V t li us d ng cho đ́nh gí t́nh kh́ng đo ôn, bc ĺ v̀ h̀m l ng amylose
P HN III.K T QU NGHIÊN CU & THO L UN
3.1.5. Kho śt t́nh kh́ng bc ĺ, đo ôn, hƠm l ng amylose trên 21 ging ĺa
cao (>25%), nhóm 2 bao g m ćc m u ĺa (24 m u ĺa) có hàm l ng amylose th p (<20%) và trung b̀nh (<25%). Nh v y, có th ng d ng ćc ch th RM190 đ phân nhóm ćc gi ng ĺa thành 2 nhóm: nhóm có hàm l ng amylose cao và nhóm có hàm l ng amylose th p, trung b̀nh.
V i qui tr̀nh này ch́ng tôi có th phân bi t gen qui đ nh hàm l ng amylose trên
cây ĺa có th h tr ŕt ng n th i gian cho công t́c ch n t o gi ng.
Ngoài ra, theo m t s nghiên c u có th s d ng enzyme c t AccI đê phân c t s n ph m PCR c a ch th RM190 (CAPS), nh n di n nhóm gi ng ĺa có hàm l ng amylose th p v i nhóm gi ng ĺa có hàm l ng amylose cao và trung b̀nh [25, 27, 60]. Tuy nhiên trong đi u ki n th i gian không cho phép nên ch́ng tôi ch a ti n hành th nghi m trong đ t nghiên c u này.
3.1.5. Kh o śt t́nh kh́ng b c ĺ, đ o ôn, hƠm l ng amylose trên 21 gi ng ĺa. ĺa.
3.1.5.1. Kh o śt t́nh kh́ng b c ĺ
V i các thông s đ c t i u trên, chúng tôi ti n hành kh o sát quy tr̀nh trên ćc gi ng ĺa th c t đ nh n di n gen kh́ng Xa7, Xa21. th c hi n thí nghi m này, chúng tôi th c hi n ph n ng PCR v i 21 m u ĺa là ćc gi ng ĺa ph m ch t t t đ c s d ng
Ch́ th́ch
1: hƠm l ng amylose cao.
60
cho ch n t o gi ng đã đ c li t kê b ng 2.7, do công ty Gi ng cây tr ng Mi n Nam cung c p, d̀ng chu n kh́ng và chu n nhi m theo ngu n gi ng vi n ĺa IRRI. K t qu thu đ c:
Qua k t qu trên hình 3.14, ch́ng tôi nh n di n đ c gi ng ĺa OM9918 và OM3536 có gen kh́ng Xa21. K t qu này t ng th́ch v i ki u h̀nh kh́ng b c ĺ c a hai gi ng ĺa.
1000bp 750bp
H̀nh 3.14. K t qu b ng h̀nh 21 gi ng ĺa ch y PCR v i pTA248 trên gel agarose 2%
1000bp 750bp
61
Qua k t qu trên h̀nh 3.15 nh n đ nh đ c ćc gi ng ĺa th nghi m không ch a gen kh́ng b c ĺ Xa7. K t qu này t ng th́ch v i ki u h̀nh nhi m b nh ća m t s gi ng ĺa kh o śt.
