5. Thời gian
2.2.3. Các hoá chất dùng trong xét nghiệm
* Môi trường và hoá chất bảo quản bệnh phẩm
- Môi trƣờng Glycerol Pha chế PBS:
NaCl 8g
KCl 0,2 g
Na2HPO4 1,15 g
KH2PO4 0,2 g
Nƣớc cất vđ 1000 ml
Hấp vô trùng 121oC/ 15 phút, bổ xung kháng sinh có trộn với glycerol
theo tỷ lệ 1:1.
* Chuẩn bị các dung dịch và xử lý huyết thanh
- Dung dịch PBS 0,01M, pH 7,2
Na2HPO4 1,096 g
NaH2PO4.H2O 0,316 g
Na Cl 8,5 g
Nƣớc cất 1000 ml
Chỉnh pH = 7,2 bằng NaOH 1N hoặc HCl 1N, hấp vô trùng, bảo quản
4oC không quá 3 tuần.
- Dung dịch nước muối sinh lý 0,85 %:
Pha 8,5 g NaCl trong 1000 ml nƣớc cất. Hấp vô trùng, bảo quản 4oC
không quá 3 tuần.
- Dung dịch hồng cầu gà 1 %:
+ Máu gà trống khoẻ mạnh đã trƣởng thành, không có kháng thể kháng virus cúm và Newcastle.
+ Dùng bơm tiêm 5 - 10ml hút sẵn 1ml (10 % thể tích) dung dịch chống đông (Natri Citrat 4 %) rồi lấy máu gà vào ống nghiệm.
+ Ly tâm 1000 - 1500 vòng/phút, trong 15 phút, gạn bỏ huyết tƣơng,
cho thêm nƣớc sinh lý (NaCl 0,85 %) vào hồng cầu, lắc đều. Ly tâm nhƣ trên
3 - 4 lần để rửa hồng cầu, sau lần ly tâm cuối gạn bỏ nƣớc ở trên.
+ Pha hồng cầu với nƣớc muối sinh lý thành huyễn dịch 1 %: pha 1 ml hồng cầu với 99 ml nƣớc muối sinh lý.
+ Bảo quản huyễn dịch hồng cầu ở nhiệt độ 4 - 8o
pha có thể dùng trong 4 - 5 ngày (nếu dung dịch hồng cầu bị dung huyết thì loại bỏ không dùng).
* Kháng huyết thanh chuẩn:
- Kháng huyết thanh chuẩn của các loài nhƣ thỏ, dê, cừu... cần đƣợc xử lý bằng RDE (Receptor Destroying Enzyme) trƣớc khi xét nghiệm.
- Kháng huyết thanh chế trên gà không cần xử lý bằng RDE. Tuy nhiên, nếu phản ứng cho kết quả không rõ ràng thì kháng huyết thanh có thể xử lý RDE để khẳng định kết quả là dƣơng tính.
- Hoàn nguyên kháng huyết thanh và bảo quản ở nhiệt độ - 20oC, xử lý
của yếu tố ức chế đặc hiệu kháng huyết thanh vô hoạt.
- Trộn 3 phần RDE với 1 phần kháng huyết thanh, ủ ở nhiệt độ 37oC
trong nồi đun cách thuỷ qua đêm.
- Ủ tiếp ở nồi đun cách thuỷ nhiệt độ56oC/30 phút để vô hoạt RDE còn dƣ.
- Kháng huyết thanh đã xử lý để nguội, cho thêm 6 phần nƣớc sinh lý (0,3ml HT + 1,8ml SL), độ pha loãng cuối cùng của kháng huyết thanh là 1/10.