3. Ý NGHĨA KHOA HỌC VÀ Ý NGHĨA THỰC TIỄN CỦA ĐỀ TÀI
2.1.ĐỐI TƢỢNG VÀ VẬT LIỆU NGHIÊN CỨU
2.1.1. Đối tƣợng nghiên cứu
- Đàn trâu, bò của tỉnh Thái Nguyên và Lạng Sơn. - Bệnh tiên mao trùng do Trypanosoma evansi gây ra.
2.1.2. Vật liệu nghiên cứu
- Mẫu máu trâu, bò.
- Giống Trypanosoma: đƣợc phân lập từ trâu, bò mắc bệnh tiên mao trùng tại các địa phƣơng nghiên cứu và đƣợc nhân lên trên động vật thí nghiệm.
- Động vật gây nhiễm T. evansi
Tất cả các động vật thí nghiệm (chuột bạch, thỏ) đều khoẻ mạnh. Động vật gây nhiễm phải đƣợc đảm bảo vệ sinh phòng bệnh theo quy trình chung của thú y. Động vật gây nhiễm phải tƣơng đối đồng đều về thể trọng, lứa tuổi, chế độ chăm sóc nuôi dƣỡng.
Động vật thí nghiệm đƣợc chọn theo số lƣợng và khối lƣợng nhƣ sau: Chuột bạch (18 – 20 g/con) : 80 con (40 cái, 40 đực).
Thỏ (1,5 – 2 kg/con) : 12 con.
* Hoá chất nghiên cứu:
- Thuốc nhuộm giemsa. - Dung dịch PBS pH = 7,2. - Cồn Methanol
- Dầu bạch dƣơng. - Formol 5%.
- Thuốc điều trị bệnh tiên mao trùng: Trypamidium, Azidin, Naganin.
* Dụng cụ dùng trong nghiên cứu:
- Kính hiển vi quang học. - Buồng đếm Neubauer. - Lam kính. - Lamen - Kim chích máu. - Tube tráng Heparin
- Xi lanh 1ml, 3ml, 5ml và kim tiêm các loại. - Chuồng nuôi thỏ và chuột thí nghiệm.
2.2. ĐỊA ĐIỂM, THỜI GIAN NGHIÊN CỨU
* Địa điểm nghiên cứu:
- Địa phƣơng triển khai lấy mẫu và ứng dụng: tỉnh Thái Nguyên và Lạng Sơn. - Địa điểm xét nghiệm mẫu và gây nhiễm động vật thí nghiệm: phòng thí nghiệm khoa Chăn nuôi Thú y - Trƣờng Đại học Nông Lâm Thái Nguyên.
* Thời gian nghiên cứu: Từ năm 2011 đến năm 2012.
2.3. NỘI DUNG NGHIÊN CỨU
2.3.1. Nghiên cứu đặc điểm dịch tễ bệnh T. evansi ở trâu, bò miền núi
2.3.1.1. Tình hình nhiễm T. evansi ở trâu
- Tỷ lệ nhiễm T. evansi ở trâu tại các địa phƣơng - Tỷ lệ nhiễm T. evansi ở trâu theo lứa tuổi - Tỷ lệ nhiễm T. evansi ở trâu theo mùa vụ - Tỷ lệ nhiễm T. evansi ở trâu theo tính biệt
2.3.1.2. Tình hình nhiễm T. evansi ở bò
- Tỷ lệ nhiễm T. evansi ở bò tại các địa phƣơng - Tỷ lệ nhiễm T. evansi ở bò theo tuổi
- Tỷ lệ nhiễm T. evansi ở bò theo mùa vụ - Tỷ lệ nhiễm T. evansi ở bò theo tính biệt
2.3.2. Khả năng gây bệnh của T. evansi trên chuột và thỏ gây nhiễm
2.3.2.1. Khả năng gây bệnh của T. evansi trên chuột
- Thời gian T. evansi xuất hiện trong máu của chuột bạch gây nhiễm. - Thời gian chết của chuột bạch sau gây nhiễm.
