- Từ mơi trường chọn lọc phân biệt chọn 5 khuẩn lạc, nếu ít hơn 5 khuẩn lạc thì chọn tất cả để khẳng định.
- Cấy các khuẩn lạc đã chọn lên mơi trường Nutrient agar ủ ở 37°C trong 18h đến 24h. Sau khi ủ, chọn các khuẩn lạc thuần để sử dụng cho các thử nghiệm sinh hĩa.
Cơng Ty Cổ Phần Sữa Việt Nam – Nhà Máy Nước Giải Khát a) Trên mơi trường TSI:
Dùng que cấy vịng cấy lên phần nghiêng và cấy đâm sâu vào mơi trường chứa trong ống nghiệm, ủ ở 37°C trong 24h. Giải thích sự thay đổi của mơi trường như sau:
* Phần đáy ống nghiệm:
Màu vàng: cĩ sự lên men glucose Màu đỏ : khơng cĩ sự lên men glucose Màu đen: cĩ sự hình thành hydrogen sulfide Nứt thạch: cĩ hiện tượng sinh khí
* Phần nghiêng mơi trường:
Màu vàng: cĩ sử dụng lactose và sucrose hoặc sử dụng một trong hai lọai đường trên.
Màu đỏ: khơng sử dụng lactose cũng như sucrose b) Trên mơi trường Ure agar:
Dùng que cấy vịng cấy một ít sinh khối lên phần nghiêng mơi trường. Ủ ở 37°C trong 24h.
Thử nghiệm dương tính khi cĩ sự phân giải urea phĩng thích khí NH3 làm thay đổi màu mơi trường từ đỏ sang hồng, để lâu hơn chuyển sang màu đỏ tím (deep cerise). Ngịai ra cịn phân biệt: dương tính nhanh khi màu đổi trong vịng 2h – 4h.
c) Trên mơi trường L.Lysine decarboxylation:
Cấy một ít sinh khối vào ống nghiệm chứa 5ml mơi trường. Ủ ở 37°C trong 24h.
- Thử nghiệm dương tính khi màu mơi trường chuyển sang màu tím.
- Thử nghiệm âm tính: màu mơi trường là màu vàng. d) Phản ứng β - Galactosidase:
Dùng que cấy vịng cấy một ít sinh khối từ khuẩn lạc thuần vào ống nghiệm chứa 0.25ml dung dịch nước muối. Nhỏ vào ống nghiệm 1 giọt Toluen và lắc. Đặt ống nghiệm vào bể điều nhiệt 37°C trong 24h.
Cơng Ty Cổ Phần Sữa Việt Nam – Nhà Máy Nước Giải Khát
Thử nghiệm dương tính khi dịch trong ống nghiệm cĩ màu vàng. Phản ứng thường thấy rõ sau 20 phút.
e) Phản ứng Voges – Proshauer:
Dùng que cấy vịng cấy một ít sinh khối vào 2 ống nghiệm, mỗi ống chứa 0.2ml mơi trường VP, một ống ủ ở nhiệt độ phịng và một ống ủ ở 37°C trong 24h. Sau khi ủ, theo thứ tự nhỏ vào mỗi ống 2 giọt Creatine, 3 giọt 1-naphthol ethanolic và 2 giọt potassium hydroxide, lắc đều sau khi cho mỗi chất phản ứng vào ống nghiệm. Thử nghiệm dương tính khi cĩ sự chuyển màu: từ màu hồng sang đỏ nhạt trong vịng 15 phút.
f) Phản ứng Indole:
Cấy 1 ít sinh khối vào ống nghiệm chứa 5ml Tryptone / Tryptophan ủ ở 37°C trong 24h. Sau khi ủ, nhỏ vào 1 giọt thuốc thử Kovac.
Thử nghiệm dương tính: khi vịng màu đỏ xuất hiện. Giải thích kết quả sinh hĩa: