Hợp chất CBD1

Rửa giải hệ bằng dung mụi clorofom – metanol tỉ lệ (99:1) được chất vụ định hỡnh, đem kết tinh lại trong etylaxetat được tinh thể khụng màu, hỡnh kim, cú khối lượng 30,5mg, nhiệt độ núng chảy 2030

C, Rf=0,72 trong hệ dung mụi clorofom – metanol (9:1). Bảng 2.4. Số liệu phổ 1 H-NMR, phổ ¹³C-NMR Số TT C δ_H (ppm), J (HZ), H→C δC (ppm) 1 214,74 s 2 46,0 s 3 2,82 s 39,58 t

Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn 34 5 131,94s 6 138,57s 7 132,78s 8 138,57s 9 130,14s 10 1,18 (3H,s) 25,94 q 11 1,18 (3H,s) 25,94 q 12 2,33 (3H,s) 13,34q 13 2,58 (3H,s) 13,02 q 14 3,00 (2H,J=8Hz) 33,45t 15 3,60 (2H,J=8Hz) 61,87t 2.4.2.2. Hợp chất CBD21

Chất CBD21 thu được khi rửa giải cột bằng hệ dung mụi dichlometan- metanol (30:1) là chất rắn tinh thể hỡnh kim khụng đủ để xỏc định nhiệt độ núng chảy. Khi ghi phổ ¹H-NMR cho thấy cỏc tớn hiệu của (3H) ở cỏc độ chuyển dịch húa học bằng 6,96ppm, 7,26ppm và 7,56ppm và (3H) khỏc cộng hưởng ở 3,96ppm, 4,11ppm và 4,19ppm.

Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn

Chƣơng 3

THẢO LUẬN KẾT QUẢ

3.1. Nguyờn tắc chung

Để phõn lập được cỏc hợp chất trong bất kỳ một thực vật nào mà khụng làm ảnh hưởng tới thành phần hoỏ học cú trong nú thỡ trước khi ngõm chiết bằng dung mụi hữu cơ, mẫu thực vật phải được đưa đi khử men ngay sau khi thu mẫu và sấy khụ ở điều kiện thớch hợp. Về nguyờn tắc việc ngõm chiết mẫu thực vật cú thể tiến hành theo 2 cỏch phổ biến sau:

1. Chiết và phõn lập cỏc hợp chất từ mẫu thực vật bằng cỏc loại dung mụi cú độ phõn cực tăng dần: Ete dầu hoả hoặc n-hexan, điclometan, etyl axetat, metanol hoặc etanol v.v....

2. Chiết tổng bằng cỏc ancol (metanol, etanol) hay hệ dung mụi ancol- nước. Sau đú tỏch loại cỏc hợp chất bằng cỏc loại dung mụi cú độ phõn cực tăng dần như phương phỏp 1 để thu được cỏc dịch chiết cú chứa cỏc hợp chất cú độ phõn cực tương đối giống nhau.

Quỏ trỡnh ngõm chiết thõn cõy cẩu tớch (Cibotium Barometz) được thực hiện theo phương ỏn 2 (Sơ đồ 2.1).

3.2. Phõn lập và nhận dạng cỏc hợp chất cú trong cỏc dịch chiết khỏc nhau của cõy cẩu tớch của cõy cẩu tớch

Cỏc dịch chiết từ thõn cõy cẩu tớch (Cibotium Barometz) đều là những hỗn hợp phức tạp chứa cỏc hợp chất khỏc nhau. Để phõn lập từng chất ra khỏi hỗn hợp, đó sử dụng cỏc phương phỏp sắc ký cột như: Cột nhồi silicagel, với cỏc hệ dung mụi rửa giải thớch hợp và thường phải lặp lại nhiều lần. Việc tinh chế cỏc chất thường dựng phương phỏp kết tinh lại trong dung mụi hoặc hệ dung mụi thớch hợp, nhờ đú sẽ thu được cỏc đơn chất cú độ tinh khiết cao, đỏp ứng cỏc nhu cầu để khảo sỏt tớnh chất húa lý và quang phổ của chỳng. Đú là những yếu

Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn

chất đó phõn lập được từ cỏc đối tượng nghiờn cứu núi trờn.

