3. Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tài
2.4.Nguyên vật liệu và các thiết bị dùng trong nghiên cứu
- Số liệu dịch bệnh PRRS của Chi cục Thú y tỉnh Bắc Ninh, và Cục Thú y từ năm 2010 - 2013 được tổng hợp theo biểu mẫu của Cục Thú y.
- Mẫu bệnh phẩm được sử dụng trong nghiên cứu là: Phổi, hạch phổi, tim, gan, lá lách, thận… của các nhóm lợn mắc PRRS.
- Hoá chất sử dụng làm tiêu bản vi thể, trong nuôi cấy tế bào, nhuộm hóa miễn dịch: formol 10%, cồn, xylen, parafin, thuốc nhuộm haematoxylin, thuốc nhuộm eosin, môi trường nuôi cấy DMEM, FSB, kháng sinh, DMSO, trypsin, EDTA, PBS, kháng thể kháng PRRS, kháng kháng thể tương ứng chẩn đoán PRRS, muối NaHCO3…
- Tủ lạnh, tủ ấm 370C, tủ sấy, buồng cấy vô trùng.
- Máy đúc tự động, máy cắt Microtome, máy ly tâm lạnh, máy votex, máy PCR, máy chạy điện di, máy chụp ảnh gel.
- Các dụng cụ khác gồm: Lam kính, kính hiển vi, bình nuôi cấy tế bào, ống eppendoft, pipet, găng tay…
2.5. Phƣơng pháp nghiên cứu
2.5.1. Phương pháp nghiên cứu dịch tễ học
- Sử dụng tổng hợp các phương pháp nghiên cứu dịch tễ học mô tả (Descriptive study), nghiên cứu dịch tễ học phân tích (Analytic study) và nghiên cứu dịch tễ học thực nghiệm.
- Phương pháp dịch tễ học nghiên cứu hồi quy dựa vào bảng câu hỏi điều tra để tổng hợp các thông tin về các ổ dịch.
- Phương pháp dịch tễ học thực địa dựa vào việc điều tra ổ dịch để tổng hợp các yếu tố nguy cơ làm phát tán lây lan dịch bệnh và so sánh đối chiếu các thông tin của một số ổ dịch.
2.5.2. Phương pháp quan sát
Để xác định được triệu chứng lâm sàng chủ yếu của lợn mắc PRRS, chúng tôi tiến hành quan sát, ghi chép, thống kê các biểu hiện của lợn từ khi xuất hiện những dấu hiệu bệnh lý đầu tiên. Đồng thời dựa vào các đặc
điểm dịch tễ học, những can thiệp trong quá trình bệnh xảy ra cũng như thu thập các thông tin liên quan. Tiến hành phân tích, thống kê để đưa ra những kết quả chính xác. Xác định chính xác những triệu chứng lâm sàng chủ yếu có ý nghĩa vô cùng quan trọng cho các bước thí nghiệm tiếp theo.
2.5.3. Phương pháp mổ khám
Để xác định được các biển đổi đại thể của các cơ quan, tổ chức của lợn mắc PRRS cần tiến hành mổ khám những lợn có biểu hiện triệu chứng lâm sàng của bệnh. Lợn bệnh được cố định cẩn thận, tiến hành lấy máu từ vịnh tĩnh mạch cổ. Lột da và bộc lộ xoang ngực, xoang bụng, tách các cơ quan nội tạng khỏi cơ thể quan sát và chụp ảnh. Tiến hành thu mẫu các cơ quan như: phổi, hạch phổi, tim, gan, lá lách… ngâm trong formol 10% làm tiêu bản vi thể.
2.5.4. Phương pháp làm tiêu bản bệnh lý
Từ những mẫu bệnh phẩm có các biến đổi đại thể cần tiến hành làm tiêu bản để xác định bệnh tích vi thể chủ yếu của bệnh. Phương pháp làm tiêu bản vi thể theo quy trình tẩm đúc bằng parafin, nhuộm Haematoxilin – Eosin (HE). Các bước của quá trình làm tiêu bản vi thể như sau:
Cố định bệnh phẩm:
Ngâm miếng tổ chức vào dung dịch formol 10%.
Vùi bệnh phẩm:
Tiến hành lần lượt các bước sau:
- Rửa focmol: Rửa dưới vòi nước chảy nhẹ trong 24h. - Đưa mẫu vào hệ thống máy chuyển đúc mẫu tự động. Hệ thống máy chuyển đúc mẫu tự động bao gồm 12 bình.
