b. T cố độ ấ gi y
3.4 Kho sá th dung môi ra g ii (pha ửả động)
Trong s c kí h p th pha ngắ ấ ụ ược, pha t nh l các ch t có b m t khôngĩ à ấ ề ặ
phân c c nên pha ự động ph i l h dung môi phân c c, ch t tan n o có ả à ệ ự ấ à độ
phân c c kém h n s b l u gi lâu h n trong c t, vì v y ch t n o cóự ơ ẽ ị ư ữ ơ ở ộ ậ ấ à
phân c c kém h n s c r a gi i ra sau. Ng c l i trong 1 dãy
độ ự ơ ẽ đượ ử ả ượ ạ
ng ng v i h pha ng c thì th i gian l u s t ng theo chi u d i c a
đồ đẳ ớ ệ ượ ờ ư ẽ ă ề à ủ
m ch các bon, c a nhóm th v s nhóm th . Vì v y ạ ủ ế à ố ế ậ đố ớ ỗi v i h n h pợ
nghiên c u thì l n lu t t mono cho ứ ầ ợ ừ đến penta được tách .
Theo các tác gi Jitka Frébortová. [21], S. Dupeyron[2]. theo tínhả
ch t c a h pha ngấ ủ ệ ược v tính ch t c a ch t nghiên c u, chúng tôi ch nà ấ ủ ấ ứ ọ
ba h dung môi sau ệ để ế ti n h nh kh o sát nh m l a ch n 1 h dung môià ả ằ ự ọ ệ
phù h p nh t, ba h ó l :ợ ấ ệ đ à
1. Metanol:Acetonitril.
2. Acetonitril : H3PO4 0.007M . 3. Metanol: H2O: Acetonitril .
Sau khi kh o sát ả để tìm m t th nh ph n thích h p nh t(t i th nh ph nộ à ầ ợ ấ ạ à ầ
ó kh n ng tách các ch t l t t nh t) cho t ng h pha ng trên chúng tôi
đ ả ă ấ à ố ấ ừ ệ độ nh n th y các t l ậ ấ ở ỉ ệ 4. Metanol:Acetonitril... (85 :15 v/v) 5. Acetonitril : H3PO4 0.007M (58 :42 v/v) 6. Metanol: H2O: Acetonitril (49 :48 :3 v/v) Kh n ng tách c a m i h l t t nh t.ả ă ủ ỗ ệ à ố ấ
B ng 3.4ả ảnh hưởng c a h dung môi ủ ệ đến th i gian l uờ ư
C t Hypersil ODS 5ộ µm 250 x 4.6 µm.7 10 11 13 Stt H pha ệ động 1 2 3 4 5 1 Metanol:Acetoniltril (85:15 v/v) 7(P) 8(p) 9.5(p) 11(p) 13,5(phút) 2 CH3OH : H3PO4 0.007 M (57 : 43 v/v) 10 13 15 20 26
3 Metanol : H2O :Acetonitril (49:48:3 v/v) 5 6 9 11.5 18,5 1: 2clophenol 3: 2.4.6 triclophenol 2 : 2.4clophenol 4: 2.3.4.6 tetraclophenol 5 : penta.clophenol
Th i gian l u (tờ ư R) c a ch t phân tích có 1 ý ngh a quan tr ng trongủ ấ ĩ ọ
k thu t s c kí. Nó cho ta bi t các ch t phân tích ỹ ậ ắ ế ấ đượ ửc r a gi i nh thả ư ế
n o trong các i u ki n ã ch n v à đ ề ệ đ ọ à được dùng để xác nh tính ch tđị ấ
phân tích.