Việc phõn lập cỏc thành phần húa học của cõy cẩu tớch (Cibotium Barometz) đó thu được chất rắn CBH7 gồm cỏc axit bộo, 4 hợp chất tinh khiết đú là: β-sitosterol (CBH20), (CBH 28), β-sitosterol -D-glucopyranosit (CBH70), onitin (CBD1) và CBD21.

3.2.1. Chất rắn CBH7

Rửa giải cột bằng hệ dung mụi n-hexan-etylaxetat (50:1) thu được khối chất rắn vụ định hỡnh, tiếp tục phõn lập lại khối chất rắn này trờn cột với chất hấp phụ silicagel lần nữa thu được 500 mg chất rắn vụ định hỡnh cho Rf trong cỏc hệ dung mụi khỏc nhau xấp xỉ nhau.

Để xỏc định cỏc axit bộo cú trong CBH7 chỳng tụi dựng phương phỏp GC và thư viện dữ liệu phổ của phũng thớ nghiệm cho biết chất CBH7 gồm 3 axit bộo đú là octacosylic C28H56O2 chiếm 48,44%, axit hexadecanoic (axit palmitic) chiếm 40,92% và axit octadecenoic chiếm 10,65%.

Bảng 3.1- Kết quả phõn tớch thành phần axit bộo trong CBH7

TT Thời gian Axit bộo Tờn khoa học Hàm lƣợng %

1 15,86 16: 0 Hexadecanoic acid 40.92 2 17.30 18:1(n-7) Octadecenoic acid 10.64 3 67.06 28: 0 Octacosylic acid 48.44

Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn

Hỡnh 3.1. Phổ phõn tớch mỏy GC

3.2.2. Hợp chất CBH20 (β-sitosterol)

Khi tiếp tục rửa giải cặn của dịch chiết n-hexan trờn sắc ký cột silicagel bằng hệ dung mụi n-hexan: etylaxetat (90:10) chỳng tụi thu được 155mg chất

CBH20.

Chất CBH20 là những tinh thể hỡnh kim, khụng màu, điểm núng chảy ở 139-141⁰C. Khi trộn lẫn với chất chuẩn cho một hỗn hợp cú nhiệt độ núng chảy khụng thay đổi.

Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn

nghĩa khối lượng phõn tử bằng 414 đvC sẽ ứng với cụng thức phõn tử C₂₉H₅₀O. Trong phõn tử cú một nhúm OH thể hiện ở phổ FT-IR với võn hấp thụ rộng ở ν = 3380cm-1

. Mặt khỏc phổ 1

H-NMR cho δ = 3,52 ppm đặc trưng cho proton trong nhúm CH liờn kết với nhúm hidroxyl.

Phổ 13

C-NMR cũng nhận thấy δ = 71,7 ppm đặc trưng cho cacbon liờn kết trực tiếp với oxy của nhúm hidroxyl.

Trong phõn tử cũn cú một nối đụi thể hiện bởi cỏc đặc trưng ở phổ FT-IR cú võn ở 3010 cm-1

đặc trưng cho dao động hoỏ trị của liờn kết C-H và võn ở 1650 cm^-1đặc trưng cho dao động hoỏ trị của liờn kết đụi C=C. Trong phổ 1

H- NMR cũng nhận được tớn hiệu δ = 5,35 ppm đặc trưng cho H trong liờn kết =C- H và tớn hiệu của 2 cacbon mang nối đụi với δ= 140,7 ppm và δ= 121,5 ppm từ đú cú thể quy kết hợp chất PH-1 cú một nối đụi giữa vị trớ C-5 và C-6.