3.1.5.2. Kh o śt t́nh Ệh́ng đ o ôn
V i các thông s đ c t i u trên, chúng tôi ti n hành kh o sát quy tr̀nh trên ćc gi ng ĺa th c t đ nh n di n gen kh́ng Pib, Piz, Pi37, Pikh, Pi40, Pi41, Pi39. th c hi n thí nghi m này, chúng tôi th c hi n ph n ng PCR v i 21 m u ĺa là ćc gi ng ĺa ph m ch t t t đ c s d ng cho ch n t o gi ng đã đ c li t kê b ng 2.7, do công ty Gi ng cây tr ng Mi n Nam cung c p, d̀ng chu n kh́ng và chu n nhi m theo ngu n gi ng vi n ĺa IRRI. K t qu thu đ c (ćc b ng h̀nh đ i di n) nh sau:
H̀nh 3.16. S n ph m b ng h̀nh 21 gi ng ĺa ch y PCR v i
marker RM27933 trên gel polyacrylamide 4,5%
434bp 400bp
H̀nh 3.15. K t qu b ng h̀nh 21 gi ng ĺa ch y PCR v i RM5509 trên gel
polyacrylamide 4,5%
260bp 258bp 255bp
62
B ng 3.4. K t qu b ng h̀nh 7 marker liên k t gen kh́ng b c ĺ trên gel polyacrylamide 4,5% c a 21 m u ĺa Marker RM 208 RM343 1 RM54 3 RM20 6 RM2813 0 RM126 1 RM2793 3 Gene kháng Ki u hình
Pib Piz Pi37 Pikh Pi40 Pi41 Pi39
M u OM22 + - + - - - + VN121 + - - - - OM4900 + + + - - - + OM6162 + + + - - - - H̀nh 3.18. S n ph m b ng h̀nh 21 gi ng ĺa ch y PCR v i marker RM1261 trên gel polyacrylamide 4,5%
H̀nh 3.17. S n ph m b ng h̀nh 21 gi ng ĺa ch y PCR v i
marker RM21830 trên gel polyacrylamide 4,5%
167bp 150bp
175bp 170bp
63 OM20 + - + # - - + OM240 - - + - - - - OM7167 + - + - - - + OM34 + + + - - - - OM1042 4 - + + # - - - OM8017 - - + - - - - IR59606 + + + - - - - OM9918 + - - - - VND95- 20 + - - - - OM7053 + - - - + OM1063 6 - + + - + - + OM9582 + + + - - - + OM9586 + + + - - - + OM121 + - + + - - - VD20 + - + + - - - Jasmine8 5 - - - - OM3536 + - + - - - - IR72 + + + + + + + ITA212 + + + + + + + Ghi ch́: '+ : Allele kháng. '-: Allele nhi m. #: Không ć k t qu . B ng 3.4, là k t qu b ng h̀nh c a 7 marker RM208, RM3431, RM543, RM206, RM28130, RM1261, RM27933 s d ng trong đ́nh gí t́nh kh́ng đ o ôn, v i m u IR72, ITA212
đ c s d ng nh m u ch ng kh́ng đ o ôn; m u Jasmine95, OM3536, đ c s d ng nh
m u ch ng nhi m đ o ôn.
D a vào k t qu trên ch́ng tôi l p b ng phân nhóm ćc gi ng ĺa có ch a đa gen kh́ng đ o ôn nh sau:
64
B ng 3.5. Phân nh́m gen kh́ng v̀ nh́m ĺa mang gen kh́ng so śnh v i đ́nh gí ki u h̀nh M u ĺa Gen kh́ng T́nh kh́ng VN121 Pib C p 5.1 VND95-20 C p 3.1 OM9918 C p 2 OM240 Pi37 OM8017 C p 3
OM10424 Piz, Pi37 C p 5.1
OM7053 Pib, Pi39
OM3536 Pib, Pi37 C p 7.1
OM22 Pib, Pi37, Pi39 OM20
OM7167
OM6162 Pib, Piz, Pi37 C p 3.1 - 5 OM34
IR59606 C p 3
OM121 Pib, Pi37, Pikh C p 5
VD20 C p 5.1
OM9582 Pib, Piz, Pi37, Pi39 OM9586
OM4900 C p 2
OM10636 Piz, Pi37, Pi39, Pi40
C p 2
Jasmine85 . C p 9
IR72 Pib, Piz, Pi37, Pikh, Pi40, Pi41, Pi39
C p 1
ITA212 Pib, Piz, Pi37, Pikh,
Pi40, Pi41, Pi39
C p 1
D a vào b ng 3.5 và k t qu ki u h̀nh c a m t s gi ng ĺa, nhóm nghiên c u đ a ra nh n đ nh:
Gi ng ĺa Jasmine85 chu n nhi m không ch a gen kh́ng bi u hi n nhi m n ng v i b nh đ o ôn.
Gi ng ĺa OM3536 chu n nhi m có ch a gen kh́ng Pib, Pi37/ 7 gen kh́ng nh ng có bi u hi n nhi m b nh đ o ôn (c p 7.1), đi u đó ch ng t gen kh́ng Pib, Pi37 bi u hi n t́nh kh́ng y u so v i b nh đ o ôn, d đón đây không ph i gen chuyên kh́ng đ o ôn. V i
Ghi ch́ [46]: t́nh kh́ng đ o ôn Kháng cao: c p 1 Kháng: c p 2 -3. Kháng trung bình: c p 3.1 – 5.0 Nhi m: c p 5.1 – 7. Nhi m n ng: c p 7.1 – 9.0
65 gi ng ĺa VN121 có mang gen kh́ng Pib nh ng v n bi u hi n ki u h̀nh nhi m b nh. Ngoài ra, gi ng ĺa VD20 ch a đ n 3 gen kh́ng Pib, Pi37, Pikh/ 7gen kh́ng nh ng v n bi u hi n ki u h̀nh nhi m đ o ôn (c p 5). T k t qu đó, nhóm nghiên c u đ́nh gí ćc gen Pib, Pi37, Pikh không ph i là ćc gen chuyên kh́ng v i ǹi n m Pyricularia oryzae gây b nh đ o ôn Vi t Nam.