H s dung tích k’ệ ố i được xác nh b ng công th c.đị ằ ứ
k’i = (tR -tO)/tO
Qua th c nghi m ta xác nh ự ệ đị được tR. V i th i gian không l u giớ ờ ư ữ
m u (tẫ O) có th xác nh ể đị được b ng vi c o kho ng th i gian xu t hi nằ ệ đ ả ờ ấ ệ
pic c a dung môi (pha ủ động) được ch n ọ để ắ s c kí. V i h dung môiớ ệ
CH3OH/H2O/CH3CN. (49:48:3v/v) thì tO = 1,5 phút H Axetonitril : :ệ
H3PO4 0.007M to=4phút H Metanol: Axetonitril (85:15v /v) tệ 0=3.5phút. Thông qua tR v tà O,chúng tôi xác nh đị được h s k’ệ ố i c a m i lo i hủ ỗ ạ ệ
dung môi. M i quan h gi a h dung môi v h s k’ố ệ ữ ệ à ệ ố được bi u di n ể ễ ở
hình 3.5. Hình 3.4 M i quan h c a k’v i b n ch t pha ố ệ ủ ớ ả ấ động hypersil-ODS , c h t 5ỡ ạ µm 0 2 4 6 8 10 12 1 2 3 1
H s k’ c a m i clophenol trong m i h dung môi khác nhau c ngệ ố ủ ỗ ỗ ệ à
nhi u thì s phân gi i (s tách) gi a chúng c ng t t. Nhìn v o hình 3.5ề ự ả ự ữ à ố à
chúng ta th y h 3. (Metanol :Hấ ệ 2O:Axetonitril). cho ta k t qu tách t t nh t.ế ả ố ấ
gi i thích k t qu b ng 3.5 chúng tôi s d ng nh ngh a
Để ả ế ả ả ử ụ đị ĩ độ
phân c c c a Rohscheneider trong t i li u do tác gi Ph m Lu n vi t[3] ,ự ủ à ệ ả ạ ậ ế
các dung môi có độ phân c c l : metanol = 5,11, axetonitril = 5,8 Hự à 2O = 10,2 nên ta có độ phân c c c a h 3 l : 7.6 có ngh a l h pha ự ủ ệ à ĩ à ệ động 3 l CHà 3OH / H2O / CH3CN có độ phân c c n m gi a ự ằ ữ độ phân c c c a baự ủ
dung môi, v t o ra l c r a gi i tích h p v khác nhau à ạ ự ử ả ợ à đố ới v i 5 clophenol. Vì lí do ó m h dung môi th 3 (Metanol: Hđ à ệ ứ 2O: Axetonitril (49:48:3v /v).tách t t h n 2 h dung môi (1) v (2).ố ơ ệ à
M t khác, chúng ta bi t r ng khi thay ặ ế ằ đổi th nh ph n pha à ầ động d nẫ
n l m thay i ch n l c c a 1 h pha s c kí. N u ch n l c c a
đế à đổ độ ọ ọ ủ ệ ắ ế độ ọ ọ ủ
pha động cao s l m cho các ch t tách ẽ à ấ được ra kh i nhau. ỏ Độ ch n l cọ ọ
n y ph thu c v o 3 y u t chính ó l .à ụ ộ à ế ố đ à
- B n ch t v ả ấ à đặc tr ng c a pha t nh.ư ủ ĩ
- B n ch t c a pha ả ấ ủ động v th nh ph n c a nó.à à ầ ủ
- B n ch t v c u trúc c a phân t ch t m u.ả ấ à ấ ủ ử ấ ẫ
T t c các y u t n y quy t nh ấ ả ế ố à ế đị đến h s dung tích k’ệ ố i c a ch tủ ấ
tan, t c l s l u gi . Vì th ch khi ch n ứ à ự ư ữ ế ỉ ọ được th nh ph n phù h p thìà ầ ợ
nó m i có hi u qu tách t t.ớ ệ ả ố
- Hình 3.5 cho ta th y nh hấ ả ưởng c a h dung môi phaủ ệ
ng n k t qu tách
CH3OH:CH3CN CH3OH :H3PO4 CH3OH: H2O:CH3CN
Hình 3.5 nh hả ưởng c a h dung môi pha ủ ệ động
Qua k t qu kh o sát trên ta th y r ng hai h pha ế ả ả ở ấ ằ ệ động 1 v 3à
u cho m t k t qu tách t t. Nh ng v i h 3 cho ta hi u su t tách cao
đề ộ ế ả ố ư ớ ệ ệ ấ
h n , giá th nh r h n, tuy nhiên th i gian l u có d i h n m t chút so v iơ à ẻ ơ ờ ư à ơ ộ ớ
h 1. Trong các thí nghi m ti p theo chúng tôi ch n h pha ệ ệ ế ọ ệ động 3 để
kh o sát. ả