% chủng phân lập từ heo khỏe mang trùng không chứa cả 2 protein trên. Những chủng có kiểu hình MRP+EF+ có tiềm năng độc lực hơn so với
Luận văn thạc sĩ HVTH: Nguyễn Thanh Tòng những chủng MRP−EF− [58]. Chính vì sự thiếu các gen độc lực như epf và sly nên các chủng phân lập từ heo khỏe trở nên kém độc lực hơn so với những chủng phân lập từ heo bệnh và người. Do đó, sự hiện diện của nhiều yếu tố độc lực dường như có vai trò trong độc tính của chủng.
1,72% chủng (1/58) phân lập từ bệnh nhân không chứa gen epf. Bên cạnh đó, hai biến thể của gen epf với kích thước khoảng 400 bp và 800 bp đều được phát hiện ở các chủng phân lập từ bệnh nhân (được trình bày ở mục 3.3.3). Theo kiến thức của tôi, đây là hai biến thể mới chưa được báo cáo trên các nghiên cứu về S. suis trước đây.