3.3.1.1 Khảo sát khoảng tuyến tính
Từ dung dịch chuẩn hỗn hợp trung gian các SAs có nồng độ 1000 ng/ml, chuẩn bị các dung dịch chuẩn SAs hỗn hợp có nồng độ : 0,5 ; 1 ; 2 ; 5 ; 10 ; 20 ; 50 ; 100 ; 200 ; 500 ng/ml trong metanol. Mỗi dung dịch đều chứa 50ppb IS. Tiến hành chạy máy với các điều kiện tối ƣu ở trên. Vẽ đồ thị mối tƣơng quan tuyến tính giữa diện tích pic và nồng độ chuẩn, thu đƣợc các kết quả sau :
Hình 3.16: Mối tƣơng quan giữa diện tích pic và nồng độ STZ trong khoảng 0,5-500 ng/ml
Hình 3.17: Mối tƣơng quan giữa diện tích pic và nồng độ SDM trong khoảng 0,5- 500ng/ml
63
Trong khoảng nồng độ từ 0,5÷500 ng/ml cả 10 SAs đều cho hệ số tƣơng quan R > 0,9990, khoảng tuyến của các SAs là rất rộng. Tuy nhiên, giới hạn tối đa cho phép tất cả SAs trong mẫu là 100 ng/ml. Do đó, chúng tôi tiến hành lập đƣờng chuẩn các SAs trong khoảng từ 2 – 50 ng/ml.
3.3.1.2 Đường chuẩn các SAs có nội chuẩn (sử dụng để phân tích mẫu thực)
Phƣơng pháp sử dụng SDM-d4 làm nội chuẩn làm tăng độ chính xác của phƣơng pháp. Lập đƣờng chuẩn có sử dụng nội chuẩn bằng cách : lập mối tƣơng quan tuyến tính giữa tỉ lệ diện tích pic SAs/diện tích pic IS vào nồng độ mỗi SAs.
Từ dung dịch chuẩn hỗn hợp trung gian các SAs có nồng độ 100ppb chuẩn bị các dung dịch chuẩn trong các vial 1,8ml nhƣ sau :
Bảng 3.9 : Cách pha các dung dịch chuẩn để lập đƣờng chuẩn có chứa IS
Nồng độ mỗi SAs (ng/ml) 2 5 10 20 50
Nồng độ IS (ng/ml) 20 20 20 20 20
Thể tích chuẩn hỗn hợp 100ppb (µL) 20 50 100 200 500
Thể tích IS 1000ppb (µL) 50 50 50 50 50
Thể tích metanol (µL) 930 900 850 750 450
Tiến hành chạy máy và lập mối quan hệ giữa tỉ lệ diện tích pic SAs/diện tích pic IS với nồng độ các SAs, thu đƣợc kết quả sau:
Bảng 3.10: Đƣờng chuẩn của các SAs (có IS)
Tên chất phân tích Phƣơng trình hồi quy Hệ số tƣơng quan R2
SIM y = 0,0271x + 0,00987 0,9994
SD y = 0,0123x – 0,0127 0,9993
64 SP y = 0,0155x + 0,00133 0,9999 SM y = 0,0149x + 0,00651 0,9997 SMM y = 0,0132x – 0,00381 1,0000 SCP y = 0,0115x – 0,0077 0,9993 SMX y = 0,0127x + 0,00135 0,9998 SSA y = 0,0148x + 0,00503 0,9991 SDM y = 0,0331x + 0,00364 1,0000
Nhận xét: tỉ lệ diện tích pic SAs/diện tích pic IS tuyến tính với nồng độ SAs trong khoảng 2 – 50 ng/ml với hệ số tƣơng quan R2
> 0,999
Hình 3.18: Đƣờng chuẩn SMM (R2
65
Hình 3.19: Đƣờng chuẩn SSA (R2
= 0,9991)
Nhận xét : Tỉ lệ diện tích SAs/IS tuyến tính với nồng độ SAs trong khoảng 2 – 50 ng/ml với hệ số tƣơng quan R2 > 0,999
3.3.1.3 Đường chuẩn các SAs không có nội chuẩn (sử dụng để đánh giá hiệu suất thu hồi)
Lập mối tƣơng quan tuyến tính giữa diện tích píc và nồng độ các SAs, thu đƣợc kết quả sau:
Bảng 3.11: Đƣờng chuẩn các SAs (không có IS)
Tên chất phân tích Phƣơng trình hồi quy Hệ số tƣơng quan R2
SIM y = 21900x + 5180 0,9999 SD y = 6930x + 769 0,9998 STZ y = 10900x - 1970 0,9996 SP y = 12500x - 6890 0,9998 SM y = 12100x - 1530 0,9998 SMM y = 10700x - 3760 0,9990 SCP y = 9260x - 8660 0,9997 SMX y = 10200x + 88,8 0,9990 SSA y = 12000x - 2040 0,9998 SDM y = 26700x - 9920 0,9997
Nhận xét : Diện tích SAs tỉ lệ tuyến tính với nồng độ trong khoảng 2 – 50 ng/ml với hệ số tƣơng quan R2 > 0,999
66
Hình 3.20: Đƣờng chuẩn SIM (R2 = 0,9999)
Hình 3.21: Đƣờng chuẩn SSA (R2 = 0,9998)
Nhận xét: Diện tích và nồng độ các SAs tuyến tính trong khoảng 2-50 ng/ml với hệ số tƣơng quan R2
> 0,999