GEN CỦA HAI GIỐNG ĐẬU TƯƠNG SL3 VÀ DT84
Mọi nghiên cứu về hệ gen đều bắt đầu từ việc tách chiết được DNA hoặc RNA ở dạng tinh sạch.
Từ rễ mầm đậu tương của 2 giống chúng tôi tiến hành tách chiết RNA tổng số theo bộ kit Trizol Reagents của hãng Invitrogen. RNA tổng số sau khi tách được kiểm tra bằng điện di trên gel argarose 1% và chụp ảnh dưới ánh sáng đèn cực tím. Kết quả kiểm tra cho thấy sản phẩm tách chiết RNA tổng số mà chúng tôi thu được có thể sử dụng để tổng hợp cDNA và tiến hành phản ứng PCR.
Từ khuôn RNA tổng số để khuếch đại được đoạn mã hóa của gen GmEXP1
(cDNA) thì chúng tôi đã thực hiện bằng phản ứng RT-PCR , qua hai giai đoạn liên tiếp là tạo cDNA và sau đó là PCR. Phản ứng nhân bản đoạn mã hóa của gen
GmEXP1 được thực hiện bằng phản ứng PCR để khuếch đại đoạn mã hóa của gen
Gm EXP với cặp mồi đặc hiệu đã được thiết kế là SoyExpF/SoyExpR. Nhiệt độ gắn mồi tối ưu cho phản ứng PCR là 560C, sau 30 chu kỳ phản ứng. Kết quả kiểm tra sản phẩm phản ứng PCR bằng điện di trên gel argarose 1% với sự có mặt của marker chuẩn và chụp ảnh dưới ánh sáng đèn cực tím được thể hiện ở hình 3.1.
Hình 3.1 Ảnh điện di sản phẩm RT-PCR khuếch đại đoạn mã hoá của gen
GmEXP1(M: marker 1 kb 1 : SL3 ; 2 : DT84)
Kết quả PCR thu được cho thấy cả 2 mẫu (SL3, DT84) đều cho sản phẩm với kích thước xấp xỉ 0,77kb, kích thước này phù hợp theo tính toán lý thuyết và tương ứng với kích thước của đoạn mã hoá thuộc gen GmEXP1 của giống mang mã số AF516879 công bố trong Gen Bank. Chúng tôi thực hiện tinh sạch sản phẩm PCR theo bộ kit và kiểm tra kết quả điện di trên gel argarose 1% (Hình 3.2).
Hình 3.2. Ảnh điện di sản phẩm thôi gel đoạn mã hoá của gen GmEXP1
M: marker 1kb 1,2: SL3; 3,4 : DT84
1 M 2
0,77kb
3.2. TÁCH DÒNG VÀ SO SÁNH XÁC ĐỊNH TRÌNH TỰ ĐOẠN MÃ HÓA CỦA GEN GmEXP1 CỦA HAI GIỐNG ĐẬU TƯƠNG SL3 VÀ DT84