1. 2.1 Protease và cơ chế phản ứng thủy phân:
2.2.3Bố trí thí nghiệm xác định các thông số thích hợp cho quá trình thủy
quá trình thủy phân.
Hình 2.4: Bố trí thí nghiệm xácđinh tỷ lệ enzyme protamex thích hợp cho quá trình thủy phân.
* Thuyết minh quy trình:
Nguyên liệu đã xay nhỏ đông lạnh
Rã đông
Thủy phân bằng enzyme protamex,
nước/NL= 30%, nhiệt độ 500C, pH tự nhiên, thời gian 3 giờ, tỷ lệ enzyme protamex:
Mẫu 1
0,1 %
Ly tâm ( thu dịch thủy phân)
Bất hoạt enzyme Lọc tách xương Mẫu 2 0,3% Mẫu 3 0,5% Mẫu 4 0,7% Mẫu 5 0,9%
Xác định: Hiệu suất thu hồi Nito, Nito axid amin, Nito amoniac.
Xác định tỷ lệ enzyme protamex thích hợp.
Cặn ly tâm
Phần bã lọc (xương, vây....) Thủy phân bằng enzyme Flavouyme, tỷ lệ
enzyme/NL: 0.3%, nhiệt độ 500C, pH tự
nhiên, thời gian 3 giờ.
Mục đích: Bố trí thí nghiệm nhằm xác định tỷ lệ enzyme protamex thích hợp cho quá trình thủy phân, nhằm nâng cao chất lượng dịch đạm thủy phân protein
Cách tiến hành:
- Thủy phân giai đoạn đầu bằng enzye Protamex: Ta tiến hành cân chính xác 100 (g) nguyên liệu và cho vào cốc 250(ml), các cốc được đánh số thứ tự từ (1) đến (5). Tiến hành thủy phân ở nhiệt độ 500C tỷ lệ nước /NL là 30%, pH tự nhiên thời gian thủy phân là 3 giờ, tỷ lệ enzyme protamex/NL thì ta lần lược bố trí với các tỷ lệ là 0,1%, 0,3%, 0,5, 0,7%và 0,9%, tương ứng vào các cốc được đánh số thứ tự từ (1)đến (5).
- Thủy phân giai đoạn sau bằng enzyme Flavourzymx: sau khi lần thủy phân giai đoạn đầu xong ta tiến hành bất hoạt enzyme Protamexở nhiệt độ 900C trong thời gian 15 phút. Sau khi đã bất hoạt enzyme protamex xong và chờ nhiệt độ của hỗn hợp đạt 500C ta cho 0,3 (gam) enzyme Flavourzyme và tiến hành thủy phân ở nhiệt độ 500C thời gian 3 giờ, pH tự nhiên.
- Bất hoạt enzyme: sau khi thủy phân giai đoạn sau xong ta tiến hành bất hoạt enzyme ở nhiệt độ 900C trong thời gian 15 phút.
- Lọc: Dịch thủy phân được lọc qua ray lọc, mục đích tách riêng phần bã lọc (xương, vãy…) ra khỏi dich lọc.
- Ly tâm: Dùng máy ly tâm để ly tâm dịch lọc, ta tiến hành ly tâm ở 5000(V/P) trong thời gian 30 phút, ở nhiệt độ thường. Sau khi ly tâm tách riêng dịch thủy phân protein và phần cặn ly tâm.
- Xác định các thông số: Dịch đạm thủy phân được đem đi phân tích xác định hiệu suất thu hồi nito, nitơ acid amin, Nito ammoniac.
* Từ đó chọn tỷ lệ enzyme protamex thích hợp cho quá trình thủy phân. 2.2.3.2 Bố trí thí nghiệm xác định nhiệt độ thủy phân thích hợp cho enzyme Protamex trong quá trình thủy phân
Hình 2.5: Bố trí thí nghiệm xác định nhiệt độ thủy phân thích hợp cho enzyme protamex trong quá trình thủy phân.
*Thuyết minh quy trình:
Nguyên liệu đã xay nhỏ, đem đông lạnh Rã đông Mẫu 3: 500C Lọc tách xương Bất hoạt enzyme Ly tâm Mẫu1: 400C Mẫu 2 450C Mẫu 4: 550C Mẫu 5: 600C (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Dịch đạm thủy phân Protein
Xác định: Hiệu suất thu hồi Nito, Nito axid amin, Nito amoniac
Cặn ly tâm
Thủy phân bằng enzyme protamex, tỷ lệ
enzyme/NL thích hợp, tỷ lệ nước/NL= 30%, pH tự nhiên, thời gian 3 giờ, nhiệt độ:
Phần bã lọc (xương, vây...) Thủy phân bằng enzyme Flavouyme, tỷ lệ
enzyme/NL: 0,3%, nhiệt độ 500C, pH tự
nhiên, thời gian 3 giờ.