- Triệu chứng lâm sàng ở chuột bạch sau gây nhiễm. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
- Bệnh tích đại thể ở chuột bạch bị bệnh tiên mao trùng do gây nhiễm.
2.3.2.2. Khả năng gây bệnh của T. evansi trên thỏ
- Thời gian T. evansi xuất hiện trong máu của thỏ gây nhiễm
- Tần suất xuất hiện của T. evansi trong máu thỏ bị bệnh tiên mao trùng do gây nhiễm - Thời gian xuất hiện và triệu chứng lâm sàng ở thỏ sau gây nhiễm
- Bệnh tích đại thể ở thỏ bị bệnh tiên mao trùng do gây nhiễm
2.3.3. Nghiên cứu phác đồ điều trị bệnh T. evansi cho trâu, bò miền núi
2.3.3.1. Nghiên cứu lựa chọn phác đồ điều trị có hiệu quả cao và an toàn
- Thử nghiệm phác đồ điều trị bệnh tiên mao trùng ở trâu, bò trên diện hẹp - Thử nghiệm phác đồ điều trị bệnh tiên mao trùng ở trâu, bò trên diện rộng - Ứng dụng phác đồ có hiệu quả cao trong điều trị bệnh tiên mao trùng ở các địa phƣơng
2.3.3.2. Đề xuất biện pháp phòng chống bệnh T. evansi cho trâu, bò miền núi
2.4. PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.4.1. Phƣơng pháp thu thập mẫu 2.4.1. Phƣơng pháp thu thập mẫu
2.4.1.1. Bố trí thu thập mẫu
- Bố trí thu thập mẫu theo phƣơng pháp lấy mẫu chùm nhiều bậc. Mỗi tỉnh thu thập mẫu tại 3 huyện đại diện cho tỉnh, mỗi huyện thu thập mẫu tại 5 xã đại diện cho huyện.
- Mẫu đƣợc thu thập ngẫu nhiên tại các nông hộ, trang trại chăn nuôi trâu, bò tại 2 tỉnh: Thái Nguyên, Lạng Sơn.
- Các loại mẫu đƣợc xét nghiệm ngay trong ngày hoặc xét nghiệm sau khi bảo quản theo quy trình bảo quản mẫu trong nghiên cứu ký sinh trùng học.
2.4.1.2. Phương pháp lấy mẫu
* Lấy mẫu máu:
- Lấy máu trâu bò: sát trùng rìa tai trâu, bò bằng cồn 700. Dùng kim trích máu vô trùng chọc ngang một mạch máu ở rìa tai, cho máu chảy vào ống Tube có tráng chất chống đông, ghi ký hiệu mẫu; thể trạng trâu, bò; triệu chứng lâm sàng (nếu có); tên chủ hộ; địa chỉ; ngày lấy mẫu. Bảo quản mẫu ở 40C.
- Lấy máu chuột: dùng kim chích vào chóp đuôi chuột, vuốt nhẹ đuôi để máu chảy, nhỏ 1 giọt lên phiến kính, đậy lamen để soi tƣơi hoặc phết kính nhuộm Giemsa.
- Lấy máu thỏ: sát trùng tĩnh mạch rìa tai, dùng kim chích nhẹ vào tĩnh mạch để cho máu chảy, nhỏ 1 giọt lên phiến kính, đậy lamen để soi tƣơi hoặc phết kính nhuộm Giemsa.
* Lấy mẫu bệnh phẩm (gan, lách, tim, phổi…):
Mổ khám động vật gây nhiễm T. evansi, thu thập những khí quan (gan, lách, tim, phổi...) có bệnh tích đại thể rõ rệt, cắt miếng và rửa bằng PBS 2 - 3 lần, sau đó cố định bệnh phẩm trong dung dịch Formol 5%.