So sỏnh phổ 1

H-NMR và phổ ¹³C-NMR của chất CBH20 với phổ của β- Sitosterol thấy hoàn toàn tương tự nhau (bảng 3.1). Từ cỏc kết quả phõn tớch thành phần hoỏ học, tớnh chất vật lý, tớnh chất quang phổ nhất là dựa trờn cơ sở so sỏnh cỏc số liệu phổ của chất CBH20 với phổ của chất β-sitosterol hoàn toàn cú thể cho phộp quy kết chất CBH20 đó phõn lập được từ cõy cẩu tớch là β-sitosterol.

Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn 39 H₃C CH₃ CH₃ H₃C CH₃ CH₃ HO β-Sitosterol 3.2.3. Chất CBH70 (β-Sitosterol-3-O-β-D-glucopyranosit)

Tiếp tục rửa giải cột silicagen để phõn chia cặn thụ của dịch chiết bằng n-hexan bằng hệ dung mụi chlorofom : metanol tỉ lệ (9:1) thu được 105mg chất rắn vụ định hỡnh, cú R_f = 0,53 trong hệ dung mụi clorofom – metanol (70:10) kớ hiệu là chất CBH70.

Hợp chất CBH70 thu được dưới dạng chất rắn vụ định hỡnh núng chảy ở 269-270C, điểm núng chảy so với chất mẫu khụng thay đổi. Quan sỏt trờn cỏc phổ 13

C-NMR và DEPT thấy cú 35 tớn hiệu của nguyờn tử cacbon, trong đú cú 7 nguyờn tử cacbon gắn với oxy đặc trưng cho phần đường (nằm trong vựng 61,20 đến 100,8 ppm), cú 2 tớn hiệu ở 140,6 và 121,3ppm thuộc về một liờn kết olefin. Cỏc phổ IR và 1

H-NMR đều thấy cú mặt của một liờn kết đụi (1640cm^-

1, H-6 ở 5,30ppm) và hấp thụ của nhiều nhúm hyđroxyl (3390cm^-1). Trong phổ

H-NMR cũng quan sỏt thấy proton đường xuất hiện ở dạng doublet tại 4,32ppm, cú J=7,8Hz và C-1’ tương ứng là 100,9 ppm.

Số liệu cỏc phổ IR, MS, 1

H- và ¹³C-NMR thu được cho phộp nghĩ đến cấu trỳc của một hợp chất glucosit cú cụng thức C₃₅H60O6. Những điểm trỡnh

Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn

đó cho phộp khẳng định CBH70 là -sitosterol-3-O--D-glucopyranosit hay daucosterol. Số liệu phổ 13C NMR của hợp chất CBH70 ở bảng 3.2

H₃C CH₃ CH₃ CH₃ CH₃ CH₃ O O HO H OH H H H OH H HO ¹ 3 5 ⁷ 9 10 11 13 15 17 18 19 ²⁰ 21 ₂₂ 24 25 26 27 28 29 1^' 6' 3' β-sitosterol-3-O-β-D-glucopyranosit

Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn

Bảng 3.2. Số liệu phổ 13

C-NMR (CDCl₃, 125Mhz) của β-sitosterol và β-sitosterol-3-O-β-D-glucopyranosit.

STT δ_C của -Sitosterol (ppm) (CBH20) δ_C của -Sitosterol-3-O-D- glucopyranosit (ppm) (CBH70) 1 37,28 t 38,39 t 2 31,68 t 28,89 t 3 71,84 d 78,86 _d 4 42.35 t 39,49 t 5 140,78 s 140,06 s 6 121,73 d 121,82 d 7 31,90 t 31,62 t 8 31,93 d 33,67 d 9 50,17 d 49,94 d 10 36,52 s 36,98 s 11 21,10 t 20,83 _t 12 39,80 t 40,21 t 13 42,32 s 42,05 s 14 56,79 d 56,59 d 15 24,31 t 24,04 _t 16 28, 26 t 29,29 t 17 56,09 d 56,59 d 18 11,87 q 11,56 q 19 19,40 q 19,39 _q 20 36,16 d 36,43 d 21 18,79 q 18,94 q 22 33,98 t 35,84 t 23 26,13 t 27,97 _t 24 45,87 d 47,94 d 25 29,19 d 28,61 d

Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn 42 STT (CBH20) glucopyranosit (ppm) (CBH70) 26 19,05 q 20,66 _q 27 19,82 d 18,94 d 28 23,10 t 23,98 t 29 11,99 q 11,81 q 1^’ 100,85 d 2^’ 73,29 _d 3^’ 75,58 d 4^’ 69,61 d 5^’ 76,19 _d 6^’ 61,52 t

Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn

3.2.4. Hợp chất CBH28

Sau khi đó thu được chất rắn CBH20 tiếp tục rửa cột bằng hệ dung mụi n-hexan-etylaxetat (20:1) thu được 40mg chất rắn vụ định hỡnh cú R_f= 0,67 trong hệ dung mụi n-hexan - etylaxetat (7:1) , núng chảy ở 64⁰C.

Quan sỏt trờn phổ 1

H-NMR của chất CBH28 cho thấy tớn hiệu của nhúm CH3 ở độ chuyển dịch húa học 0,88ppm tương ứng với 3 proton. Tớn hiệu ở 4,14ppm dạng muntiplet tương ứng với 2 proton của nhúm CH₂ liờn kết với oxi trong nhúm -COO-CH2- . Proton của nhúm OH cho tớn hiệu ở 2,35ppm. Đường tớch phõn cũn cho thấy tớn hiệu của 24 proton ở 1,25ppm và 10 proton ở 1,61ppm đều là cỏc tớn hiệu của nhúm CH2. Như vậy tổng cộng cú 42 proton trong phõn tử

CBH28.

Sơ bộ chỳng tụi quy kết cụng thức của chất CBH28 là một este cú CTPT C20H42O2.

Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn

Hỡnh 3.6. Phổ ¹H–NMR của CBH28

3.2.5. Hợp chất CBD1 (onitin)

Chỳng tụi đưa cặn chiết được bằng diclometan lờn cột sắc kớ với chất hấp phụ silicagel và được rửa giải bằng hệ dung mụi clorofom – Metanol tỉ lệ (99:1) thu được chất vụ định hỡnh, đem kết tinh lại trong etylaxetat được tinh thể khụng màu, hỡnh kim, cú khối lượng 30,5mg, R_f= 0,58 trong hệ dung mụi chlorofom - metanol (9:1).

Phõn tớch phổ 1

H-NMR và phổ ¹³C-NMR nhận thấy cú cỏc đặc điểm sau: Trong phõn tử của chất CBD1 cú 15 nguyờn tử cacbon trong đú cú 8 cacbon bậc 4, cú 3 nhúm metylen và 4 nhúm CH3. Trong số cacbon bậc 4 cú một nguyờn tử cộng hưởng ở trường yếu δ_C ở 214,74ppm đặc trưng cho cacbon trong nhúm C=O. Cú 6 nguyờn tử cacbon đặc trưng cho cacbon của vũng thơm cộng hưởng ở vựng trường yếu với cỏc độ chuyển dịch húa học δC tương ứng bằng 151,44ppm (C-4), 131,94ppm (C-5), 138,57ppm (C-6), 132,78ppm (C-7), 137,78ppm (C-8) và 130,14ppm (C-9). Cú 1 nhúm CH₂ cho tớn hiệu δ_C ở 61,87ppm đặc trưng cho cacbon liờn kết với oxi trong cỏc ancol. Phổ HSQC cho biết (2H) tương ứng trong nhúm này cho δH ở 3,60ppm (2H) và tương tỏc spin-spin J=8Hz. Cú 1 nhúm CH2 cộng hưởng ở trường mạnh hơn với δC bằng 33,45ppm và δH tương ứng bằng 3,00ppm (2H) với J=8Hz cho thấy đõy là nhúm CH₂ đứng ngay cạnh nhúm CH₂ liờn kết với OH, cũn nhúm CH₂ thứ 3 cũng cộng hưởng ở vựng trường mạnh δC

bằng 39,58ppm và δH tương ứng bằng 2,82ppm (2H) cú dạng singlet chứng tỏ đú là 2 nguyờn tử hiđro tương đương nhau và đứng cạnh cỏc nguyờn tử cacbon bậc 4.

