Chất rắn CBH7

Rửa giải cột bằng hệ dung mụi n-hexan-etylaxetat (50:1) thu được khối chất rắn vụ định hỡnh, tiếp tục phõn lập lại khối chất rắn này trờn cột với chất hấp phụ silicagel lần nữa thu được 500 mg chất rắn vụ định hỡnh cho Rf trong cỏc hệ dung mụi khỏc nhau xấp xỉ nhau.

Để xỏc định cỏc axit bộo cú trong CBH7 chỳng tụi dựng phương phỏp GC và thư viện dữ liệu phổ của phũng thớ nghiệm cho biết chất CBH7 gồm 3 axit bộo đú là octacosylic C28H56O2 chiếm 48,44%, axit hexadecanoic (axit palmitic) chiếm 40,92% và axit octadecenoic chiếm 10,65%.

Bảng 3.1- Kết quả phõn tớch thành phần axit bộo trong CBH7

TT Thời gian Axit bộo Tờn khoa học Hàm lƣợng %

1 15,86 16: 0 Hexadecanoic acid 40.92 2 17.30 18:1(n-7) Octadecenoic acid 10.64 3 67.06 28: 0 Octacosylic acid 48.44

Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn

Hỡnh 3.1. Phổ phõn tớch mỏy GC

3.2.2. Hợp chất CBH20 (β-sitosterol)

Khi tiếp tục rửa giải cặn của dịch chiết n-hexan trờn sắc ký cột silicagel bằng hệ dung mụi n-hexan: etylaxetat (90:10) chỳng tụi thu được 155mg chất

CBH20.

Chất CBH20 là những tinh thể hỡnh kim, khụng màu, điểm núng chảy ở 139-1410C. Khi trộn lẫn với chất chuẩn cho một hỗn hợp cú nhiệt độ núng chảy khụng thay đổi.

Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn

nghĩa khối lượng phõn tử bằng 414 đvC sẽ ứng với cụng thức phõn tử C29H50O. Trong phõn tử cú một nhúm OH thể hiện ở phổ FT-IR với võn hấp thụ rộng ở ν = 3380cm-1

. Mặt khỏc phổ 1

H-NMR cho δ = 3,52 ppm đặc trưng cho proton trong nhúm CH liờn kết với nhúm hidroxyl.

Phổ 13

C-NMR cũng nhận thấy δ = 71,7 ppm đặc trưng cho cacbon liờn kết trực tiếp với oxy của nhúm hidroxyl.

Trong phõn tử cũn cú một nối đụi thể hiện bởi cỏc đặc trưng ở phổ FT-IR cú võn ở 3010 cm-1

đặc trưng cho dao động hoỏ trị của liờn kết C-H và võn ở 1650 cm-1đặc trưng cho dao động hoỏ trị của liờn kết đụi C=C. Trong phổ 1

H- NMR cũng nhận được tớn hiệu δ = 5,35 ppm đặc trưng cho H trong liờn kết =C- H và tớn hiệu của 2 cacbon mang nối đụi với δ= 140,7 ppm và δ= 121,5 ppm từ đú cú thể quy kết hợp chất PH-1 cú một nối đụi giữa vị trớ C-5 và C-6.

So sỏnh phổ 1

H-NMR và phổ 13C-NMR của chất CBH20 với phổ của β- Sitosterol thấy hoàn toàn tương tự nhau (bảng 3.1). Từ cỏc kết quả phõn tớch thành phần hoỏ học, tớnh chất vật lý, tớnh chất quang phổ nhất là dựa trờn cơ sở so sỏnh cỏc số liệu phổ của chất CBH20 với phổ của chất β-sitosterol hoàn toàn cú thể cho phộp quy kết chất CBH20 đó phõn lập được từ cõy cẩu tớch là β-sitosterol.

Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn 39 H3C CH3 CH3 H3C CH3 CH3 HO β-Sitosterol 3.2.3. Chất CBH70 (β-Sitosterol-3-O-β-D-glucopyranosit)

Tiếp tục rửa giải cột silicagen để phõn chia cặn thụ của dịch chiết bằng n-hexan bằng hệ dung mụi chlorofom : metanol tỉ lệ (9:1) thu được 105mg chất rắn vụ định hỡnh, cú Rf = 0,53 trong hệ dung mụi clorofom – metanol (70:10) kớ hiệu là chất CBH70.

