Mẫu cây tươi mới thu hái được sấy khô đem nghiền nhỏ rồi ngâm kiệt với metanol ở nhiệt độ phòng cho đến khi nhạt màu. Dịch chiết được cất loại dung môi ở áp suất giảm. Cặn dịch chiết metanol được chiết lần lượt với n-hexan, điclometan, etyl axetat, metanol rồi làm khan bằng Na2SO4, cất loại dung môi
dưới áp suất giảm thu được các cặn chiết tương ứng. Việc thu nhận các dịch chiết từ thân, lá cây Na rừng (Kadsura induta) được tóm tắt trong sơ đồ 2.1, 2.2.
Sơ đồ 2.1: Sơ đồ ngâm chiết mẫu thân cây Na rừng (Kadsura induta)
1. MeOH
2. Cất loại dung môi dưói áp suất giảm 3. Cặn
KlH KIC KlE KlM Sơ đồ 2.2: Sơ đồ ngâm chiết mẫu lá cây Na rừng (Kadsura induta)
1. MeOH
2. Cất loại dung môi dưói áp suất giảm 3. Cặn Mẫu khô (1,5 kg) nghiền nhỏ n- hexan ( 18,0 g ) chloroform ( 15,5 g ) Metanol ( 28.2 g) Cặn tổng Metanol (103,5 g) Etyl axetat ( 8,4 g ) Mẫu khô (0,5 kg) nghiền nhỏ n- hexan ( 9,2 g ) Clorofom ( 21,0 g ) Etylaxetat ( 7,7 g) Cặn tổng Metanol (40,0 g)
Các phân đoạn dịch chiết nói trên được làm khan bằng Na2SO4 , lọc rồi cất kiệt dung môi dưới áp suất giảm, cặn được sấy khô và cân đến khối lượng không đổi. Như vậy từ thân cây Na rừng (Kadsura induta) sẽ có 4 loại cặn chiết được ký hiệu là: KlH, KIC, KlE, KlM.
Ký hiệu:
KlH: Cặn chiết n-Hexan của thân cây Na rừng (Kadsura induta)
KIC: Cặn chiết Clorofom của thân cây Na rừng (Kadsura induta)
KlE: Cặn chiết EtOAc của thân cây Na rừng (Kadsura induta)
KlM: Cặn chiết MeOH của thân cây Na rừng (Kadsura induta)
Kết quả thu nhận các dịch chiết từ thân, lá cây Na rừng (Kadsura induta)
ở Sa Pa – Lào Cai được nêu trong bảng 2.1, 2.2.
Bảng 2.1: Khối lượng các cặn chiết thu được từ thân cây Na rừng
(Kadsura induta)
Khối lượng cặn chiết thu được (g) Thời gian thu mẫu 8/2012 Khối lượng mẫu khô (g)
n-hexan CH2Cl2 EtOAc MeOH
Thân 1500g 18,0g KlH 15,5 g KIC 8,4 g KlE 28,2 g KlM
Bảng 2.2 : Khối lượng các cặn chiết thu được từ lá cây Na rừng
(Kadsura induta)
Khối lượng cặn chiết thu được (g) Thời gian thu mẫu 8/2012 Khối lượng mẫu khô (g) n-hexan CH2Cl2 EtOAc Lá 500g 9,2 g KlH 21,0 g KIC 7,7 g KlE
2.3.2. Khảo sát định tính các dịch chiết
2.3.2.1. Phát hiện các hợp chất sterol
Lấy 0,01g cặn của các phân đoạn, thêm 2ml dung dịch NaOH 10% đun cách thuỷ đến khô. Hoà tan cặn trong 3ml cloroform - lấy dịch cloroform để làm phản ứng định tính các sterol và thuốc thử Lieberman - Bourchardt (gồm hỗn hợp 1ml anhydric acetic + 1ml cloroform để lạnh ở 00C, sau đó cho thêm 1 giọt H2SO4 đậm đặc). Lấy 1ml dịch cloroform rồi thêm 1 giọt thuốc thử, dung dịch xuất hiện màu xanh trong 1 thời gian là phản ứng dương tính.
