+ Bệnh phẩm là huyết thanh hoặc huyết tương
+ Nhỏ 0,05ml huyết thanh (hoặc huyết tương) vào 1 vũng trũn trờn bỡa phản ứng (để giọt rơi tự do).
+ Dựng que dẹt: dàn huyết thanh trong giới hạn vũng trũn.
+ Lắc nhẹ lọ khỏng nguyờn rồi nhỏ 1 giọt khỏng nguyờn vào vũng trũn đó cú huyết thanh, khụng khuấy trộn.
+ Lắc tốc độ 100 vũng/1 phỳt trong 8 phỳt rồi đọc kết quả. + Kết quả õm tớnh khi thấy:
Đỏm than hoạt mịn tập trung ở giữa vũng trũn, màu xỏm đồng nhất. + Kết quả dương tớnh: cú hạt kết cụm màu đen trờn khắp mặt vũng trũn bỡa phản ứng.
Khi kết quả phản ứng RPR dương tớnh, bệnh nhõn sẽ được làm thờm kỹ
2.3.5.2 Kỹ thuật chẩn đoỏn HIV
Kỹ thuật ngưng kết hạt vi lượng (Microtiter Particle Agglutination )
- Bệnh phẩm là huyết thanh.
-Dựng ống nhỏ giọt nhỏ 3 giọt (75 μl) dung dịch pha loóng huyết thanh vào giếng số 1 và 1 giọt (25 μl) vào giếng số 2 và số 3.
-Dựng pipet vi lượng nhỏ 25 μl huyết thanh vào giếng 1, trộn đều bằng cỏch hỳt lờn bấm xuống 3 đến 4 lần. Sau đú hỳt 25 μl dung dịch pha loóng của giếng 1 chuyển sang giếng 2. Trộn đều dung dịch trong giếng 2 và sau đú chuyển 25 μl sang giếng 3.
-Dựng ống nhỏ giọt nhỏ 1 giọt (25 μl) dung dịch treo chứa hạt khụng gắn khỏng nguyờn vào giếng 2 và 1 giọt (25 μl) dung dịch treo chứa hạt cú gắn khỏng nguyờn vào giếng 3.
-Trộn đều dung dịch trong giếng thật kỹ bằng một mỏy trộn (mỏy rung lắc tự động), đậy kớn mặt khay, đặt vào một chỗ bằng phẳng và để ở nhiệt độ
phũng (15-200C) trong vũng 2 h, sau đú đọc kết quả.
-Việc xột nghiệm mẫu chứng dương cũng được tiến hành đồng thời để
kiểm trạ
-Khẳng định nhiễm HIV: bằng 3 kĩ thuật Serodia HIV, Genscreen V2, Uniform plus Ọ
2.4 Địa điểm và thời gian nghiờn cứu 2.4.1 Địa điểm 2.4.1 Địa điểm
-Nghiờn cứu lõm sàng, cỏc yếu tố liờn quan: Tại khoa Khỏm bệnh Bệnh viện Da Liễu Trung Ương.
-Cỏc kỹ thuật xột nghiệm: tại khoa Xột nghiệm Bệnh viện Da Liễu Trung
Ương.
Nghiờn cứu được tiến hành từ 1-10/ 2010
2.5 Xử lý số liệu
Xử lý số liệu theo phương phỏp thống kờ y học, sử dụng chương trỡnh phần mềm SPSS 12.0:
- Cỏc biến định tớnh được mụ tả dưới dạng phần trăm.
- Cỏc biến định lượng được mụ tả dưới dạng trung bỡnh ± độ lệch.
- So sỏnh sự khỏc biệt về cỏc biến định tớnh của hai hay nhiều nhúm bằng test χ2.
- Cỏc kết quả được coi là cú ý nghĩa thống kờ nếu p < 0,05.
2.6 Khống chế sai số trong nghiờn cứu
- Cỏc cụng cụ thu thập thụng tin được thiết kế thớch hợp theo mục tiờu nghiờn cứụ
- Trực tiếp người nghiờn cứu sẽ tiến hành thu thập thụng tin và tiến hành cỏc kỹ thuật xột nghiệm với sự giỳp đỡ của cỏc cỏn bộ cú kinh nghiệm lõu năm tại Khoa xột nghiệm bệnh viện Da Liễu Trung Ương.
- Kỹ thuật và đỏnh giỏ kết quả được kiểm soỏt một cỏch chặt chẽ theo
đỳng quy trỡnh mà nghiờn cứu đề rạ
2.7 Đạo đức trong nghiờn cứu
- Cỏc bệnh nhõn được tư vấn cụ thể và tự nguyện tham gia nghiờn cứụ - Cỏc thụng tin của bệnh nhõn được giữ kớn.
- Đề tài chỉ nhằm mục đớch nghiờn cứu, khụng nhằm bất kỳ mục đớch nào khỏc.
Chương III
KẾT QUẢ NGHIấN CỨU
3.1 Xỏc định tỷ lệ nhiễm HSV và định tớp virus trờn cỏc bệnh nhõn loột sinh dục sinh dục
3.1.1 Tỷ lệ bệnh nhõn loột sinh dục do herpes sinh dục trong số bệnh nhõn đến khỏm nhõn đến khỏm
Từ 1-10/2010 chỳng tụi thu thập được 47 bệnh nhõn loột sinh dục do herpes. Tổng số bệnh nhõn đến khỏm tại bệnh viện Da Liễu Trung Ương trong thời gian này là 141.258 trong đú cú 2.662 bệnh nhõn đến khỏm vỡ cỏc bệnh LTQĐTD.
Tỷ lệ bệnh nhõn loột sinh dục do herpes trong tổng số bệnh nhõn khỏm là 0,03%. Tỷ lệ bệnh nhõn loột sinh dục do herpes trong số bệnh nhõn bị bệnh LTQĐTD là 1,77% (Bảng 3.1).
Bảng 3.1: Tỷ lệ herpes sinh dục trong số bệnh nhõn khỏm
Bệnh n % Bệnh n % Loột sinh dục do HSV 47 0,03 Loột sinh dục do HSV 47 1,77 Tổng số khỏm 141.258 100 Khỏm bệnh LTQĐTD 2.662 100
3.1.2 Tỷ lệ loột sinh dục do herpes trong số loột sinh dục
Trong số 65 bệnh nhõn cú biểu hiện loột sinh dục, 47 bệnh nhõn được xỏc
Bảng 3.2: Cỏc tỏc nhõn gõy loột sinh dục
Tỏc nhõn gõy loột sinh dục n %
Giang mai 2 3,1
Herpes sinh dục 47 72,3
Khụng rừ nguyờn nhõn 16 24,6
Nhận xột bảng 3.2:
Tỷ lệ loột sinh dục do herpes trong số loột sinh dục là 72,3%.
Loột sinh dục do giang mai chiếm tỷ lệ 3,1%, 24,6% trường hợp loột sinh dục chưa xỏc định được nguyờn nhõn.
3.1.3 Xỏc định HSV và định tớp virus bằng kĩ thuật PCR - Đặc điểm đoạn ADN chẩn đoỏn HSV - Đặc điểm đoạn ADN chẩn đoỏn HSV
Hỡnh 3.1: Kết quả PCR chẩn đoỏn HSV Nhận xột hỡnh 3.1:
Đoạn ADN của virus herpes simplex khi phỏt hiện bằng kĩ thuật Nested PCR cú đặc điểm: Sản phẩm khuếch đại vũng 1 là đoạn ADN dài 371 cặp basơ, sản phẩm khuếch đại vũng 2 là đoạn ADN dài 148 cặp basơ.