Xác định nhiệt độ thủy phân thích hợp đối với enzyme protamex
Mục đích: Bố trí thí nghiệm nhằm xác định nhiệt độ thủy phân thích hợp đối với enzyme protamex cho quá trình thủy phân, nhằm nâng cao chất lượng dịch đạm thủy phân protein.
Tiến hành:
- Thủy phân giai đoạn đầu bằng enzye Protamex: Ta tiến hành cân chính xác 100 (g) nguyên liệu và cho vào cốc 250ml, các cốc được đánh số thứ tự từ (1) đến (5). Tiến hành thủy phân với các thông số: Tỷ lệ Enzyme/NL thích hợp, tỷ lệ nước/NL: 30%, pH tự nhiên, thời gian thủy phân là 3 giờ, nhiệt độ thủy phân là 400C, 450C, 500C, 550C và 600C tương ứng vào các cốc được đánh số thứ tự từ (1) đến (5).
- Thủy phân giai đoạn sau bằng enzyme Flavourzyme: sau khi lần thủy phân giai đoạn đầu xong ta tiến hành bất hoạt enzyme protamex ở nhiệt độ 900C trong thời gian 15 phút. Sau khi đã bất hoạt enzyme protamex xong ta chờ nhiệt độ hỗn hợp đạt 500C ta cho 0,3 (gam) enzyme Flavourzyme và tiến hành thủy phân ở nhiệt độ 500C, pH tự nhiên, thời gian 3 giờ.
- Bất hoạt enzyme: sau khi thủy phân giai đoạn 2 xong ta tiến hành bất hoạt enzyme ở nhiệt độ 900C trong thời gian 15 phút.
- Lọc: Dịch thủy phân được lọc qua ray lọc, mục đích tách riêng phần bã lọc(xương, vãy…) ra khỏi dich lọc.
- Ly tâm: Dùng máy ly tâm để ly tâm dịch lọc, ta tiến hành ly tâm ở 5000(V/P) trong thời gian 30 phút, ở nhiệt độ thường. Sau khi ly tâm tách riêng dịch thủy phân protein và phần cặn ly tâm.
- Xác định các thông số: Dịch đạm thủy phân protein đem đi phân tích xác định hiệu suất thu hồi nito, hàm lượng Nito acid amin, hàm lượng Nito amoniac. * Từ đó chọn nhiệt độ thủy phân thích hợp đối với enzyme Protamex
2.2.3.3 Bố trí thí nghiệm xác định nhiệt độ thủy phân thích hợp cho enzyme protamex trong quá trình thủy phân. enzyme protamex trong quá trình thủy phân.
Hình 2.6: Bố trí thí nghiệm xác định nhiệt độ thủy phân thích hợp cho enzyme protamex trong quá trình thủy phân.
Nguyên liệu đã xay nhỏ,đông lạnh Rã đông Mẫu2: 2giờ Mẫu6: 6giờ Mẫu5: 5giờ Mẫu3: 3 giờ Mẫu4: 4giờ Mẫu1: 1giờ Bất hoạt enzyme Lọc tách xương Ly tâm
Xác định hiệu suất thu hồi nito,
Nito axitamin, Nito amoniac
Cặn ly tâm
Xác định thời gian thủy phân
enzyme protamex thích hợp
Thủy phân bằng enzyme protamex, tỷ lệ
enzyme/NL thích hợp, tỷ lệ nước/NL= 30%, nhiệt độ thủy phân thích hợp, pH tự nhiên, thời gian thủy phân:
Thủy phân bằng enzyme Flavouyme, tỷ lệ
enzyme/NL: 0.3%, nhiệt độ 500C, pH tự
nhiên, thời gian 3 giờ. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Phần bã lọc (xương, vây, ...)
*Thuyết minh quy trình:
Mục đích: Bố trí thí nghiệm nhằm xác đinh thời gian thủy phân thích hợp đối với enzyme protamex cho quá trình thủy phân, nhằm nâng cao chất lượng dịch đạm thủy phân protein.