Hợp chất CBH70 thu được dưới dạng chất rắn vụ định hỡnh núng chảy ở 269-270C, điểm núng chảy so với chất mẫu khụng thay đổi. Quan sỏt trờn cỏc phổ 13

C-NMR và DEPT thấy cú 35 tớn hiệu của nguyờn tử cacbon, trong đú cú 7 nguyờn tử cacbon gắn với oxy đặc trưng cho phần đường (nằm trong vựng 61,20 đến 100,8 ppm), cú 2 tớn hiệu ở 140,6 và 121,3ppm thuộc về một liờn kết olefin. Cỏc phổ IR và 1

H-NMR đều thấy cú mặt của một liờn kết đụi (1640cm-

1, H-6 ở 5,30ppm) và hấp thụ của nhiều nhúm hyđroxyl (3390cm-1). Trong phổ

H-NMR cũng quan sỏt thấy proton đường xuất hiện ở dạng doublet tại 4,32ppm, cú J=7,8Hz và C-1’ tương ứng là 100,9 ppm.

Số liệu cỏc phổ IR, MS, 1

H- và 13C-NMR thu được cho phộp nghĩ đến cấu trỳc của một hợp chất glucosit cú cụng thức C35H60O6. Những điểm trỡnh

Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn

đó cho phộp khẳng định CBH70 là -sitosterol-3-O--D-glucopyranosit hay daucosterol. Số liệu phổ 13C NMR của hợp chất CBH70 ở bảng 3.2

H3C CH3 CH3 CH3 CH3 CH3 O O HO H OH H H H OH H HO 1 3 5 7 9 10 11 13 15 17 18 19 20 21 22 24 25 26 27 28 29 1' 6' 3' β-sitosterol-3-O-β-D-glucopyranosit

Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn

Bảng 3.2. Số liệu phổ 13

C-NMR (CDCl3, 125Mhz) của β-sitosterol và β-sitosterol-3-O-β-D-glucopyranosit.

STT δC của -Sitosterol (ppm) (CBH20) δC của -Sitosterol-3-O-D- glucopyranosit (ppm) (CBH70) 1 37,28 t 38,39 t 2 31,68 t 28,89 t 3 71,84 d 78,86 d 4 42.35 t 39,49 t 5 140,78 s 140,06 s 6 121,73 d 121,82 d 7 31,90 t 31,62 t 8 31,93 d 33,67 d 9 50,17 d 49,94 d 10 36,52 s 36,98 s 11 21,10 t 20,83 t 12 39,80 t 40,21 t 13 42,32 s 42,05 s 14 56,79 d 56,59 d 15 24,31 t 24,04 t 16 28, 26 t 29,29 t 17 56,09 d 56,59 d 18 11,87 q 11,56 q 19 19,40 q 19,39 q 20 36,16 d 36,43 d 21 18,79 q 18,94 q 22 33,98 t 35,84 t 23 26,13 t 27,97 t 24 45,87 d 47,94 d 25 29,19 d 28,61 d

Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn 42 STT (CBH20) glucopyranosit (ppm) (CBH70) 26 19,05 q 20,66 q 27 19,82 d 18,94 d 28 23,10 t 23,98 t 29 11,99 q 11,81 q 1’ 100,85 d 2’ 73,29 d 3’ 75,58 d 4’ 69,61 d 5’ 76,19 d 6’ 61,52 t

Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn

3.2.4. Hợp chất CBH28

Sau khi đó thu được chất rắn CBH20 tiếp tục rửa cột bằng hệ dung mụi n-hexan-etylaxetat (20:1) thu được 40mg chất rắn vụ định hỡnh cú Rf= 0,67 trong hệ dung mụi n-hexan - etylaxetat (7:1) , núng chảy ở 640C.

Quan sỏt trờn phổ 1

H-NMR của chất CBH28 cho thấy tớn hiệu của nhúm CH3 ở độ chuyển dịch húa học 0,88ppm tương ứng với 3 proton. Tớn hiệu ở 4,14ppm dạng muntiplet tương ứng với 2 proton của nhúm CH2 liờn kết với oxi trong nhúm -COO-CH2- . Proton của nhúm OH cho tớn hiệu ở 2,35ppm. Đường tớch phõn cũn cho thấy tớn hiệu của 24 proton ở 1,25ppm và 10 proton ở 1,61ppm đều là cỏc tớn hiệu của nhúm CH2. Như vậy tổng cộng cú 42 proton trong phõn tử

CBH28.

Sơ bộ chỳng tụi quy kết cụng thức của chất CBH28 là một este cú CTPT C20H42O2.

Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn

Hỡnh 3.6. Phổ 1H–NMR của CBH28

3.2.5. Hợp chất CBD1 (onitin)

Chỳng tụi đưa cặn chiết được bằng diclometan lờn cột sắc kớ với chất hấp phụ silicagel và được rửa giải bằng hệ dung mụi clorofom – Metanol tỉ lệ (99:1) thu được chất vụ định hỡnh, đem kết tinh lại trong etylaxetat được tinh thể khụng màu, hỡnh kim, cú khối lượng 30,5mg, Rf= 0,58 trong hệ dung mụi chlorofom - metanol (9:1).