2.4.2. Phƣơng pháp phát hiện tiên mao trùng trong mẫu
2.4.2.1. Phương pháp xem tươi (Direct smear)
T. evansi là loại ký sinh trùng sống ở máu và trong tổ chức, trong trƣờng hợp mật độ ký sinh trùng trong máu thấp, TMT sống ở trong các vi mạch nhỏ; vì vậy, nên lấy máu để chẩn đoán ở vùng ngoại vi.
Cho 1 giọt máu tƣơi lên phiến kính, dùng góc la men khuấy đều rồi đậy lamen lên dàn máu thành một lớp mỏng; sau đó soi dƣới kính hiển vi (10 x 20 hoặc 10 x 40) để phát hiện T. evansi.
2.4.2.2. Phương pháp nhuộm Giemsa tiêu bản máu khô (Romanovsky)
Đặt một giọt máu cách 1 đầu phiến kính 2cm, dùng la men ria máu thành một lớp mỏng. Để khô, cố định bằng cồn Methanol trong 2 phút. Nhuộm Giemsa trong 25 phút (1 giọt Giemsa gốc + 1ml dung dịch PBS pH = 7,2). Rửa tiêu bản dƣới vòi nƣớc chảy nhẹ, soi dƣới kính hiển vi (độ phóng đại 10 x 100 hoặc 10 x 90) quan sát tìm T. evansi.
2.4.2.3. Phương pháp tiêm truyền động vật thí nghiệm
Lấy mẫu máu trâu bò nghi mắc bệnh tiên mao trùng, tiêm vào phúc mạc chuột thí nghiệm với liều 1ml/chuột. Theo dõi biểu hiện của chuột thí nghiệm sau tiêm truyền. Khi chuột phát bệnh, kiểm tra máu tìm tiên mao trùng.
Đây là phƣơng pháp phổ biến, hiệu quả, chính xác và thƣờng đƣợc ứng dụng nhiều để chẩn đoán bệnh tiên mao trùng ở Việt Nam. Phƣơng pháp này có ƣu điểm là chính xác, do trực tiếp phát hiện thấy tiên mao trùng sau khi nhân chúng lên trong động vật thí nghiệm mẫn cảm (Lê Ngọc Mỹ, 1994 [21]; Đoàn Văn Phúc, 1994 [24]). (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
2.4.2.4. Phương pháp ngưng kết trên phiến kính (SAT: Slice Agglutination Test)
Khi tiên mao trùng ký sinh, cơ thể vật chủ sinh ra kháng thể đặc hiệu chống lại tiên mao trùng. Phƣơng pháp sau cho phép phát hiện kháng thể tiên mao trùng trong máu vật chủ:
Hoà 1 giọt huyết thanh của gia súc nghi mắc bệnh vào 1 giọt nƣớc muối sinh lý trên phiến kính, sau đó cho 1 giọt máu chuột bạch có nhiều tiên mao trùng vào, trộn đều, đậy la men và soi dƣới kính hiển vi (độ phóng đại 10 x 20 hoặc 10 x 40). Nếu thấy ngƣng kết hình hoa cúc là (+) và ngƣợc lại là (-).
2.4.3. Phƣơng pháp nghiên cứu dịch tễ học
- Phƣơng pháp dịch tễ học phân tích. - Phƣơng pháp dịch tễ học mô tả.