Nhóm gi ng ĺa VND95-20, OM9918 có ch a gen kh́ng Pib/ 7 gen kh́ng, OM8017 ch a
Pi37/ 7 gen kh́ng, OM121 ch a Pib, Pi37, Pikh / 7 gen kh́ngcó bi u hi n ki u h̀nh kh́ng đ o ôn. Nhóm nghiên c u d đón ćc gi ng ĺa này có th mang gen kh́ng kh́c v i gen kh́ng mà nhóm ti n hành phân t́ch và có th ćc gen kh́ng Pib, Pi37, Pikh bi u hi n k t h p t́nh kh́ng v i gen kh́ng kh́c th hi n ki u h̀nh kh́ng.
Gi ng ĺa OM10424 mang gen Piz, Pi37/ 7 gen kh́ng, bi u hi n nhi m nh v i b nh đ o ôn, nhóm gi ng ĺa OM6162, IR59606 mang 3 gen kh́ng Pib, Piz, Pi37/ 7 gen kh́ng có bi u hi n kh́ng c p 3. i u đó ch ng t gen kh́ng Piz có bi u hi n kh́ng m nh h n ćc
gen Pib, Pi37 và khi k t h p v i Pib, Pi37 bi u hi n ki u h̀nh kh́ng v i đ o ôn m c đ v a (c p 3).
Gi ng ĺa OM4900 có ch a đa gen kh́ng Pib, Piz, Pi37, Pi39/ 7 gen kh́ng, bi u hi n kh́ng v i b nh đ o ôn, d đón Pi39 bi u hi n kh́ng h n Pib, Pi37 và có bi u hi n k t h p t́nh kh́ng v i ćc gen trên th hi n qua ki u h̀nh kh́ng v i đ o ôn m c đ v a (c p
2).
Gi ng ĺa OM10636 có ch a đ n 4 gen kh́ng Piz, Pi37, Pi39, Pi40/ 7 gen kh́ng, bi u hi n kh́ng đ o ôn (c p 2), d đón ćc gen kh́ng Piz, Pi40 m nh h n gen Pi37, Pi39 và bi u hi n k t h p t́nh kh́ng v i ćc gen này.
Gen kh́ng Pi41 ch đ c t̀m th y qua phân t́ch chu n kh́ng và không đ c t̀m th y trong ćc gi ng ĺa kh a śt, nhóm nghiên c u gi đ nh r ng gen kh́ng đ o ôn Pi41 ́t ph bi n trong ćc gi ng ĺa Vi t Nam.
́nh gí chung: T ćc nh n đ nh d a theo ćc gen đã kh o śt trong nghiên c u, bi u hi n ki u h̀nh kh́ng t ng d n hay ki u h̀nh nhi m gi m d n khi s l ng gen kh́ng trong ćc gi ng ĺa kh o śt t ng d n, nhóm nghiên c u c ng đ a ra gi thuy t ćc gen Pib, Pi37, Pikh là ćc gen kh́ng ph và ćc gen Piz, Pi40, Pi39 là ćc gen kh́ng đ o ôn ch́nh. làm rõ ćc gen kh́ng ch́nh này c n ti n hành nghiên c u phân t́ch thêm ki u h̀nh gi ng
66
ĺa OM9582, OM9586, OM34, OM7053, OM22, OM20, OM7167 nh m x́c đ nh ćc gen kh́ng ch́nh v i đ o ôn, h tr cho vi c ch n t o gi ng kh́ng đ o ôn b ng ph ng ph́p hi n đ i.
3.1.5.3. Kh o śt marker liên k t v i gen qui đ nh hàm l ng amylose
V i các thông s đ c t i u trên, chúng tôi ti n hành kh o sát quy tr̀nh trên ćc gi ng ĺa th c t đ t ch t l ng xu t kh u. th c hi n thí nghi m này, chúng tôi th c hi n ph n ng PCR v i 21 m u ĺa do công ty Gi ng cây tr ng Mi n Nam cung c p. th c hi n thí nghi m này, chúng tôi th c hi n ph n ng PCR v i 21 m u ĺa là ćc gi ng ĺa ph m ch t t t đ c s d ng cho ch n t o gi ng đã đ c li t kê b ng 2.7, do SRC cung c p.