Phõn tớch phổ 1

H-NMR và phổ 13C-NMR nhận thấy cú cỏc đặc điểm sau: Trong phõn tử của chất CBD1 cú 15 nguyờn tử cacbon trong đú cú 8 cacbon bậc 4, cú 3 nhúm metylen và 4 nhúm CH3. Trong số cacbon bậc 4 cú một nguyờn tử cộng hưởng ở trường yếu δC ở 214,74ppm đặc trưng cho cacbon trong nhúm C=O. Cú 6 nguyờn tử cacbon đặc trưng cho cacbon của vũng thơm cộng hưởng ở vựng trường yếu với cỏc độ chuyển dịch húa học δC tương ứng bằng 151,44ppm (C-4), 131,94ppm (C-5), 138,57ppm (C-6), 132,78ppm (C-7), 137,78ppm (C-8) và 130,14ppm (C-9). Cú 1 nhúm CH2 cho tớn hiệu δC ở 61,87ppm đặc trưng cho cacbon liờn kết với oxi trong cỏc ancol. Phổ HSQC cho biết (2H) tương ứng trong nhúm này cho δH ở 3,60ppm (2H) và tương tỏc spin-spin J=8Hz. Cú 1 nhúm CH2 cộng hưởng ở trường mạnh hơn với δC bằng 33,45ppm và δH tương ứng bằng 3,00ppm (2H) với J=8Hz cho thấy đõy là nhúm CH2 đứng ngay cạnh nhúm CH2 liờn kết với OH, cũn nhúm CH2 thứ 3 cũng cộng hưởng ở vựng trường mạnh δC

bằng 39,58ppm và δH tương ứng bằng 2,82ppm (2H) cú dạng singlet chứng tỏ đú là 2 nguyờn tử hiđro tương đương nhau và đứng cạnh cỏc nguyờn tử cacbon bậc 4.

Trong số 4 nhúm CH3 cú 2 nhúm CH3 tương đương nhau với δH tương ứng bằng 1,18ppm (6H) cho tương tỏc xa với C1, C2, C3 và δC tương ứng bằng

Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn 50 13,02ppm và 13,34ppm với cỏc δH tương ứng bằng 2,33ppm (3H,s) và 2,58ppm (3H, s). Bảng 3.3. Số liệu phổ NMR của chất CBD1 Onitin [25] ACD Chất CBD1 Số TT C δH (ppm) δC (ppm) δH (ppm) δC (ppm) δH (ppm) δC (ppm) 1 211,4s 213,57 214,74 s 2 44,8s 43,43 46,0 s 3 2,76 38,3 t 3,01 39,78 2,82 s 39,58 t 4 149,9s 150,32 151,44s 5 130,1s 134,43 131,94s 6 136,9s 138,29 138,57s 7 130,5s 133,18 132,78s 8 136,9s 131,95 138,57s 9 127,9s 137,37 130,14s 10 1,09 (3H,s) 25,4q 1,20 25,50 1,18 (3H,s) 25,94 q 11 1,09 (3H,s) 1,20 25,50 1,18 (3H,s) 25,94 q 12 2,24 (3H,s) 12,7q 2,11 11,99 2,33 (3H,s) 13,34q 13 2,50 (3H,s) 12,6q 2,56 13,93 2,58 (3H,s) 13,02 q 14 2,83 32,6t 3,01 33,03 3,00 (2H,J=8Hz) 33,45t 15 3,42 59,9t 3,83 61,13 3,60 (2H,J=8Hz) 61,87t

Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn

Dựa trờn cỏc phổ NMR, so sỏnh với cỏc số liệu đó được cụng bố trờn tạp chớ [11][26] và số liệu tớnh toỏn ACD/CNMR, chỳng tụi nhận thấy chất CBD1

tương tự như chất onitin đó được cỏc tỏc giả cụng bố vỡ vậy cú thể quy kết chất

CBD1 là một serquytecpen cú cụng thức phõn tử C15H20O3 với cụng thức cấu tạo tương ứng và tờn gọi thụng thường là onitin.

O CH3 CH3 CH3 OH H3C 1 2 3 9 4 8 5 6 7 10 11 12 13 14 HO 15 Onitin Hỡnh 3.7. Phổ 1H–NMR của CBD1

Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn

3.2.6. Hợp chất CBD21

Tiếp tục rửa giải cột bằng hệ dung mụi diclometan-metanol (30:1) chỳng tụi phõn lập được một lượng nhỏ hợp chất kớ hiệu là CBD21, đú là chất rắn kết tinh màu trắng, tinh thể hỡnh kim .