Tiến hành
- Thủy phân giai đoạn đầu bằng enzyme Protamex: Ta tiến hành cân chính xác 100 (g) nguyên liệu và cho vào cốc 250ml, các cốc được đánh số thứ tự từ (1) đến (6). Tiến hành thủy phân với các thông số: Tỷ lệ Enzyme/NL thích hợp, tỷ lệ nước/NL: 30%, nhiệt độ thủy phân thích hợp, pH tự nhiên, thời gian thủy phân: 1 giờ, 2 giờ, 3 giờ, 4 giờ, 5 gờ và 6 giờ tương ứng vào các cốcđược đánh số thứ tự từ (1) đến (6)
- Thủy phân giai đoạn sau bằng enzyme Flavourzyme: sau khi lần thủy phân giai đoạn 1 xong ta tiến hành bất hoạt enzyme protamex ở nhiệt độ 900C trong thời gian 15 phút. Sau khi đã bất hoạt enzyme protamex xong và chờ nhiệt độ hỗn hợp đạt 500C ta cho 0,3 (gam) enzyme Flavourzyme và tiến hành thủy phân ở nhiệt độ 500C, pH tự nhiên, thời gian 3 giờ.
- Bất hoạt enzyme: sau khi thủy phân giai đoạn 2 xong ta tiến hành bất hoạt enzyme ở nhiệt độ 900C trong thời gian 15 phút.
- Lọc: Dịch thủy phân được lọc qua ray lọc, mục đích tách phần bã lọc(xương, vãy…) ra khỏi dich lọc
- Ly tâm: Dùng máy ly tâm để ly tâm dịch lọc, ta tiến hành ly tâm ở 5000(V/P) trong thời gian 30 phút, ở nhiệt độ thường. Sau khi ly tâm tách riêng dịchđạm thủy phân protein và phần cặn ly tâm.
- Xác định các thông số: Dịch đạm thủy phân protein được đem đi phân tích xác định hiệu suất thu hồi nito, hàm lượng Nitơ acid amin, hàm lượng ammoniac.
* Từ đó chọn thời gian thủy phân thích hợp đối với enzyme protamex 2.2.3.4. Sơ đố bố trí thí nghiệm xác đinh tỉ lệ enzyme Flavourzyme thích hợp cho quá trình thủy phân
Hình 2.7: Sơ đố bố trí thí nghiệm xác đinh tỉ lệ enzyme Flavourzyme thích hợp cho quá trình thủy phân.
*Thuyết minh quy trình:
Nguyên liệu đã xay nhỏ,đông lạnh Rã đông Mẫu3: 0,5% Mẫu2: 0,3% Mẫu4: 0,7% Mẫu1: 0,1% Mẫu5: 0,9% Bất hoạt enzyme Lọc tách xương Ly tâm
Xác định hiệu suất thu hồi
nito, Nito axitamin, Nito anoniac
Xác định tỉ lệ enzyme Flavourzyme thích hợp.
Cặn ly tâm
Thủy phân bằng enzyme protamex, tỷ lệ
enzyme/NL thích hợp, tỷ lệ nước/NL= 30%, nhiệt độ thủy phân thích hợp, pH tự nhiên, thời gian thủy phân thích hợp.
Thủy phân bằng enzyme Flavouyme, nhiệt độ
500C, pH tự nhiên, thời gian 3 giờ. Tỷ lệ
enzye/NL :
Phần bã lọc
(xương, vây, ….)
Mục đích: Bố trí thí nghiệm nhằm xác định tỉ lệ enzyme Flavourzyme thích hợp cho quá trình thủy phân để nâng cao chất lượng dịch đạm thủy phân protein
Tiến hành:
- Thủy phân giai đoạn đầu bằng enzyme Protamex: Ta tiến hành cân chính xác 100 (g) nguyên liệu và cho vào cốc 250ml, các cốc được đánh số thứ tự từ (1) đến (5). Tiến hành thủy phân với các thông số: Tỷ lệ Enzyme/NL thích hợp, tỷ lệ nước/NL: 30%, nhiệt độ thủy phân thích hợp, pH tự nhiên, thời gian thủy phân thích hợp. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
- Thủy phân giai đoạn sau bằng enzyme Flavourzyme: sau khi lần thủy phân giai đoạn đầu xong ta tiến hành bất hoạt enzyme protamex ở nhiệt độ 900C trong thời gian 15 phút. Sau khi đã bất hoạt enzyme protamex xong và chờ nhiệt độ hỗn hợp đạt 500C ta tiến hành thủy phân: nhiệt độ 500C, thời gian 3 giờ, pH tự nhiên, tỷ lệ enzyme/ NL: 0,1%, 0,3%, 0,5%, 0,7% 0,9%. tương ứng vào các cốc được đánh số thứ tự từ (1) đến (5)
- Bất hoạt enzyme: sau khi thủy phân giai đoạn 2 xong ta tiến hành bất hoạt enzyme ở nhiệt độ 900C trong thời gian 15 phút..
