Hình 3.13. Phổ 1H-NMR của laminaran từ rong S.mcclurei
Dựa vào lý thuyết và các dữ liệu phổ của các tài liệu tham khảo [14], [15], ta có các vùng dịch chuyển hóa học nhƣ sau:
103,0 − 104,0 ppm là C1 (1→3) và C1 (1→6); 85 – 87 ppm là C3 (1→3); 75 − 76 là C5 (1→6); 70 ppm là C6 (1→6) H1 H6 H6 H3 H5 H2 H4
69,5 ppm là C4 (1→3); 62 ppm là C6 (1→3)
Từ các tín hiệu trên phổ HSQC (hình 3.11) ta xác định đƣợc vị trí của C1, C3, C4 và C6. Từ lý thuyết ta tìm đƣợc H1, H3, H4, H61 và H62 trên phổ HSQC.
Còn lại H2 và H5, trên phổ HSQC cho ta thấy H2 và H5 trùng vào một cụm phổ.
Trên phổ COSY (hình 3.12), H1 chỉ có một tƣơng tác đến H2, H6 chỉ có một tƣơng tác đến H5. Vậy H2 trùng H5, điều này đúng với kết luận trên phổ HSQC.
Phổ 1
H-NMR của các mẫu laminaran tƣơng đối đơn giản (Hình 3.13) bao gồm 4 tín hiệu trung bình và một vài tín hiệu với cƣờng độ rất nhỏ. Dựa vào các dữ liệu phổ của các tài liệu tham khảo và các dữ liệu trên phổ HSQC, COSY, tôi gán những tín hiệu trên phổ 1
H-NMR nhƣ sau: các tín hiệu ở vùng dịch chuyển hóa học 4,18 5,22 ppm (H1); 3,98 4,02 ppm (H2); 4,2 4,23 ppm (H3); 3,96 4,0 ppm (H4); 3,92 3,96 ppm (H5); 4,14 4,2 và 4,32 4,38 ppm (H6) đƣợc đặc trƣng cho các liên kết β-1→3 của các gốc D-glucan. Trên phổ không có các tín hiệu chứng tỏ sự có mặt của các liên kết β-1→6 của các gốc D-glucan. Nhƣ vậy, trên phổ cộng hƣởng từ hạt nhân 1H-NMR cho phép ta đƣa ra một số kết luận sau: tất cả các laminaran tách chiết từ S.mcclurei đều có thành phần chính là glucose, trong
cấu trúc của chúng chỉ có liên kết β-1→3
Nhƣ vậy, từ phổ NMR thành phần đƣờng đơn, cho ta khẳng định sự có mặt của laminaran trong các sản phẩm đã tách chiết.
3.2 ĐỀ XUẤT QUY TRÌNH SẢN XUẤT LAMINARAN TỪ S.MCCLUREI 3.2.1 Quy trình sản xuất