Ống (3): 3 - 5 giọt thuốc thử Mayer, nếu xuất hiện tủa trắng là phản ứng dương tính.
2.3.2.2. Phát hiện các ancaloit
Lấy 0.01g cặn các phân đoạn, thêm 5ml HCl, khuấy đều, lọc qua giấy lọc, lấy vào 3 ống nghiệm, mỗi ống 1ml nước lọc axit.
ống (1): 1 - 2 giọt dung dịch silicostungtic axit 5%, nếu có tủa trắng và nhiều là phản ứng dương tính.
ống (2): 1 - 2 giọt thuốc thử Dragendorf, nếu xuất hiện màu da cam là phản ứng dương tính.
ống (3): 3 - 5 giọt thuốc thử Mayer, nếu xuất hiện tủa trắng là phản ứng dương tính.
2.3.2.3. Phát hiện các flavonoid
Lấy 0,01g cặn của các phân đoạn, thêm 10ml metanol, đun nóng cho tan và lọc qua giấy lọc. Lấy 2ml nước lọc vào ống nghiệm, thêm một ít bột magiê (Mg) hoặc Zn, sau đó cho vào 5 giọt HCl đậm đặc, đun trong bình cách thuỷ vài phút. Dung dịch xuất hiện màu đỏ, hoặc màu hồng là phản ứng dương tính với các flavonoid.
2.3.2.4. Phát hiện các cumarin
Dịch để thử định tính được chuẩn bị như mục 2.3.2.1. Lấy vào 2 ống nghiệm, mỗi ống 2ml dịch thử cho vào một trong 2 ống đó 0,5ml dung dịch
NaOH 10%. Đun cách thuỷ cả hai ống trên đến sôi, để nguội rồi mỗi ống cho thêm 4ml nước cất. Nếu chất lỏng ở ống có kiềm trong hơn ở ống không kiềm có thể xem là phản ứng dương tính, nếu đem axit hoá ống có kiềm bằng một vài giọt HCl đậm đặc sẽ làm cho dịch đang trong mất màu vàng xuất hiện vẩn đục và có thể tạo ra tủa là phản ứng dương tính.
Ngoài ra có thể làm phản ứng điazo hoá với axit sulfanilic trong môi trường axit, nếu cho màu da cam đến cam nhạt, sẽ là dương tính cho cumarin.
2.3.2.5. Định tính các glucosid tim
Chuẩn bị dịch thử định tính cũng làm như mục 2.3.2.1.
+ Phản ứng Legal: cho vào ống nghiệm 0,5ml dịch thử, thêm vào 1 giọt dung dịch natri prussiat 0,5% và 2 giọt NaOH 10% nếu xuất hiện màu đỏ là phản ứng dương tính với vòng butenolid.
+ Phản ứng Keller - Kilian: Thuốc thử gồm 2 dung dịch. Dung dịch 1: 100ml axit axetic loãng + 1ml FeCl3 5% Dung dịch 2: 100ml axit H2SO4 đậm đặc + 1ml FeCl3 5%
Cách tiến hành: lấy 0,01g cặn các dịch chiết cho vào ống nghiệm thêm vào 1ml dung dịch 1, lắc đều cho tan hết, nghiêng ống nghiệm và cho từ từ 1ml dung dịch 2 theo thành ống nghiệm, quan sát sự xuất hiện của màu đỏ hay nâu đỏ, giữa hai lớp chất lỏng. Nếu không xuất hiện màu là phản ứng âm tính với các glucosit tim.
2.3.2.6. Định tính các saponin
Chuẩn bị dịch thử như ở mục 2.3.2.1. lấy 2 ống nghiệm mỗi ống cho 2ml dịch thử. Ống 1 cho 1ml HCl loãng, ống 2 cho 1 ml NaOH loãng rồi bịt miệng ống nghiệm, lắc trong vòng 5 phút theo chiều dọc, quan sát sự xuất hiện và mức độ bền vững của bọt. Nếu bọt cao quá 3 - 4 cm và bền trên 15 phút là phản ứng dương tính.
