Mẫu nghiờn cứu thõn cõy cẩu tớch dạng tươi, mới thu hỏi, cạo hết lụng màu vàng, thỏi lỏt mỏng từ 0,5x2cm, sau đú sấy khụ đem nghiền nhỏ rồi ngõm, chiết kiệt với metanol ở nhiệt độ phũng cho đến khi nhạt màu. Dịch chiết được cất loại dung mụi bằng mỏy cất quay ở nhiệt độ (t0
<600C) và ỏp suất giảm. Cặn dịch chiết metanol hũa với nước và chiết lần lượt với n-hexan, điclometan, etylaxetat, thu được cỏc cặn chiết tương ứng, sau khi đuổi kiệt dung mụi cho cỏc cặn tương ứng là n–hexan (CBH), điclometan (CBD), etylaxetat (CBE) và cặn metanol (CBM). Việc thu nhận cỏc dịch chiết từ cõy cẩu tớch (Cibotium Barometz)theo sơ đồ 2.1.
Cỏc phõn đoạn dịch chiết theo sơ đồ 2.1 được lọc qua giấy lọc rồi cất kiệt dung mụi nhiệt độ t0
<600C dưới ỏp suất giảm, cặn được sấy khụ và cõn đến khối lượng khụng đổi. Như vậy, từ cõy cẩu tớch (Cibotium Barometz) thu được 4 loại cặn chiết được ký hiệu lần lượt là: n–hexan (CBH), điclometan (CBD), etylaxetat (CBE) và cặn metanol (CBM). Kết quả thu nhận cỏc dịch chiết từ cõy cẩu tớch ở huyện Yờn Sơn, tỉnh Tuyờn Quang được nờu trong bảng 2.2.
Bảng 2.2. Khối lƣợng cỏc cặn chiết thu đƣợc từ cõy cẩu tớch
Mẫu thu vào thỏng
03/2012
Khối lượng
mẫu khụ (g) metanol tổng (g) Khối lượng cặn Khối lượng cặn chiết thu được (g) 151,2g
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn
26
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn
27
Sơ đồ 2.1.Ngõm chiết mẫu cõy cẩu tớch (Cibotium Barometz)
2.3.2. Khảo sỏt định tớnh cỏc dịch chiết
2.3.2.1. Phỏt hiện cỏc hợp chất sterol
Lấy 0,01g cặn của cỏc phõn đoạn, thờm 2ml dung dịch NaOH 10% đun cỏch thủy đến khụ. Hoà tan cặn trong 3ml clorofom - lấy dịch clorofom để làm phản ứng định tớnh cỏc sterol và thuốc thử Lieberman - Bourchardt (gồm hỗn
1. 5x7 lit MeOH
1. + H2O
2. 5x(1 lit) n-Hexan
5x(1 lit) CH2Cl2
5x(1 lit) EtOAc
Mẫu cõy cẩu tớch khụ 4500 g Cặn MeOH 932,4 g Dịch cỏi Cặn n-Hexan 65,2g (CBH) Đuổi dung mụi Dịch cỏi Đuổi dung mụi Cặn CH2Cl2 17,0g (CBD) Đuổi dung mụi Dịch cỏi Cặn EtOAc 69g (CBE)
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn
28
giọt H2SO4 đậm đặc). Lấy 1ml dịch clorofom rồi thờm 1 giọt thuốc thử, dung dịch xuất hiện màu xanh trong 1 thời gian là phản ứng dương tớnh.
2.3.2.2. Phỏt hiện cỏc ancaloit
Lấy 0.01g cặn cỏc phõn đoạn, thờm 5ml HCl, khuấy đều, lọc qua giấy lọc, lấy vào 3 ống nghiệm, mỗi ống 1ml nước lọc axit.
Ống (1): 1 - 2 giọt dung dịch silicostungtic axit 5%, nếu cú tủa trắng và nhiều là phản ứng dương tớnh.
Ống (2): 1 - 2 giọt thuốc thử Dragendorff , nếu xuất hiện màu da cam là phản ứng dương tớnh.
Ống (3): 3 - 5 giọt thuốc thử Mayer, nếu xuất hiện tủa trắng là phản ứng
dương tớnh.
2.3.2.3. Phỏt hiện cỏc flavonoit
Lấy 0,01g cặn của cỏc phõn đoạn, thờm 10ml metanol, đun núng cho tan và lọc qua giấy lọc. Lấy 2ml nước lọc vào ống nghiệm, thờm một ớt bột magiờ (Mg) hoặc Zn, sau đú cho vào 5 giọt HCl đậm đặc, đun trong bỡnh cỏch thuỷ vài phỳt. Dung dịch xuất hiện màu đỏ, hoặc màu hồng là phản ứng dương tớnh với cỏc flavonoit.