2.4.3.1. Tỷ lệ trâu, bò nhiễm T. evansi theo tuổi
- Quy định về tuổi trâu, bò:Tuổi trâu, bò nghiên cứu đƣợc phân ra theo 4 lứa tuổi: + ≤ 2 năm tuổi
+ > 2 - 5 năm tuổi + > 5 - 8 năm tuổi + > 8 năm tuổi
2.4.3.2. Tỷ lệ trâu, bò nhiễm T. evansi theo mùa vụ
Mùa vụ trong năm đƣợc theo dõi gồm:
- Vụ Hè - Thu : Từ tháng 5 – tháng 10
- Vụ Đông - Xuân : Từ tháng 11 – tháng 4 năm sau
2.4.4. Phƣơng pháp nghiên cứu đặc điểm bệnh lý, lâm sàng bệnh do T. evansi
2.4.4.1. Gây nhiễm T. evansi phân lập từ trâu, bò bị bệnh ở các địa phương cho động vật thí nghiệm (chuột bạch, thỏ)
* Gây nhiễm T. evansi cho chuột bạch:
Chọn 80 chuột bạch khỏe mạnh (40 cái, 40 đực) có khối lƣợng 18 - 20g/con để gây nhiễm tiên mao trùng với liều 103 và106 T. evansi/chuột. Tiêm dƣới da chuột để gây nhiễm.
Hàng ngày lấy máu chuột gây nhiễm xét nghiệm để xác định thời gian T. evansi xuất hiện trong máu, đồng thời theo dõi biểu hiện lâm sàng và xác định thời gian bắt đầu có biểu hiện lâm sàng.
* Gây nhiễm T. evansi cho thỏ:
Thỏ gây nhiễm gồm 12 con khỏe mạnh có khối lƣợng 1,5 - 2 kg/con từ trại có điều kiện chăn nuôi tốt, thỏ không bị nhiễm các ký sinh trùng khác. Tiêm truyền
T. evansi vào phúc mạc hoặc tĩnh mạch của thỏ với liều 106 T. evansi/thỏ. Phƣơng pháp theo dõi tƣơng tự đối với chuột.
2.4.4.2. Phương pháp xác định số lượng tiên mao trùng trong máu động vật gây nhiễm
Sau khi gây nhiễm T. evansi cho động vật gây nhiễm, hàng ngày lấy máu để xác định số lƣợng tiên mao trùng/1mm3
máu bằng phƣơng pháp đếm trực tiếp dƣới kính hiển vi sử dụng buồng đếm Neubauer.
2.4.4.3. Phương pháp xác định thời gian T. evansi bắt đầu xuất hiện trong máu động vật gây nhiễm
- Đối với chuột bạch: sau khi gây nhiễm T. evansi cho 40 chuột bạch, hàng ngày lấy máu của cả 40 chuột bạch gây nhiễm; xét nghiệm bằng phƣơng pháp xem tƣơi để phát hiện T. evansi. Khi nào có mẫu máu thấy T. evansi xuất hiện, xác định đó là thời gian T. evansi xuất hiện sớm nhất trong máu chuột bạch sau gây nhiễm. Tiếp tục xét nghiệm cho đến khi thấy T. evansi xuất hiện trong máu cả 40 chuột bạch gây nhiễm để xác định thời gian T. evansi xuất hiện muộn nhất trong máu chuột bạch sau gây nhiễm.
- Đối với thỏ: làm thí nghiệm và theo dõi tƣơng tự nhƣ đối với chuột bạch để xác định thời gian T. evansi xuất hiện trong máu thỏ sớm nhất và muộn nhất.
2.4.4.4. Phương pháp xác định tần suất xuất hiện của T. evansi trong máu thỏ gây nhiễm
Sau khi xác định đƣợc thời gian T. evansi xuất hiện trong máu thỏ; tiếp tục theo dõi và làm xét nghiệm để xác định tần xuất xuất hiện của T. evansi. Cách 2 ngày lấy máu thỏ gây nhiễm 1 lần, sử dụng phƣơng pháp xem tƣơi để xác định T. evansi trong máu. Làm thí nghiệm nhƣ vậy liên tục trong 1 tháng (nếu thỏ không chết) để xác định chỉ tiêu này.