Kết quả phân tích định tính các nhóm chất trong thân cây Na rừng
Bảng 2.3 :Kết quả định tính các nhóm chất trong thân Na rừng
(Kadsura induta)
STT Nhóm chất Thuốc thử Hiện tượng Thân
1 Sterol Lieberman-Bourchard Màu xanh vàng +
2 Ancaloit Dragendorff Vàng da cam -
Zn(Mg) + HCl Dung dịch nhạt màu dẫn đến màu đỏ nhạt + H2SO4 đặc Hồng nhạt + NaOH đặc Vàng + 3 Flavonoit FeCl3 5% Xanh thẫm +
4 Cumarin Phản ứng tạo kết tủa
bông Có kết tủa -
5 Glycosit trợ tim
FeCl3 trong CH3COOH +
H2SO4đ Nâu đỏ rõ -
6 Saponin Phản ứng tạo bọt Bọt bền trong HCl +
Chú giải : + : Phản ứng dương tính ─ : Phản ứng âm tính
2.4. Phân lập và tinh chế các chất
2.4.1. Cặn dịch chiết n-hexan của thân cây Kadsura induta (KIH)
Lấy 18,2 g cặn chiết hexan đem tách trên cột silica gel, rửa giải cột bằng hệ dung môi etylaxetat-hexan theo tỷ lệ tăng dần từ 0-100%. Dịch rửa giải thoát ra từ cột được thu ở những khoảng cách nhỏ (5-10 ml/ phân đoạn). Kiểm tra cặn thu được bằng sắc ký lớp mỏng và hiện màu bằng thuốc thử vanilin-H2SO4 5%, sau đó các phân đoạn giống nhau được dồn lại rồi đem cất loại dung môi
2.4.1.1. Chất (KIH 14)
Ở hệ rửa giải cột theo tỷ lệ dung môi n-hexan - etyl axetat (20:1), thu được khối chất rắn vô định hình, tách lặp lại trên cột silicagel và kết tinh lại trong n-hexan đã thu được tinh thể hình kim không màu (22,2 mg), Rf = 0,60.
2.4.1.2. Axit schizandronic (KIH 78)
Thay đổi hệ dung môi rửa giải cột bằng hệ n-hexan – etyl axetat theo tỷ lệ (15:1) thu được khối chất vô định hình. Đem kết tinh lại trong dung môi n-hexan thu được chất sạch có khối lượng 30,2mg, nóng chảy ở 166- 167 oC, RfA = 0,54.
FI-IR: (νmax cm-1): 3250, 2961, 1712, 1680, 1620, 1465, 1263.
ESI-MS, m/z: 455,0 [M+H]+ ứng với công thức phân tử là C30H46O3. 1 H-NMR (500 MHz, CDCl3, TMS, ppm): 0,57 (1H, d, J=4,0 Hz, H- 19a); 0,78 (1H, d, J=4,0 Hz, H-19b); 0,89 (3H, s, 18-CH3); 0,90 (3H, d, J= 2,0Hz, 21-CH3); 0,99 (3H, s, 30-CH3); 1,04 (3H, s, 28-CH3); 1,10 (3H, s, 29- CH3) và 1,92 (3H, s, 27-CH3); 6,1 (1H, t, J = 7,0 Hz, H-14). 13 C-NMR (125 MHz, CDCl3, TMS, ppm) 35,57 (t, C-1); 37,45 (t, C-2); 216,5 (s, C-3); 50,23 (s, C-4); 48,44 (d, C-5); 21,51 (t, C-6); 28,14 (t, C-7); 47,88 (d, C-8); 21,08 (s, C-9); 25,97 (s, C-10); 26,73 (t, C-11); 35,82 (t, C-12); 45,36 (s, C-13); 48,74 (s, C-14); 33,42 (t, C-15); 26,87 (t, C-16); 52,20 (d, C- 17); 18,13 (q, C-18); 29,55 (t, C-19); 36,00 (d, C-20); 18,08 (q, C-21); 32,78 t, (C-22); 25,87 (t, C-23); 147,15 (d, C-24); 125,86 (s, C-25); 172,5 (s, C-26); 20,54 (q, C-27); 19,29 (q, C-28); 22,18 (q, C-29); 20,76 (q, C-30). 2.4.1.3. 19-methylendioxi,1,2,3,14-tetra methoxy,6-benzoyl,9-propanoyl-15,16- cyclolignan(TKIH 180)
Tiếp tục rửa giải cột bằng hệ dung môi n-hexan – etyl axetat theo tỷ lệ (1:1) thu được khối chất rắn dạng tủa bông. Tách lặp lại trên cột silica gel dung hệ dung môi rửa giải chloroform-methanol tỷ lệ 95:5 thu được chất kết tinh hình kim không màu có khối lượng 8,8mg, RfB = 0,36.