H̀nh 3.10. S n ph m b ng h̀nh 21 gi ng ĺa ch y PCR v i marker RM190 trên gel
polyacrylamide 4,5%
K t qu trên hình 3.13, ch́ng tôi nh n th y k t qu b ng h̀nh nh n di n đ c 3 gi ng ĺa OM240, OM10424, OM7053 có b ng h̀nh tr̀ng v i v tŕ 120 bp là b ng h̀nh cho đ c t́nh amylose cao, ćc gi ng ĺa c̀n l i có k t qu v tŕ 130bp cho đ c t́nh amylose trung b̀nh, k t qu ph̀ h p v i k t qu đ́nh gí hàm l ng amylose b ng ph ng ph́p sinh hóa.
130bp 120bp
67
B ng 3.6. K t qu đ́nh gí h̀m l ng amylose b ng marker RM190 so śnh v i ki u h̀nh v̀ b ng phân nh́m 1.5 STT Tên gi ng Hàm l ng amylose (%) MARKER AMYLOSE (RM190) Nhóm Amylose L n1 L n2 L n3 1 OM22 24,48 ± 0,68 2 2 2 Trung bình 2 VN121 24,09 ± 0,41 2 2 2 Trung bình 3 OM4900 20,05 ± 0,68 2 2 2 Trung bình 4 OM6162 19,41 ± 0,83 2 2 2 Trung bình 5 OM20 24,03 ± 0,54 2 2 2 Trung bình 6 OM240 29,59 ± 0,74 1 1 1 Cao 7 OM7167 23,31 ± 0,65 2 2 2 Trung bình 8 OM34 21,84 ± 1,27 2 2 2 Trung bình 9 OM10424 29,42 ± 0,66 1 1 1 Cao 10 OM8017 23,63 ± 0,43 2 2 2 Trung bình 11 IR59606 24,10 ± 0,47 2 2 2 Trung bình 12 OM9918 20,99 ± 0,94 2 2 2 Trung bình 13 VND95- 20 22,22 ± 0,86 2 2 2 Trung bình 14 OM7053 30,12 ± 1,13 1 1 1 Cao 15 OM10636 24,20 ± 0.99 2 2 2 Trung bình 16 OM9582 23,86 ± 0,73 2 2 2 Trung bình 17 OM9586 24,02 ± 0,56 2 2 2 Trung bình 18 OM121 19,89 ± 0,54 2 2 2 Trung bình 19 VD20 20,04 ± 1,09 2 2 2 Trung bình 20 Jasmine85 19,39 ± 0,69 2 2 2 Trung bình 21 OM3536 20,96 ± 0,98 2 2 2 Trung bình CV (%) 3,39 F * Gi i th́ch:* Ệh́c bi t ć ́ ngh a m c 5%.CV .
T k t qu b ng 3.6 trên nhóm nghiên c u nh n di n đ c ćc gi ng ĺa OM10424, OM240, OM7053 có hàm l ng amylose cao, ćc gi ng ĺa c̀n l i có hàm l ng amylose trung b̀nh th́ch h p s d ng cho ch n t o gi ng ĺa.