2.4.4.5. Phương pháp theo dõi triệu chứng lâm sàng
Phƣơng pháp theo dõi triệu chứng lâm sàng: hàng ngày quan sát những biểu hiện của động vật gây nhiễm (chuột bạch, thỏ): thể trạng, mắt, phân, ăn uống, vận động... (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
2.4.4.6. Phương pháp xác định thời gian chuột bạch và thỏ chết sau gây nhiễm
Theo dõi số chuột và thỏ đƣợc gây nhiễm T. evansi, khi nào có chuột (thỏ) đầu tiên chết, xác định đó là thời gian chết sớm nhất của chuột (thỏ) sau gây nhiễm. Tiếp tục theo dõi cho đến khi tất cả chuột (thỏ) chết, xác định đó là thời gian chết muộn nhất của chuột (thỏ) sau gây nhiễm.
2.4.4.7. Phương pháp mổ khám bệnh tích
Mổ khám những động vật gây nhiễm chết và có triệu chứng lâm sàng sau khi gây nhiễm, quan sát bằng mắt thƣờng và kính lúp các khí quan trong cơ thể, chụp ảnh những vùng có bệnh tích điển hình.
2.4.5. Phƣơng pháp nghiên cứu phác đồ điều trị bệnh T. evansi có hiệu quả cao
- Chọn 3 phác đồ điều trị bệnh tiên mao trùng.
- Để xác định hiệu lực của phác đồ điều trị, chúng tôi bố trí các thử nghiệm trên diện hẹp, trên diện rộng. Sau đó lựa chọn 01 phác đồ tốt nhất để điều trị bệnh tiên mao trùng cho trâu bò ở các địa phƣơng.
+ Thử nghiệm trên diện hẹp:
Sử dụng 3 loại thuốc điều trị bệnh tiên mao trùng cho trâu, bò: Naganin (0,02mg/kgTT), Trypamidium (1mg/kgTT) và Azidin (4mg/kgTT).
Bố trí thử nghiệm mỗi phác đồ 5 trâu và 5 bò bị bệnh tiên mao trùng. Sau 1, 3, 5, 10, 15 ngày dùng thuốc lấy máu trâu, bò làm tiêu bản phết kính nhuộm Giemsa kiểm tra tiên mao trùng. Nếu tiêu bản không còn T. evansi là thuốc có hiệu lực, ngƣợc lại nếu còn T. evansi thì chứng tỏ thuốc không có hiệu lực.
+ Thử nghiệm thuốc trên diện rộng:
Lặp lại việc thử nghiệm trên số lƣợng trâu, bò nhiều hơn (15 – 20 con/ phác đồ). Theo dõi kết quả sau dùng thuốc.
+ Sử dụng phác đồ điều trị tốt nhất để điều trị cho những trâu, bò bị bệnh tiên mao trùng ở các địa phương.
2.5. PHƢƠNG PHÁP XỬ LÝ SỐ LIỆU
Số liệu thu thập đƣợc xử lý bằng phƣơng pháp thống kê sinh học (Nguyễn Văn Thiện, 2008 [30]), trên phần mềm Excel 2003 và phần mềm Minitab - 14.0.
Chƣơng 3
KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.1. NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM DỊCH TỄ BỆNH T. EVANSI Ở TRÂU, BÒ
TẠI THÁI NGUYÊN VÀ LẠNG SƠN 3.1.1. Tình hình nhiễm T. evansi ở trâu
3.1.1.1. Tỷ lệ nhiễm T. evansi ở trâu tại các địa phương
Tỷ lệ nhiễm tiên mao trùng là một chỉ tiêu quan trọng trong công tác nghiên cứu về lĩnh vực ký sinh trùng đƣờng máu ở gia súc. Chỉ tiêu này biểu thị sự lƣu hành nhiều hay ít của mầm bệnh tiên mao trùng tại các địa phƣơng nghiên cứu.
Chúng tôi đã điều tra 1643 trâu tại một số huyện thuộc tỉnh Thái Nguyên và Lạng Sơn. Kết quả đƣợc thể hiện ở bảng 3.1.