Trong số 4 nhúm CH3 cú 2 nhúm CH3 tương đương nhau với δH tương ứng bằng 1,18ppm (6H) cho tương tỏc xa với C1, C2, C3 và δC tương ứng bằng

Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn 50 13,02ppm và 13,34ppm với cỏc δ_H tương ứng bằng 2,33ppm (3H,s) và 2,58ppm (3H, s). Bảng 3.3. Số liệu phổ NMR của chất CBD1 Onitin [25] ACD Chất CBD1 Số TT C δ_H (ppm) δ_C (ppm) δ_H (ppm) δ_C (ppm) δ_H (ppm) δ_C (ppm) 1 211,4s 213,57 214,74 s 2 44,8s 43,43 46,0 s 3 2,76 38,3 t 3,01 39,78 2,82 s 39,58 t 4 149,9s 150,32 151,44s 5 130,1s 134,43 131,94s 6 136,9s 138,29 138,57s 7 130,5s 133,18 132,78s 8 136,9s 131,95 138,57s 9 127,9s 137,37 130,14s 10 ^1,09 (3H,s) ^25,4q ^1,20 ^25,50 ^{1,18 (3H,s)} ^{25,94 q} 11 ^1,09 (3H,s) ^1,20 ^25,50 ^{1,18 (3H,s)} ^{25,94 q} 12 ^2,24 (3H,s) ^12,7q ^2,11 ^11,99 ^{2,33 (3H,s)} ^13,34q 13 ^2,50 (3H,s) ^12,6q ^2,56 ^13,93 ^{2,58 (3H,s)} ^{13,02 q} 14 2,83 32,6t 3,01 33,03 3,00 (2H,J=8Hz) 33,45t 15 3,42 59,9t 3,83 61,13 3,60 (2H,J=8Hz) 61,87t

Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn

Dựa trờn cỏc phổ NMR, so sỏnh với cỏc số liệu đó được cụng bố trờn tạp chớ [11][26] và số liệu tớnh toỏn ACD/CNMR, chỳng tụi nhận thấy chất CBD1

tương tự như chất onitin đó được cỏc tỏc giả cụng bố vỡ vậy cú thể quy kết chất

CBD1 là một serquytecpen cú cụng thức phõn tử C15H20O3 với cụng thức cấu tạo tương ứng và tờn gọi thụng thường là onitin.

O CH₃ CH₃ CH₃ OH H₃C 1 2 3 9 4 8 5 6 7 ₁₀ 11 12 13 14 HO 15 Onitin Hỡnh 3.7. Phổ ¹H–NMR của CBD1

Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn

3.2.6. Hợp chất CBD21

Tiếp tục rửa giải cột bằng hệ dung mụi diclometan-metanol (30:1) chỳng tụi phõn lập được một lượng nhỏ hợp chất kớ hiệu là CBD21, đú là chất rắn kết tinh màu trắng, tinh thể hỡnh kim .

Phổ ¹H-NMR của chất CBD21 cho biết trong phõn tử cú 3H cộng hưởng ở 6,96ppm, 7,58ppm và 7,59ppm và 3H khỏc cộng hưởng ở 3,96ppm là pic proton của nhúm metoxy, 4,11ppm và 4,13ppm. Hỡnh dạng phổ 1

H-NMR cho thấy tương tự phổ của axit protocatechuic. Vỡ lượng chất quỏ ớt khụng cho

Một phần của tài liệu NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC THÂN CÂY CẨU TÍCH (CIBOTIUM BAROMETZ), HỌ LÔNG CU LI Ở TUYÊN QUANG (Trang 43 -86 )

Chƣơng 3

THẢO LUẬN KẾT QUẢ

Mục lục

Tài liệu bạn tìm kiếm đã sẵn sàng tải về