1
H-NMR (500 MHz, CDCl3, TMS, ppm):7,46 (2H, m, H-3” và H-7”); 7,32 (2H, t, J = 8.0Hz, H-4” và H-6”); 7,50 (1H, m, H-5”); 6,85 (1H, s, H-4); 6,53 (1H, s, H-11); 5,88 (1H, s, H-6); 5,77 (1H, d, J = 1,5 Hz, H-19); 5,77 (1H, s, H-9); 5,63 (1H, d, J = 1,5 Hz, H-19); 3,95 (3H, s, 3-OCH3); 3,86 (3H, s, 2- OCH3); 3,61 (3H, s, 1-OCH3); 3,31 (3H, s, 14-OCH3); 2,32 (1H, d, J = 7,0 Hz, H-8); 1,39 (3H, s, H-17); 1,30 (3H, d, J = 7,0 Hz, H-18); 1,70 (3H, s, H-2’); 1,90 (1H, dd, J = 7,5; 17,5Hz, H-3’A); 1,75 (1H, dd, J = 7,5; 17,5Hz, H-3’B); 1,31 (3H, d, J = 7,0Hz, 2’-CH3); 0,86 (3H, t, J = 7,5; 15,0Hz, H-4’). 13 C-NMR (125 MHz, CDCl3, TMS, ppm): 151,39 (s, C-1); 141,15 (s, C-2); 151,94 (s, C-3); 110,34 (d, C-4); 129,64 (s, C-5); 85,23 (d, C-6); 74,01 (s, C-7); 43,20 (d, C-8); 83,38 (d, C-9); 132,92 (s, C-10); 101,73 (d, C-11); 148,77 (s, C-12); 135,49 (s, C-13); 141,50 (s, C-14); 120,20 (s, C-15); 121,84 (s, C- 16); 28,72 (q, C-17); 17,07 (q, C-18); 100,81 (t, C-19); 60,54 (q, 1-OCH3); 60,39 (q, 2-OCH3); 56,01 (q, 3-OCH3); 58,65 (q, 14-OCH3); 164,71 (s, C-1”); 129,32 (s, C-2”); 129,43 (s, C-3”); 127,86 (s, C-4”); 132,77 (s, C-5”); 127,86 (s, C-6”); 129,43 (s, C-7”); 172,33 (s, C-1’); 26,81 (s, C-2’); 26,81 (t, C-3’); 8,40 (q, C-4’); 28,78 (q, 2’-CH3);.
2.4.1.4. Schizanrin F (KIH 245)
Tiếp tục rửa giải cột bằng hệ dung môi n-hexan – etyl axetat theo tỷ lệ (10:1) thu được khối chất rắn hạt tròn, nặng, màu trắng kết tinh lại trong axeton thu được chất kết tinh hình kim có khối lượng 29,13mg, nóng chảy ở 183-184 o
C, RfB= 0,45.
FI-IR: (νmax cm-1): 3568, 2961, 1722, 1620,1465, 1380, 1237.
ESI-MS, m/z: 534 [M-CH3COOH]+ và 412 [M-CH3COOH-C6H5COOH]+ ứng với công thức phân tử là C32H34O11.
