- Pratylenchus coffeae: Phân bố rộng khắp thế giới Gây hại nghiêm trọng ở cà phê, chuối, các cây họ cam chanh và nhiều loài cây trồng khác Ở nước ta,
2.5.4.Nhân nuôi tuyến trùng Pratylenshus spp.
ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.5.4.Nhân nuôi tuyến trùng Pratylenshus spp.
Tuyến trùng Pratylenchus spp.ñược nuôi trong môi trường WA_cà rốt. - Dùng dụng cụ bắt tuyến trùng bắt riêng tuyến trùng Pratylenchus spp. cho vào cốc thủy tinh chứa nước cất vô trùng.
- Dùng một củ cà rốt còn tươi và không mang mầm bệnh rửa sạch, sau ñó rửa lại bằng nước cất vô trùng rồi ñể ráo.
- Đưa toàn bộ dịch chứa tuyến trùng, cà rốt vào tủ cấy vô trùng. Sử dụng 2 con dao ñể gọt bỏ phần vỏ cà rốt, chú ý cứ sau mỗi một lần gọt phải ñổi dao và
hơ trên ngọn lửa ñèn cồn ñể tránh không cho nấm và vi khuẩn xâm nhập. Cắt thành từng lát tròn vừa phải, khoảng từ 3-5 mm.
- Dùng kẹp kẹp lấy từng lát cà rốt ñặt vào ñĩa petri chứa môi trường WA, mỗi ñĩa ñặt 3 lát cà rốt.
- Khử trùng bề mặt tuyến trùng bằng dung dịch kháng sinh Streptomycin (1/100): hút dịch chứa tuyến trùng cho vào eppendorf ly tâm 1000 vòng/phút trong 5-10 phút, sau ñó dùng pipet hút bỏ phần dịch ở phía trên, hút 100 Microlit dung dịch kháng sinh Streptomycin 1% cho vào eppendorf, lắc ñều, ñể yên 1-2 phút rồi ly tâm 1000 vòng/phút trong 5-10 phút. Tiếp tục hút bỏ phần dịch ở phía trên rồi hút nước cất vô trùng cho vào và ly tâm khoảng 2-3 lần nữa. Ly tâm xong cho tuyến trùng vào nước cất vô trùng trong cốc thủy tinh.
- Sau ñó dùng pipet vô trùng hút lấy phần nước chứa tuyền trùng trong cốc thủy tinh tưới lên những lát cà rốt ñể nuôi chúng trong ñó.
- Sau 10- 15 ngày tiến hành theo dõi sự phát sinh phát triển của tuyến trùng trong môi trường nhân nuôi ở dưới kính hiển vi.