Bảng 2.1. Quy trình hoạt động của hệ thống máy chuyển đúc mẫu tự động
Bình Hoá chất Thời gian (giờ)
1 Cồn 600 C 1:00 2 Cồn 600 C 1:00 3 Cồn 700 C 1:30 4 Cồn 800 C 1:30 5 Cồn 960 C 1:30 6 Cồn 1000 C 1:30 7 Cồn 1000 C 1:30 8 Cồn 1000 C 1:30 9 Xylen 1:30 10 Xylen 1:30 11 Parafin 2:00 12 Parafin 2:00 Đúc block
Đúc mẫu bệnh phẩm trong parafin
Cắt dán mảnh và cố định tiêu bản
Cắt mảnh: Bằng máy cắt microtome.
Tãi mảnh: Tãi lát cắt bằng phẳng trên phiến kính trong nước ấm 480
C. Sau đó để tủ ấm 370C đến khi bệnh phẩm khô là có thể đem nhuộm được. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Nhuộm tiêu bản
Các bước tiến hành:
+ Khử parafin: Cho tiêu bản qua hệ thống xylen gồm 3 lọ: Xylen I : 6h
Xylen II : 6h Xylen III : 12h
+ Khử xylen: Cho tiêu bản qua hệ thống cồn gồm 4 lọ: Cồn 1000 : 2 lần (mỗi lần 1 phút)
Cồn 950 : 1 lần Cồn 700 : 1 lần Cồn 500 : 1 lần
+ Khử cồn: Cho dưới vòi nước chảy 15 phút. + Nhuộm Haematoxylin (nhuộm nhân tế bào).
Nhỏ Haematoxylin ngập tiêu bản trong 5 phút, rửa nước. Sau đó cho tiêu bản qua hệ thống cồn:
Cồn 500 : 1 lần Cồn 700 : 1 lần Cồn 950 : 1 lần Cồn 1000 : 2 lần Rửa tiêu bản
+ Nhuộm Eosin (nhuộm nguyên sinh chất của tế bào). Nhỏ Eosin ngập tiêu bản khoảng 5 – 10 phút, rửa nước. Cho tiêu bản qua hai lọ cồn 1000
mỗi lọ 1 phút.
+ Tẩy cồn, làm trong tiêu bản: Cho tiêu bản đi qua xylen.
Gắn Baume canada
Nhỏ một giọt Baume canada lên lamen rồi gắn nhanh lên tiêu bản khi vẫn còn xylen trên tiêu bản. Kiểm tra tiêu bản trên kính hiển vi quang học.
2.5.5. Phương pháp xử lý số liệu
Các số liệu thu thập được qua quá trình theo dõi thí nghiệm được xử lý bằng các phần mềm Excel.
CHƢƠNG 3
KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.1. Diễn biến tình hình dịch PRRS tại tỉnh Bắc Ninh từ 2010 - 2013
3.1.1. Diễn biến tình hình dịch PRRS năm 2010 – 2013
Năm 2010: Dịch PRRS lần đầu tiên xuất hiện vào ngày 06/04/2010 và
gây ra những tổn thất đáng kể cho ngành chăn nuôi lợn toàn tỉnh. Số liệu các ổ dịch năm 2010 được tóm tắt tại Bảng 3.1.
Bảng 3.1. Tổng hợp số liệu tình hình dịch PRRS năm 2010 TT Huyện (Thành phố) Số phƣờng, xã có dịch Số lợn ốm Số lợn khỏi Số lợn chết, hủy Tỷ lệ chết, hủy 1 TP. Bắc Ninh 14 2.307 1.211 1.096 47,5% 2 Gia Bình 14 7.556 4.940 2.616 34,6% 3 Lương Tài 14 7.840 5.234 2.606 33,2% 4 Quế Võ 21 7.934 3.917 4.017 50,6% 5 Thuận Thành 18 17.630 8.433 9.197 52,2% 6 Tiên Du 13 10.945 6.197 4.748 43,4% 7 Từ Sơn 12 3.666 2.151 1.515 41,3% 8 Yên Phong 14 6.195 2.248 3.947 63,7% Tổng số 120 64.073 34.331 29.742 46,4%
Trong năm 2010, dịch PRRS xuất hiện tại 120 phường/xã thuộc 8 thành phố/huyện của tỉnh Bắc Ninh. Tổng số lợn ốm là 64.073 con, số chết và tiêu hủy là 29.742 con (chiếm 46,4%).
