.4 ĐO NỒNG ĐỘ ACIDAMIN HUYẾT TƯƠNG TONG DỊCH SIÊU LỌC BẰNG HPLC VỚ

Một phần của tài liệu nghiên cứu định lượng acid amin tự do trong máu và nước tiểu bằng phương pháp sắc ký lỏng siêu hiệu năng (Trang 31 - 33)

Trong gần 40 năm qua, việc phân tách acid amin đã được tiến hành chủ u nhờ vào các thiết bị phân tích bằng sắc ký trao đổi ion và phát hiện bằng dẫn xuất hậu cột. Sử dụng thiết bị này được ủng hộ rộng rãi trước đây, đặc biệt là với các ứng dụng thường quy vì độ tin cậy của nó. Tuy nhiên những thiết bị phân tích này tốn công sức, chi phí cao, tốn thời gian và thường được tiến hành trên những thiết bị chuyên biệt. Trong những năm gần đây, phương pháp sử dụng dẫn xuất tiền cột kết hợp với HPLC pha đảo đã thu được những thành công ban đầu và dần thay thế cho việc phân tích acid amin cổ điển. Trong sự so sánh với sắc ký trao đổi ion-dẫn xuất hậu cột, thì HPLC –dẫn xuất tiền cột có những ưu điểm như tiết kiệm thời gian, nâng cao độ nhạy và độ linh hoạt, chi phí thấp trong vật tư và bảo dưỡng.

Trong số các phương pháp dẫn xuất tiền cột, O-phthaldialdehyde (OPA) đã được dựng như hóa chất dẫn xuất phổ biến nhất. Với sự có mặt của hợp chất chứa nhóm thiol và trong môi trường kiềm, OPA phản ứng với các acid amin bậc một để hình thành nên dẫn xuất isoindole phát huỳnh quang mạnh. Quá trình tạo dẫn xuất tương đối dễ dàng và phản ứng diễn ra nhanh chóng ở nhiệt độ phòng trong dung dịch nước , không cần đến các thao tác tinh sạch tốn công sức. Dẫn xuất OPA kém phân cực hơn các acid amin bậc một và có thể tách chiết khỏi nhau dễ dàng nhờ HPLC pha đảo. Hơn thế, thuốc thử bản thân nó không phát huỳnh quang và do vậy không tạo ra các peak nhiễ

Kỹ thuật s êu ọc có những ưu điểm trong loại bỏ protein mà không ần dùng đến hóa chất, thêm vào đó còn giữ cho mẫu gần với trạng thái sinh lý nhất. Một lợi thế của siêu lọc nữa là tiểu cầu và bạch u được loại bỏ khỏi huyết tương, đồng thời sự nhiễm tạp của các acid amin từ các thành phần tế

bào máu này được loại b . Kỹ thuật siêu lọc đã được lựa chọn để chuẩn bị các mẫu không có protein trong phân tích acid amin bằng phương pháp HPLC với dẫn xuất tiền cột. Kết quả chỉ ra rằng dịch siêu lọc của huyết tương có thể thay thế việc loại bỏ protein bằng hóa chất trong phân tích HPLC đối với acid amin tự do.

Một phần của tài liệu nghiên cứu định lượng acid amin tự do trong máu và nước tiểu bằng phương pháp sắc ký lỏng siêu hiệu năng (Trang 31 - 33)

Tải bản đầy đủ (DOC)

(130 trang)
w