1
H-NMR (500 MHz, CDCl3, TMS, ppm): 7,46 (2H, m, H-3” và H-7”); 7,32 (2H, t, J = 8.0Hz, H-4” và H-6”); 7,50 (1H, m, H-5”); 6,84 (1H, s, H-4); 6,52 (1H, s, H-11); 5,78 (1H, d, J = 1,5 Hz, H-19); 5,88 (1H, s, H-6); 5,75 (1H,
s, H-9); 5,63 (1H, d, J = 1,5 Hz, H-19); 3,95 (3H, s, 3-OCH3); 3,87 (3H, s, 2- OCH3); 3,63 (3H, s, 1-OCH3); 3,32 (3H, s, 14-OCH3); 2,30 (1H, d, J = 7,0 Hz, H-8); 1,39 (3H, s, H-17); 1,31 (3H, d, J = 7,0 Hz, H-18); 1,60 (3H, s, H-2’) 13 C-NMR (125 MHz, CDCl3, TMS, ppm): 151,35 (s, C-1); 141,16 (s, C-2); 151,92 (s, C-3); 110,26 (d, C-4); 129,69 (s, C-5); 85,19 (d, C-6); 74,01 (s, C-7); 43,22 (d, C-8); 83,40 (d, C-9); 132,63 (s, C-10); 101,67 (d, C-11); 148,77 (s, C-12); 135,50 (s, C-13); 140,52 (s, C-14); 120,0 (s, C-15); 121,87 (s, C-16); 28,80 (q, C-17); 17,05 (q, C-18); 100,8 (t, C-19); 60,47 (q, 1-OCH3); 60,47 (q, 2-OCH3); 56,01 (q, 3-OCH3); 58,68 (q, 14-OCH3); 164,71 (s, C-1”); 129,33 (s, C-2”); 129,44 (s, C-3”); 127,87 (s, C-4”); 132,93 (s, C-5”); 127,87 (s, C-6”); 129,44 (s, C-7”); 168,85 (s, C-1’); 20,47 (s, C-2’).
2.4.1.5. Hợp chất (KlH 345)
Tiếp tục rửa giải cột bằng hệ dung môi n-hexan : etyl axetat (3: 1) cặn thu chất kết tinh mầu trắng, có khối lượng 7 mg được kiểm tra bằng sắc kí lớp mỏng trong cho Rf C = 24.
2.4.2. Cặn dịch chiết etylaxetat của thân cây Kadsura induta (KlE)
Dịch chiết etylaxetat làm khan bằng Na2SO4, sau đó cất loại dung môi dưới áp suất giảm, thu được 8,4 g cặn chiết, đem tách trên cột silicagel. Rửa giải cột bằng hệ dung môi chloroform-metanol tăng dần theo độ phân cực (0- 100%), dịch rửa giải thoát ra từ cột được thu ở những khoảng cách nhỏ (510ml/phân đoạn). Kiểm tra cặn thu được bằng sắc ký lớp mỏng và hiện màu bằng thuốc thử vanilin - H2SO4 5% sau đó các phân đoạn giống nhau được dồn lại rồi đem cất loại dung môi.
Chất (KlE 46)
Rửa giải cột bằng hệ dung môi chloroform-metanol theo tỷ lệ (5: 1) thu được chất bột vô định hình, làm sạch khối chất rắn này trong dung môi etyl axetat rồi kết tinh lại trong metanol thu được chất bột màu vàng nhạt có khối lượng 10 mg, nóng chảy ở 256-258 oC, RfD= 0,67.
1 H-NMR (500 MHz, MeOD, TMS, ppm): 7,46 (1H, dd, J= 2,5 và 8,0Hz, H-2’); 7,43 (1H, d, J = 2,0Hz, H-6’); 6,93 (1H, d, J = 8,5Hz, H-3’); 6,83 (1H, d, J = 2,5Hz, H-8); 6,63 (1H, s, H-3); 6,52 (1H, d, J = 2,5Hz, H-1”); 5,09 (1H, dd, J = 3,5 và 7,5Hz, H-6); 3,94 (1H, dd, J = 2,5Hz và 12,5Hz, HA- 6”); 3,73 (1H, dd, J = 6,0 và 12,5Hz, HB-6”); 3,56 (1H, m, H-3”); 3,51 (2H, m, H-5”); 3,51 (2H, m, H-2”); 3,42 (1H, m, H-4”). 13 C-NMR (125 MHz, MeOD, TMS, ppm): 164,84 (s, C-2); 104,18 (d, C- 3); 184,07 (s, C-4); 162,91 (s, C-5); 101,68 (d, C-6); 166,90 (s, C-7); 96,07 (d, C- 8); 158,98 (s, C-9); 107,10 (s, C-10); 121,50 (s, C-1’); 114,29 (d, C-2’); 147,11 (s, C-3’); 151,22 (s, C-4’); 116,80 (d, C-5’); 120,52 (s, C-6’); 100,53 (d, C-1”); 74,74 (d, C-2”); 78,41 (d, C-3”); 71,28 (d, C-4”); 77,87 (d, C-5”); 62,47 (t, C-6”).