Dịch xảy ra nhiều nhất tại huyện Thuận Thành với 17.630 lợn ốm, chiếm 27,5% trong tổng số lợn ốm của toàn tỉnh.
Huyện Yên Phong có tỷ lệ lợn chết trên tổng số lợn ốm cao nhất: 3.947/6.195, chiếm 63,7%.
Quế Võ là huyện có số xã mắc nhiều nhất (21 xã), tiếp đó đến Thuận Thành (18 xã), Từ Sơn là huyện có số xã mắc ít nhất (12 xã)
Tỷ lệ lợn mắc bệnh và lợn chết do PRRS năm 2010 được thể hiện trên biểu đồ 3.1
Biểu đồ 3.1. Tình hình dịch tại tỉnh Bắc Ninh và tỷ lệ lợn chết do PRRS năm 2010 (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Năm 2011: Dịch PRRS tiếp tục bùng phát tại tỉnh Bắc Ninh gây tổn
thất nặng nề cho ngành chăn nuôi lợn. Tình hình dịch PRRS năm 2011 đuợc tổng hợp tại Bảng 3.2.
Bảng 3.2. Tổng hợp số liệu tình hình dịch PRRS năm 2011 TT Thành phố/huyện Lợn ốm do PRRS Số lợn chết/hủy do PRRS Tỷ lệ chết/hủy Nái mang thai Thịt Nái nuôi con Tổng số ốm Nái mang thai Thịt Nái nuôi con Tổng số chết 1 TP Bắc Ninh 0 0 0 0 0 0 0 0 0% 2 Gia Bình 1 42 10 53 1 42 10 53 100% 3 Lương Tài 7 183 144 334 7 183 144 334 100% 4 Quế Võ 0 12 0 12 0 12 0 12 100% 5 Thuận Thành 0 394 48 442 0 394 48 442 100% 6 Tiên Du 0 0 0 0 0 0 0 0 0% 7 Từ Sơn 0 0 0 0 0 0 0 0 0% 8 Yên Phong 0 0 0 0 0 0 0 0 0% Tổng số 8 631 202 841 8 631 202 841 100%
Dịch xảy ra một đợt từ 04/05/2011 đến 09/06/2011 tại 4 huyện: Gia Bình, Lương Tài, Quế Võ, Thuận Thành. Tổng số lợn mắc bệnh là 841 con, số chết và buộc tiêu hủy là 841 (chiếm 100%).
Tỷ lệ mắc bệnh, chết và tiêu hủy cao nhất là lợn thịt 631/841 con, chiếm 75%. Huyện có tỷ lệ mắc bệnh, chết và tiêu hủy cao nhất là Thuận Thành 442 con (53,5%), tiếp đó là Lương Tài 334 con (39,7%) và thấp nhất là Quế Võ 12 con (1,4%). Thuận Thành là một huyện cửa ngõ giáp danh với rất nhiều tỉnh/thành khác nhau như: Hà Nội, Hưng Yên, Hải Dương, chính vì vậy mà ở đây dịch thường nổ ra sớm và tỷ lệ mắc cũng như chết rất cao so với các huyện khác trong tỉnh.
Tỷ lệ lợn mắc bệnh và lợn chết do PRRS năm 2011 được thể hiện trên biểu đồ 3.2
Biểu đồ 3.2. Tình hình dịch tại tỉnh Bắc Ninh và tỷ lệ lợn chết do PRRS năm 2011
Nhìn chung năm 2011, Chi cục Thú y tỉnh Bắc Ninh đã chủ động triển khai công tác phòng chống dịch PRRS rộng khắp trên địa bàn của tỉnh nên thiệt hại do dịch gây ra đã giảm đáng kể so với năm 2010.
Năm 2012: Dịch PRRS tái xuất hiện từ ngày 27/4/2012 tại xã Đại Lai,
huyện Gia Bình. Sau đó, dịch tiếp tục lan rộng ra các huyện khác trên toàn tỉnh, được tổng hợp ở Bảng 3.3. Bảng 3.3. Tổng hợp số liệu tình hình dịch PRRS năm 2012 TT Thành phố/huyện Lợn ốm do PRRS Số lợn chết/hủy do PRRS Tỷ lệ chết/ hủy Nái mang thai Thịt Nái nuôi con Tổng số ốm Nái mang thai Thịt Nái nuôi con Tổng số chết 1 TP Bắc Ninh 0 185 0 185 0 53 0 53 28,6% 2 Gia Bình 483 3.558 1.648 5.689 152 1.267 1.111 2.530 44,5% 3 Lương Tài 17 283 31 331 12 118 13 143 43,2% 4 Quế Võ 52 636 125 813 15 268 118 401 49,3% 5 Thuận Thành 50 360 90 500 4 71 0 75 15% 6 Tiên Du 43 497 45 585 9 100 26 135 23,1% 7 Từ Sơn 0 0 0 0 0 0 0 0 0% 8 Yên Phong 0 0 0 0 0 0 0 0 0% Tổng số 645 5.519 1.939 8.103 192 1.877 1.268 3.337 41,2%
Trong năm 2012, dịch xảy ra trên 6 thành phố/huyện: TP. Bắc Ninh và các huyện Gia Bình, Lương Tài, Quế Võ, Thuận Thành, Tiên Du. Tổng số lợn mắc bệnh là 8.103 con, số lợn chết/hủy là 3.337 con (chiếm 41,2%).
Gia Bình là huyện có tỷ lệ mắc bệnh cao nhất 5.689/8.103 con (chiếm 70,2%), tiếp đến là Quế Võ 813/8.103 (chiếm 10%), thành phố Bắc Ninh có tỷ lên mắc thấp nhất (chiếm 2,3%) và 2 huyện không có dịch xảy ra là Từ Sơn, Yên Phong.
Quế Võ là huyện có tỷ lệ lợn chết trên tổng số lợn mắc bệnh cao nhất: 401/813 (chiếm 49,3%).
Tỷ lệ lợn mắc bệnh và lợn chết do PRRS năm 2012 được thể hiện trên biểu đồ 3.3
Biểu đồ 3.3. Tình hình dịch tỉnh Bắc Ninh và tỷ lệ lợn chết do PRRS năm 2012
Qua biểu đồ 3.3, cho thấy tỷ lệ lợn mắc bệnh và chết/hủy cao nhất trên lợn thịt: 5.519/8.103 lợn thịt ốm (chiếm 68%), 1.877/3.337 lợn thịt chết (chiếm 56,2%).
Năm 2013: Dịch xuất hiện vào ngày 12 tháng 04 trên địa bàn thị trấn
Hồ, huyện Thuận Thành khi phát hiện ổ dịch với số lợn mắc bệnh lên tới 215 con ở 27 hộ chăn nuôi. Tuy nhiên, do phát hiện sớm đồng thời có biện pháp bao vây ổ dịch kịp thời nên dịch đã không bùng phát mạnh và lây lan sang các xã, huyện khác.
Ngày 13 tháng 06 năm 2013, UBND tỉnh Bắc Ninh ban hành Quyết định số 672/QĐ-UBND về việc công bố hết dịch tai xanh ở lợn trên địa bàn thị trấn Hồ, huyện Thuận Thành.
3.1.2. So sánh tình hình dịch PRRS từ năm 2010 đến 2013
Bảng 3.4. So sánh tình hình dịch PRRS từ năm 2010 đến 2013 Nội dung so sánh Năm 2010 Năm 2011 Năm 2012 Năm 2013
Số xã có dịch 120 20 36 1
Số huyện có dịch 8 4 6 1
Số gia súc mắc bệnh 64.073 841 8.103 215
Số gia súc chết/tiêu hủy 29.742 841 3.337 215
Biểu đồ 3.4. So sánh tình hình dịch PRRS từ năm 2010 đến 2013
Qua bảng 3.4 và biểu đồ 3.4 cho thấy, năm 2010 dịch PRRS là nặng nhất xét cả về phạm vi ổ dịch, số lượng gia súc mắc bệnh và số gia súc buộc phải tiêu hủy. Dịch xuất hiện trên toàn tỉnh gồm: 1 thành phố, 7 huyện với 120 phường/xã. Số lượng lợn mắc bệnh và chết/tiêu hủy cao hơn cả 3 năm từ 2011 đến 2013. Năm 2013, do việc thực hiện tiêm phòng, kết hợp với việc khoanh vùng và xử lý ổ dịch nên tình hình dịch tai xanh trên địa bàn tỉnh được kiểm soát khá tốt.
3.2. Một số đặc điểm dịch tễ học của dịch PRRS từ năm 2010 – 2013
3.2.1. Biến đổi tỷ lệ mắc PRRS theo mùa (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Mùa vụ là yếu tố được rất nhiều nhà dịch tễ học quan tâm. Đây được coi là yếu tố strees khiến bệnh dịch phát sinh. Để hiểu rõ hơn về đặc điểm dịch tễ của PRRS, chúng tôi tiến hành theo dõi tỷ lệ nhiễm bệnh theo các mùa: Xuân, Hè, Thu, Đông. Kết quả được thể hiện ở Bảng 3.5.