Bảng 3.1. Tỷ lệ nhiễm T. evansi ở trâu tại Thái Nguyên và Lạng Sơn
Địa phƣơng (Tỉnh, huyện) Số trâu kiểm tra (con) Số trâu nhiễm (con) Tỷ lệ nhiễm (%) Số trâu có triệu chứng lâm sàng (con) Tỷ lệ có triệu chứng (%) * Tỉnh Thái Nguyên 915 111 12,13 101 11,04 Huyện Đồng Hỷ 480 64 13,33 49 10,21 Huyện Phú Bình 218 15 6,88 23 10,55 Huyện Võ Nhai 217 32 14,75 29 13,36 * Tỉnh Lạng Sơn 728 102 14,01 91 12,50 TP Lạng Sơn 219 26 11,87 23 10,50 Huyện Chi Lăng 264 41 15,53 37 14,02 Huyện Lộc Bình 245 35 14,29 31 12,65 Tính chung 1643 213 12,96 192 11,69 So sánh giữa 2 tỉnh χ 2 = 1,270 P = 0,260 χ2 = 0,839 P = 0,360
Kết quả bảng 3.1 cho thấy, tỷ lệ trâu nhiễm tiên mao trùng và tỷ lệ có triệu chứng lâm sàng giữa 2 tỉnh khác nhau không rõ rệt.
- Về tỷ lệ nhiễm tiên mao trùng:
Bằng phƣơng pháp chẩn đoán tiên mao trùng trong phòng thí nghiệm để xác định tỷ lệ nhiễm tiên mao trùng ở trâu tại các địa phƣơng nghiên cứu, kết quả cho thấy, trong tổng số 1643 trâu kiểm tra, có 213 trâu nhiễm tiên mao trùng T. evansi, tỷ lệ nhiễm là 12,96%, biến động theo các huyện từ 6,88% - 15,53%. Trong đó, nơi có tỷ lệ nhiễm tiên mao trùng cao nhất là huyện Chi Lăng - tỉnh Lạng Sơn (15,53%), sau đến huyện Võ Nhai - tỉnh Thái Nguyên (14,75%), huyện Lộc Bình - tỉnh Lạng Sơn (14,29%), huyện Đồng Hỷ - tỉnh Thái Nguyên (13,33%), TP. Lạng Sơn - tỉnh Lạng Sơn (11,87%), và nơi có tỷ lệ nhiễm thấp nhất là huyện Phú Bình - tỉnh Thái Nguyên (6,88%). Nhƣ vậy, tỷ lệ nhiễm tiên mao trùng ở trâu tại 6 huyện thuộc 2 tỉnh Thái Nguyên và Lạng Sơn có sự khác nhau.
- Về triệu chứng lâm sàng:
Bằng phƣơng pháp điều tra kết hợp quan sát triệu chứng lâm sàng của trâu tại các địa phƣơng chúng tôi thấy trong 1643 trâu điều tra tại Thái Nguyên và Lạng Sơn có 192 trâu có triệu chứng lâm sàng của bệnh tiên mao trùng, chiếm tỷ lệ 11,69% (biến động từ 10,21% - 14,02%). Trong đó, tỷ lệ trâu có triệu chứng lâm sàng cao nhất là ở huyện Chi Lăng - tỉnh Lạng Sơn (14,02%), sau đó đến huyện Võ Nhai - tỉnh Thái Nguyên (13,36%), Lộc Bình - tỉnh Lạng Sơn (12,65%) và thấp nhất là ở huyện Đồng Hỷ - tỉnh Thái Nguyên (10,21%). Triệu chứng lâm sàng chủ yếu thấy ở trâu bị bệnh là gầy yếu, ủ rũ, lƣời vận động, thiếu máu, suy nhƣợc, các hạch bạch huyết sƣng, phù thũng, nổi mề đay, rụng lông và sốt không liên tục.
Sở dĩ có sự chênh lệch này là do ảnh hƣởng của nhiều yếu tố nhƣ điều kiện tự nhiên, kinh tế của các huyện, thành là khác nhau. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});