2.4.3. Cặn dịch chiết n-hexan của lá cây Kadsura induta (KIH)
Lấy 9,2 g cặn chiết hexan đem tách trên cột silica gel, rửa giải cột bằng hệ dung môi etylaxetat-hexan theo tỷ lệ tăng dần từ 0-100%. Dịch rửa giải thoát ra từ cột được thu ở những khoảng cách nhỏ (5-10 ml/ phân đoạn). Kiểm tra cặn thu được bằng sắc ký lớp mỏng và hiện màu bằng thuốc thử vanilin-H2SO4 5%, sau đó các phân đoạn giống nhau được dồn lại rồi đem cất loại dung môi.
2.4.3.1. Chất (KIH 5)
Rửa giải cột bằng hệ dung môi n-hexan - etyl axetat (50:1), thu được khối chất rắn vô định hình, tách lặp lại trên cột silicagel và kết tinh lại trong n- hexan đã thu được tinh thể hình kim không màu (4,3 mg), Rf = 48.
2.4.3.2. Chất (KIH 13)
Thay đổi hệ dung môi rửa giải cột bằng hệ n-hexan – etyl axetat theo tỷ lệ (50:1) thu được khối chất vô định hình. Đem kết tinh lại trong dung môi
Chương 3
THẢO LUẬN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU
3.1. Phát hiện các nhóm chất của cây Kadsura induta
Để xác định sự có mặt của các nhóm chất trong cây, điều cần thiết là ưu tiên ngâm chiết mẫu theo độ phân cực của dung môi, việc này được thực hiện theo sơ đồ 2.1.
Những cặn chiết thu được đem thử nghiệm với các phản ứng hoá học đặc hiệu sẽ cho biết những lớp chất nào có mặt trong đó. Kết quả xác định thành phần định tính một số nhóm chất cơ bản cho biết trong thân cây Na rừng có phản ứng dương tính với sterol, flavonoit và saponin.
Các cặn chiết thu được từ thân cây Kadsura induta được thực hiện trên cột silicagel với các hệ dung môi rửa giải thích hợp và thường phải lặp lại một vài lần để thu được các chất ở dạng tinh sạch, đáp ứng yêu cầu cho việc xác định cấu trúc hóa học.
3.2. Phân lập và nhận dạng các chất từ dịch chiết
3.2.1. Các chất steroit
Thông thường với hầu hết các loài thực vật nhóm chất steroit thường hay có mặt trong cặn chiết hexan và phần không phân cực của cặn etylaxetat. Từ thân và lá cây Na rừng (K.induta) bằng phương pháp sắc ký trên cột silica gel đã phân lập và xác định được 02 sterol quen thuộc đó là -sitosterol và sitosterol-3-O--D-glucopyranosid. Dựa vào các đặc trưng hoá lý của 2 chất phân lập được đối chiếu với chất chuẩn như: đo nhiệt độ nóng chảy, được thực hiện trên sắc ký lớp mỏng trong cùng điều kiện hệ dung môi phân tích: chất chuẩn, chất thực nghiệm cùng với hỗn hợp chất chuẩn và chất thực nghiệm đều cho kết quả như nhau và có cấu trúc sau:
RO 3 5 8 10 12 14 15 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 R (1) -sitosterol H (2) -sitosterol-glucosid Gluc
3.2.2. Hợp chất tritecpenoit: axit schizandronic (KIH 78)
Hợp chất này phân lập được từ dịch chiết hexan trong thân cây Na rừng. Từ 18,2g cặn thô n-hexan đem tách trên cột silicagel. Rửa giải cột bằng hệ dung môi n- hexan – etyl axetat tăng dần theo độ phân cực (0-100%). Ở hệ dung môi rửa giải cột hệ n-hexan – etyl axetat theo tỷ lệ (15:1) thu được khối chất vô định hình. Đem kết tinh lại trong dung môi n-hexan thu được chất sạch có khối lượng 30,2mg, nóng chảy ở 166-167 oC, RfA = 0,54.
