3.4.3.4.1 Chất pha lỗng: dùng 1 trong 4 lọai dung dịch pha lỗng
- Dung dịch pepton / muối: Thành phần: Pepton : 1.0g NaCl : 8.5g
Nước : 1000 ml
Hịa tan các thành phần trong nước, đun nĩng nếu cần. Chỉnh pH sao cho sau
khi khử trùng, pH là 7.0 ± 0.1 ở 250C.
- Dung dịch Ringer nồng độ ¼
- Dung dịch Pepton
- Dung dịch đệm Photphat 3.4.3.4.2 Mơi trường nuơi cấy:
- Mơi trường VRBL (Violet red bile lactose) – Mơi trường đặt chọn lọc. - Mơi trường BGB (Brillan green Bile Lactose) 2% - mơi trường khẳng định.
3.4.3.5 Quy trình phân tích
- Cân 25g mẫu vào bình chứa 225mL nước cất vơ trùng hoặc chất pha lỗng, lắc cho tan mẫu hồn tồn.
Cơng Ty Cổ Phần Sữa Việt Nam – Nhà Máy Nước Giải Khát
- Lấy 2 đĩa petri, dùng pipetman vơ trùng cho vào mỗi đĩa 1mL mẫu thử. Nồng độ pha lõang 10-1.
- Lấy 2 đĩa petri khác, dùng pipetman vơ trùng cho vào mỗi đĩa 1mL mẫu thử. Nồng độ pha lõang 10-2.
- Thực hiện tương tự cho độ pha lỗng tiếp theo nếu cần.
- Rĩt vào mỗi đĩa petri khỏang 15mL mơi trường VRBL (đã giữ ở 450C – 500C trong bể điều nhiệt), xoay nhẹ đĩa theo kim đồng hồ và ngược lại để hịa tan mẫu vào mơi trường. Để mơi trường đơng đặc tự nhiên.
- Thực hiện song song mẫu đối chứng với 15mL mơi trường VRBL.
- Đổ thêm 4mL mơi trường VRBL tráng phủ kín bề mặt mỗi đĩa và để đơng đặc như trên.
- Thời gian hồn tất 1 mẫu khơng quá 15 phút.
- Lật úp và ủ các đĩa vào tủ ấm ở nhiệt độ 300C ±10C trong 24 giờ ±2giờ. - Sau 24 giờ, đếm các khuẩn lạc Coliform cĩ màu đỏ tía, đường kính ≥0.5mm, đơi khi cĩ vịng đỏ nhạt bao quanh.
- Chỉ giữ lại các đĩa cĩ ít nhất 15 khuẩn lạc, nhiều nhất 150 khuẩn lạc để đếm và khẳng định.