Phổ 1H-NMR của chất CBD21 cho biết trong phõn tử cú 3H cộng hưởng ở 6,96ppm, 7,58ppm và 7,59ppm và 3H khỏc cộng hưởng ở 3,96ppm là pic proton của nhúm metoxy, 4,11ppm và 4,13ppm. Hỡnh dạng phổ 1

H-NMR cho thấy tương tự phổ của axit protocatechuic. Vỡ lượng chất quỏ ớt khụng cho phộp chỳng tụi ghi phổ 13C-NMR và cỏc phổ khỏc, nhưng nhỡn hỡnh dạng phổ cho phộp nghĩ đến chất CBD21 cú thể là 3,4-dihydroxybenzoic hay axit protocatechuic hoặc cú thể là axit 3-hidroxy-4-metoxybenzoic hoặc

Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn

KẾT LUẬN

Qua quỏ trỡnh nghiờn cứu húa thực vật thõn cõy cẩu tớch (Cibotium Barometz) ở Tuyờn Quang, chỳng tụi rỳt ra được những kết luận chớnh như sau:

1. Đó thu thập được mẫu nghiờn cứu thõn cõy cẩu tớch ở Tuyờn Quang và xỏc định tờn khoa học của nú là (Cibotium Barometz).

2. Kết quả phõn tớch định tớnh thõn cõy cẩu tớch (Cibotium Barometz) ở Tuyờn Quang cho biết trong thõn cõy cẩu tớch ở vựng này cú cỏc lớp chất cỏc axit bộo, sterol, saponin và tannin.

3. Từ dịch chiết metanol của thõn cẩu tớch (Cibotium Barometz) bằng phương phỏp sắc ký cột, kết hợp với phương phỏp tinh chế kết tinh lại, đó phõn lập và cho biết cấu trỳc húa học một số hợp chất và nhận dạng đú là: axit palmitic; axit octadec-11-en-oic; axit nonacosylic; β-sitosterol (CBH20); (CBH28); β- sitosterol-3-O-β-D-glucopyranosit (CBH70); onitin (CBD1) và một chất (CBD21) mà chỳng tụi dự đoỏn cú thể là axit protocatechuic.

Trong số bảy hợp chất thu được, hợp chất axit axit octadec-11-en-oic; este cú cụng thức phõn tử C20H42O2 (CBH28) được phỏt hiện lần đầu tiờn từ cõy cẩu tớch. Điều đỏng quan tõm là trong cỏc hợp chất đó phõn lập và nhận dạng được, hợp chất onitin cú độc tớnh thấp, khỏ an toàn khi uống, cú hoạt tớnh chống co thắt như papaverine.

Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn

Tài liệu tham khảo bằng tiếng Việt

[1] Trần Ngọc Chấn (1983), Chữa bệnh cấp cứu và cấp tớnh thụng thường bằng thuốc nam, NXB Y học, trang (191-192).

[2] Nguyễn Văn Đàn, Nguyễn Viết Tựu (1985), Phương phỏp nghiờn cứu cõy thuốc. NX.B Y Học chi nhỏnh thành phố Hồ Chớ Minh, tr.315-325.

[3] Hội đồng Dược điển Việt Nam (1978), Dược liệu Việt Nam, NXB Y học, tr.104-105.

[4] Đỗ Tất Lợi (2005), Những cõy thuốc và vị thuốc Việt Nam, NXB Y học, tr.490. [5] TS. Nguyễn Đức Quang (2010), Mún ăn – Bài thuốc cẩu tớch, Sức khỏe và

đời sống, địa chỉ: http://suckhoedoisong.vn/2010121004014454p44c60/mon - an--bai-thuoc-tu-cau-tich.htm.

[6] Nguyễn Văn Tập, Ngụ Văn Trại, Phạm Thanh Huyền, Lờ Thanh Sơn, Ngụ Đức Phương, Cự Hải Long, Phan Văn Đệ, Tạ Ngọc Tuấn, Hồ Đại Hưng, Nguyễn Duy Thuần (2006), Nghiờn cứu phỏt triển dược liệu và Đụng dược ở Việt Nam, NXB Khoa học và kỹ thuật, Tr 20.

Tài liệu tham khảo tiếng nƣớc ngoài

[7] Becker R (1984), The identification of Hawaiian tree ferns of the genus

Cibotium. Am Fern J, 74, 97-100.

[8] Cheng QH, Yang ZL, Hu YM (2003), Studies on the chemical constituents of Rhizoma Cibotii. Progress in Pharmaceutical Sciences, 27, 298-299. [9] Chih-Chun Wen, Lie-Fen Shyur, Jia-Tsrong Jan, Po-Huang Liang, Chih-

Jung Kuo,Palanisamy Arulselvan, Jin-Bin Wu, Sheng-Chu Kuo, Ning-Sun Yang (2011), Traditional Chinese medicine herbal extracts of Cibotium barometz, Gentiana scabra, Dioscorea batatas, Cassia tora, and Taxillus

chinensis inhibit SARS-CoV replication, Journal of Traditional and

Thu nhận cỏc dịch chiết