- Lọc: Dịch thủy phân được lọc qua ray lọc, mục đích tách phần bã lọc(xương, vãy…) ra khỏi dich lọc
- Ly tâm: Dùng máy ly tâm để ly tâm dịch lọc, ta tiến hành ly tâm ở 5000(V/P) trong thời gian 30 phút, ở nhiệt độ thường. Sau khi ly tâm tách riêng dịch thủy phân protein và phần cặn ly tâm.
- Xác định các thông số: Dịch đạm thủy phân protein được đem đi phân tích xác định hiệu suất thu hồi nito, hàm lượng Nitơ acid amin, hàm lượng ammoniac.
* Từ đó chọn tỷ lệ enzyme Flavourzyme thích hợp cho quá trình thủy phân 2.2.3.5. Bố trí thí nghiệm xác định nhiệt độ thủy phân thích hợp đối với enzyme Flavourzyme cho quá trình thủy phân.
Hình 2.8: Bố trí thí nghiệm xác định nhiệt độ thủy phân thích hợp đối với enzyme Flavourzyme cho quá trình thủy phân.
*Thuyết minh quy trình:
Nguyên liệu đã xay nhỏ,đông lạnh Rã đông Mẫu2: 450C Mẫu3: 500C Mẫu1: 400C Mẫu4: 550C Mẫu5: 600C Bất hoạt enzyme Lọc tách xương Ly tâm
Xác định hiệu suất thu hồi nito,
Nito axitamin, Nito amoniac.
Xác định nhiệt độ thủy phân
enzyme Flavourzyme thích hợp.
Cặn ly tâm
Thủy phân bằng enzyme protamex, tỷ lệ
enzyme/NL thích hợp, nước/NL= 1:3, nhiệt độ thủy phân thích hợp, pH tự nhiên, thời
gian thủy phân thích hợp.
Thủy phân bằng enzyme Flavouyme,tỷ lệ
enzyme/NL thích hợp, pH tự nhiên, thời gian
3 giờ, nhiệt độ thủy phân:
Dịch đạm thủy phân protein
Phần bã lọc
Mục đích: Bố trí thí nghiệm nhằm xác định nhiệt độ thủy phân thích hợp đối với enzyme Flavourzyme cho quá trình thủy phân
Tiến hành:
- Thủy phân giai đoạn đầu bằng enzyme Protamex: Ta tiến hành cân chính xác 100 (g) nguyên liệu và cho vào cốc 250ml, các cốc được đánh số thứ tự từ (1) đến (5). Tiến hành thủy phân với các thông số: Tỷ lệ Enzyme/NL thích hợp, tỷ lệ nước/NL: 30%, nhiệt độ thủy phân thích hợp, pH tự nhiên, thời gian thủy phân thích hợp.
- Thủy phân giai đoạn sau bằng enzyme Flavourzyme: sau khi lần thủy phân giai đoạn 1 xong ta tiến hành bất hoạt enzyme protamex ở nhiệt độ 900C trong thời gian 15 phút. Sau khi đã bất hoạt enzyme protamex xong và chờ nhiệt độ hỗn hợp đạt khoảng 500C ta tiến hành thủy phân ở các thông số: Tỷ lệ enzyme/NL thích hợp, thời gian 3 giờ, pH tự nhiên, nhiệt độ thủy phân: 400C, 450C, 500C, 550C và 600Ctương ứng vào các cốc được đánh số thứ tự từ (1) đến (5)
- Bất hoạt enzyme: sau khi thủy phân giai đoạn 2 xong ta tiến hành bất hoạt enzyme ở nhiệt độ 900C trong thời gian 15 phút.
- Lọc: Dịch thủy phân được lọc qua ray lọc, mục đích tách phần bã lọc(xương, vãy…) ra khỏi dich lọc
- Ly tâm: Dùng máy ly tâm để ly tâm dịch lọc, ta tiến hành ly tâm ở 5000(V/P) trong thời gian 30 phút, ở nhiệt độ thường. Sau khi ly tâm tách riêng dịch đạm thủy phân protein và phần cặn ly tâm. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
- Xác định các thông số: Dịch đạm thủy phân protein được đem đi phân tích xác định hiệu suất thu hồi nito, hàm lượng Nitơ acid amin, hàm lượng ammoniac.
* Từ đó chọn nhiệt độ thủy phân thích hợp đối với enzyme Flavourzyme cho quá trình thủy phân
2.2.3.6 Sơ đồ bố trí thí nghiệm xác định thời gian thủy phân thích hợp đối với enzyme Flavourzyme cho quá trình thủy phân. với enzyme Flavourzyme cho quá trình thủy phân.
Hình 2.9: Sơ đồ bố trí thí nghiệm xác định thời gian thủy phân thích hợp đối với enzyme Flavourzyme cho quá trình thủy phân.
Nguyên liệu đã làm nhỏ, đem đông lạnh Rã đông Mẫu3: 3giờ Mẫu2: 2 giờ Mẫu1: 1giờ Mẫu4: 4giờ Mẫu5: 5giờ Mẫu6: 6giờ Bất hoạt enzyme Lọc tách xương Ly tâm
Xác định hiệu suất thu hồi nito,
Nito axid amin, Nito amoniac.
Xác định thời gian thủy phân
enzyme Flavourzyme thích hợp.
Cặn ly tâm
Thủy phân bằng enzyme protamex, tỷ lệ
enzyme/NL thích hợp, nước/NL= 1:3, nhiệt độ thủy phân thích hợp, pH tự nhiên, thời
gian thủy phân thích hợp.
Thủy phân bằng enzyme Flavouyme, tỷ lệ
enzyme/NL thích hợp, nhiệt độ thủy phân
thích hợp,pH tự nhiên, thời gian thủy phân:
Dịch đạm thủy phân protein
Phần bã lọc
* Thuyết minh quy trình:
Mục đích: Bố trí thí nghiệm nhằm xác định thời gian thủy phân thích hợp đối với enzyme Flavourzyme cho quá trình thủy phân nhằm nâng cao chất lượng dịchđạm thủy phân protein
Tiến hành:
- Thủy phân giai đoạn đầu bằng enzyme Protamex: Ta tiến hành cân chính xác 100 (g) nguyên liệu và cho vào cốc 250ml, các cốc được đánh số thứ tự từ (1) đến (6). Tiến hành thủy phân với các thông số: Tỷ lệ Enzyme/NL thích hợp, tỷ lệ nước/NL: 30%, nhiệt độ thủy phân thích hợp, pH tự nhiên, thời gian thủy phân thích hợp.
- Thủy phân giai đoạn sau bằng enzyme Flavourzyme: sau khi lần thủy phân giai đoạn đầu xong ta tiến hành bất hoạt enzyme protamex ở nhiệt độ 900C trong thời gian 15 phút. Sau khi đã bất hoạt enzyme protamex xong và chờ nhiệt độ đỗn hợp đạt khoảng 500C ta tiến hành thủy phân ở các thông số: Tỷ lệ enzyme/NL thích hợp, nhiệt độ thủy phân thích hợp, pH tự nhiên, thời gian thủy phân: 1 giờ, 2 gờ, 3 giờ, 4 giờ, 5 giờ và 6 giờ tương ứng vào các cốc được đánh số thứ tự từ (1) đến (6)
- Bất hoạt enzyme: sau khi thủy phân giai đoạn 2 xong ta tiến hành bất hoạt enzyme ở nhiệt độ 900C trong thời gian 15 phút
- Lọc: Dịch thủy phân được lọc qua ray lọc, mục đích tách phần bã lọc(xương, vãy…) ra khỏi dich dịch lọc
- Xác định các thông số: Dịch đạm thủy phân được đem đi phân tích xác định hàm lượng nitơ tổng số, nitơ acidamin, xác đinh giá trị hiệu suất thu hồi Nito.
* Từ đó, chọn thời gian thủy phân thích hợp đối với enzyme Flavourzyme cho quá trình thủy phân
2.3 Phương pháp nguyên cứu 2.3.1 Phương pháp phân tích: 2.3.1 Phương pháp phân tích:
- Xác định hàm lượng đạm formol của nguyên liệu theo phương pháp Sorensen (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
- Xác định hàm lượng đạm tổng số của nguyên liệu theo phương pháp kjeldahl
- Xác định hàm lượng đạm NH3 của nguyên liệu theo phương pháp lôi kéo hơi nước
- Xác định hàm lượng nước của nguyên liệu theo phương pháp sấy - Xác định hàm lượng tro của nguyên liệu theo phương pháp nung
2.3.2 Phương pháp xử lí số liệu