Ch́ th́ch 1: HƠm l ng amylose cao 2: HƠm l ng amylose trung b̀nh
68
B ng 3.7. K t qu đ́nh gí t ng quan ki u gen v̀ ki u h̀nh kh́ng b c ĺ, đ o ôn v̀ h̀m l ng amylose trên 21 gi ng ĺa
STT Tên gi ng Hàm l ng amylose (%) Marker Amylose (RM190) Maker liên k t gen Xa7 Maker liên k t gen Xa21 Ki u h̀nh v i b nh
b c ĺ Gen kh́ng đ o ôn Ki u h̀nh v i b nh đ o ôn
1 OM22 24,48 ± 0,68 Trung bình Không Không Ch a có thông tin Pib,Pi37, Pi39
Ch a có
thông tin
2 VN121 24,09 ± 0,41 Trung bình Không Không Nhi m Pib C p 5.1
3 OM4900 20,05 ± 0,68 Trung bình Không Không Nhi m Pib, Piz, Pi37, Pi39
C p 2
4 OM6162 19,41 ± 0,83 Trung bình Không Không Nhi m Pib, Piz, Pi37 C p 3 - 5
5 OM20 24,03 ± 0,54 Trung bình Không Không Ch a có thông tin Pib Pi37, Pi39
Ch a có
thông tin
6 OM240 29,59 ± 0,74 Cao Không Không Ch a có thông tin Pi37 Ch a có
thông tin
7 OM7167 23,31 ± 0,65 Trung bình Không Không Ch a có thông tin Pib,Pi37, Pi39
Ch a có
thông tin
8 OM34 21,84 ± 1,27 Trung bình Không Không Ch a có thông tin Pib, Piz, Pi37 Ch a có
thông tin
9 OM10424 29,42 ± 0,66 Cao Không Không Nhi m Piz, Pi37 C p 5.1
10 OM8017 23,63 ± 0,43 Trung bình Không Không Ch a có thông tin Pi37 C p 3
11 IR59606 24,10 ± 0,47 Trung bình Không Không Ch a có thông tin Pib, Piz, Pi37 C p 3
12 OM9918 20,99 ± 0,94 Trung bình Không Ć Kh́ng Pib C p 2
13 VND95-20 22,22 ± 0,86 Trung bình Không Không Ch a có thông tin Pib C p 5.1
14 OM7053 30,12 ± 1,13 Cao Không Không Ch a có thông tin Ch a có
thông tin 15 OM10636 24,20 ± 0.99 Trung bình Không Không Ch a có thông tin Piz, Pi37,
Pi39, Pi40
C p 2
16 OM9582 23,86 ± 0,73 Trung bình Không Không Ch a có thông tin Pib, Piz, Pi37, Pi39
Ch a có
thông tin
17 OM9586 24,02 ± 0,56 Trung bình Không Không Ch a có thông tin Pib, Piz, Pi37, Pi39
Ch a có
thông tin
18 OM121 19,89 ± 0,54 Trung bình Không Không Ch a có thông tin Pib, Pi37, Pikh
C p 5
19 VD20 20,04 ± 1,09 Trung bình Không Không Ch a có thông tin Pib, Pi37, Pikh
C p 5.1
20 Jasmine85 19,39 ± 0,69 Trung bình Không Không Nhi m C p 9
21 OM3536 20,96 ± 0,98 Trung bình Không Ć Kh́ng Pib, Pi37 C p 7.1
CV (%) 3,39
69
Gi i th́ch:* Ệh́c bi t ć ́ ngh a m c 5%.
T b ng 3.7, nhóm nghiên c u nh n đ nh đ c, ćc gi ng ĺa OM4900, OM6162, IR59606 mang đa gen kh́ng đ o ôn và có hàm l ng amylose trung b̀nh có th s d ng cho ch n t o gi ng ĺa kh́ng đ o ôn, ph m ch t t t.
Ćc gi ng ĺa OM9582, OM9586, OM34, OM7053, OM22, OM20, OM7167 c n ti n hành nghiên c u đ́nh gí ki u h̀nh đ x́c đ nh gen kh́ng ch́nh Piz, Pi39, Pi40 theo nh d đón c a nhóm nghiên c u d a trên ćc gen kh́ng đã ti n hành phân t́ch.
Ćc gi ng OM9918, OM3536 mang gen kh́ng b c ĺ Xa21 và có hàm l ng amylose trung b̀nh có th s d ng cho ch n gi ng kh́ng b c ĺ và ph m ch t g o t t.
Gi ng ĺa OM9918 là gi ng ĺa mang c 3 đ c t́nh kh́ng b c ĺ, đ o ôn và có hàm l ng amylose trung b̀nh, c n ti n hành nghiên c u x́c đ nh gen kh́nh ch́nh (ngoài ćc gen đã ti n hành phân t́ch) nh m s d ng cho ch n t o gi ng ĺa đa ph m ch t b ng ph ng ph́p hi n đ i. Ghi ch́ [46]: Kh́ng đ o ôn Kháng cao: c p 1 Kháng: c p 2 -3. Kháng trung bình: c p 3.1 – 5.0 Nhi m: c p 5.1 – 7. Nhi m n ng: c p 7.1 – 9.0
PH N IV.K T LU N
70
4.1. K t lu n:
Sau khi hoàn thành đ tài, chúng tôi có m t s k t lu n sau:
Ćc ch th liên k t v i gen kh́ng b c ĺ
- Nh n di n đ c gene kh́ng Xa7, Xa21 ĺa d a trên ch th SSR RM5509, STS pTA248 v i ḱch th c b ng l n l t 258 bp, 1000 bp V i quy tr̀nh này ch́ng tôi có th