2.3.2.4. Phỏt hiện cỏc cumarin
Dịch để thử định tớnh được chuẩn bị như mục 2.3.2.1. Lấy vào 2 ống nghiệm, mỗi ống 2 ml dịch thử cho vào một trong 2 ống đú 0,5 ml dung dịch NaOH 10%. Đun cỏch thuỷ cả hai ống trờn đến sụi, để nguội rồi cho thờm 4 ml nước cất vào mỗi ống. Nếu chất lỏng ở ống cú kiềm trong hơn ở ống khụng kiềm cú thể xem là phản ứng dương tớnh, nếu đem axit hoỏ ống cú kiềm bằng một vài giọt HCl đậm đặc sẽ làm cho dịch đang trong vẩn đục và màu vàng xuất hiện cú thể tạo ra tủa là phản ứng dương tớnh.
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn
29
Ngoài ra, cú thể làm phản ứng diazo hoỏ với axit sulfanilic trong mụi trường axit, nếu cho màu da cam đến cam nhạt, cho kết quả dương tớnh đối với cumarin.
2.3.2.5. Định tớnh cỏc glucosit tim
Chuẩn bị dịch thử định tớnh cũng làm như mục 2.3.2.1.
Phản ứng Legal: Cho vào ống nghiệm 0,5ml dịch thử, thờm vào 1 giọt dung dịch natri prussiat 0,5% và 2 giọt NaOH 10% nếu xuất hiện màu đỏ là phản ứng dương tớnh với vũng butenolit.
Phản ứng Keller - Kilian: Thuốc thử gồm 2 dung dịch. Dung dịch 1: 100ml axit axetic loóng + 1ml FeCl3 5% Dung dịch 2: 100ml axit H2SO4 đậm đặc + 1ml FeCl3 5%
Cỏch tiến hành: Lấy 0,01g cặn cỏc dịch chiết cho vào ống nghiệm thờm vào 1ml dung dịch 1, lắc đều cho tan hết, nghiờng ống nghiệm và cho từ từ 1ml dung dịch 2 theo thành ống nghiệm, quan sỏt sự xuất hiện của màu đỏ hay nõu đỏ, giữa hai lớp chất lỏng. Nếu khụng xuất hiện màu là phản ứng õm tớnh với cỏc glucosit tim.
2.3.2.6. Định tớnh cỏc saponin
Chuẩn bị dịch thử như ở mục 2.3.2.1. lấy 2 ống nghiệm mỗi ống cho 2ml dịch thử. Ống 1 cho 1ml HCl loóng, ống 2 cho 1ml NaOH loóng rồi bịt miệng ống nghiệm, lắc trong vũng 5 phỳt theo chiều dọc, quan sỏt sự xuất hiện và mức độ bền vững của bọt. Nếu bọt cao quỏ 3 - 4cm và bền trờn 15 phỳt là phản ứng dương tớnh.
2.3.2.7. Định tớnh cỏc tanin
Cõn lấy 0,01g cặn chiết, thờm 10ml metanol nước cất, khuấy đều rồi nhỏ 2-3 giọt FeCl3 5%, nếu cú màu xanh hoặc lục hoặc đen là phản ứng dương tớnh.
Kết quả phõn tớch định tớnh cỏc nhúm chất trong cõy cẩu tớch, được nờu trong bảng 2.3.
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn 30 STT Nhúm chất Thuốc thử Hiện tƣợng Cặn tổng 1 Sterol Lieberman- Bourchardt Màu xanh Màu vàng +
2 Ancaloit Dragendorff Vàng da cam -
3 Flavonoit Zn(Mg) + HCl Dung dịch nhạt màu dẫn đến màu đỏ nhạt + H2SO4 đặc Hồng nhạt + NaOH đặc Vàng + FeCl3 5% Xanh thẫm +
4 Cumarin Phản ứng tạo kết tủa
bụng Cú kết tủa -
5 Glucosit trợ tim
FeCl3 trong
CH3COOH +H2SO4đ Vàng nõu rừ + 6 Saponin Phản ứng tạo bọt Bọt bền trong NaOH +
7 Tanin FeCl3 Màu xanh +
Chỳ giải : + : Phản ứng dương tớnh ─ : Phản ứng õm tớnh
2.4. Phõn lập và tinh chế cỏc chất