Phổ IR cho biết có hấp thụ của nhóm CH tại vùng 2961cm-1, tại vùng 1712, 1680cm-1 đặc trưng cho hấp thụ của nhóm C=O, ở vùng 1620cm-1 đặc trưng cho hấp thụ của liên kết C=C.
Phổ ESI-MS positive, m/z cho pic giả phân tử: 455,0 [M+H]+ ứng với công thức phân tử M = C30H46O3.
Phổ 1H-NMR (CDCl3): 500MHz, δ (ppm) cho biết có một tín hiệu proton olefin đặc trưng ở H 6,1 (1H, dt, J=14,0 và 7,0 Hz, H-24) và tín hiệu của 6 nhóm metyl ở các H 0,89 (3H, s, 18-Me); 0,90 (3H, d, J=2,0Hz, 21-Me); 1,92 (3H, s, 27-
1
H-NMR của 1 còn cho biết thêm một số tín hiệu proton khác như 2 proton H-2 ở H 2,70 (1H, dt, J= 6,5 và 14,0 Hz, H-2) và 2,3 (1H, dt, J = 4,0 và 6,5 Hz, H-2); proton H-5 ở H 1,70 (1H, dd, J= 4,5 và 12,5 Hz, H-5); proton H-19a,b thuộc vòng cyclopropan ở H 0,78 (1H, d, J=4,0 Hz, H-19a) và 0,58 (1H, d, J=4,0 Hz, H-19b).
Phổ 13C-NMR và DEPT (CDCl3) 125MHz, δ (ppm) của 1 cho biết trong phân tử có tổng cộng 30 nguyên tử C gồm 8 cacbon bậc 4 với 2 cacbon carbonyl, 1 nhóm oxocarbonyl ở C 216,5 (C-3) và 1 nhóm carboxycarbonyl ở C 172,5 (C-26); 1 cacbon olefin ở C 125,86 (C-25); 5 cacbon bậc 4 còn lại ở các C 50,23 (C-4); 21,08 (C-9); 25,97 (C-10); 45,36 (C-13) và 48,74 (C-14); 5 cacbon bậc 3 ở các C 147,15 (cacbon olefin C-24); 48,44 (d, C-5); 47,88 (C-8); 52,20 (C-17), và 36,00 (C-20); 11 cacbon bậc 2 ở các C 35,57 (C-1); 37,45 (C-2); 21,51 (C-6); 28,14 (C- 7); 26,73 (C-11); 35,82 (C-12); 33,42 (C-15); 26,87 (C-16); 29,55 (C-19); 32,87 (C- 22); 25,87 (C-23); và 6 cacbon metin ở các C 18,13 (C-18); 18,08 (C-21); 20,54 (C-27); 19,29 (C-28); 22,18 (C-29) và 20,76 (C-30). Phân tích phổ HMBC của 1 và kết hợp so sánh với số liệu phổ của axit schisandronic (axit 3-oxocycloart-24Z-en- 26-oic) trong tài liệu [29], [37], [42], [46] cho thấy chất TKIH 78 hoàn toàn phù hợp với cấu trúc của axit schizandronic.
O 1 3 4 5 6 9 19 13 14 17 18 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 2 8 11 OH O
3.2.3. Hợp chất dibenzocyclooctadienlignan
3.2.3.1. Schizanrin F (TKIH245)
Chất này cũng được phân lập từ cặn chiết hexan. Thay đổi hệ dung môi rửa giải cột n-hexan – etyl axetat theo tỷ lệ (10:1) thu được khối chất rắn hạt