Bảng 3.5. Biến động tỷ lệ mắc PRRS theo mùa
Năm
Tổng số lợn mắc (con)
Mùa
Xuân Hè Thu Đông
Số con mắc (con) Tỷ lệ mắc (%) Số con mắc (con) Tỷ lệ mắc (%) Số con mắc (con) Tỷ lệ mắc (%) Số con mắc (con) Tỷ lệ mắc (%) 2010 64.073 53.533 83,55 10.540 16,45 0 0 0 0 2011 841 0 0 841 100 0 0 0 0 2012 8.103 4.749 58,61 3.109 38,37 245 3,02 0 0 2013 215 184 85,58 31 14,42 0 0 0 0 Tổng 73.232 58.466 79,84 14.521 19,83 245 0,33 0 0
Qua bảng 3.5 cho thấy, trong những năm vừa qua tại tỉnh Bắc Ninh dịch PRRS xảy ra chủ yếu vào mùa Xuân (58.466 lợn mắc bệnh trong mùa Xuân so với 73.232 lợn mắc bệnh trong tất cả các đợt dịch, chiếm 79,84%). Sang mùa Hè tỷ lệ lợn mắc PRRS giảm đi rõ rệt (14.521 lợn mắc bệnh, chiếm 19,83% so với tổng số lợn bị mắc bệnh trong tất cả các đợt dịch). Đến mùa Thu tỷ lệ lợn mắc PRRS không đáng kể (245 lợn mắc bệnh so với tổng số lợn mắc bệnh trong tất cả các đợt dịch, chỉ chiếm 0,33%). Mùa Đông không có lợn mắc PRRS.
Vào mùa Xuân, cường độ ánh sáng yếu, mưa nhiều và độ ẩm rất cao. Đây là điều kiện thuận lợi cho các loài vi khuẩn, virus (trong đó có virus PRRS) sinh trưởng, phát triển (tăng lên về số lượng và độc lực), làm tăng khả năng gây bệnh. Mặt khác, do phong tục tập quán riêng của tỉnh Bắc Ninh, sau tết Nguyên đán có rất nhiều lễ hội lớn - nhỏ, để đáp ứng nhu cầu thực phẩm phục vụ các lễ hội số lượng đàn lợn cũng tăng mạnh (nhất là lợn thịt), mật độ chăn nuôi cao sẽ làm tăng mức độ ô nhiễm chuồng trại dẫn đến lợn dễ mẫn cảm với mầm bệnh nói chung và virus PRRS nói riêng, khi bệnh xảy ra cũng sẽ nhanh chóng bùng phát thành dịch. Bên cạnh đó, nhu cầu tiêu thụ thực phẩm tăng sau tết Nguyên đán nên việc buôn bán vận chuyển gia súc cũng tăng lên, làm cho dịch bệnh dễ dàng lây lan từ vùng này sang vùng khác dẫn đến số lượng lợn mắc bệnh tương đối cao, đặc biệt là những bệnh có tốc độ lây lan nhanh như PRRS.
Vào mùa Thu, Đông số lượng gia súc mắc bệnh không đáng kể. Theo chúng tôi, vào hai mùa này do khí hậu khô, hanh, nhiệt độ thấp nên không thích hợp cho sự sinh sản và phát tán của virus PRRS. Mặt khác, thời điểm này mặt độ chăn nuôi lợn cũng ít hơn so với mùa Xuân nên áp lực dịch bệnh cũng thấp hơn.
Như vậy, thường về mùa xuân tỷ lệ lợn mắc PRRS tăng cao hơn các mùa khác trong năm. Để nâng cao hiệu quả phòng bệnh PRRS cần khuyến
cáo người chăn nuôi chú ý phòng dịch định kỳ và thường xuyên cho đàn lợn đặc biệt vào mùa xuân.
3.2.2. Biến đổi tỷ lệ mắc bệnh PRRS theo từng loại lợn
Để hiểu rõ mức độ cảm nhiễm của các loại lợn đối với PRRSV chúng tôi đã tiến hành điều tra tỷ lệ nhiễm PRRS theo từng loại lợn. Kết quả được thể hiện ở Bảng 3.6.
Bảng 3.6. Biến đổi tỷ lệ mắc PRRS theo loại lợn
Năm