1.1.4.1. Kớch thớch noón bào phỏt triển đồng loạt bằng sự tỏc động hormone để gõy rụng trứng nhiều
Gõy siờu bài noón hay GRTN là một quỏ trỡnh tỏc động để một lần động dục buồng trứng bũ cú nhiều trứng phỏt triển và rụng đồng thời. Mục đớch của quỏ trỡnh này là thu đƣợc nhiều phụi cú chất lƣợng cao. GRTN là khõu đầu tiờn mang ý nghĩa quyết định đến cỏc khõu về sau của cụng nghệ cấy truyền phụi bao gồm: gội rửa thu hoạch phụi, đỏnh giỏ phõn loại phụi, cấy truyền phụi, đụng lạnh phụi.
Nhiều tỏc giả cho thấy rằng tiềm năng sinh sản của bũ lớn hơn rất nhiều so với khả năng sinh sản thực của chỳng. Theo Erickson (1966) [55] cho biết buồng trứng của bũ cú trờn 70.000 noón bao nguyờn thuỷ cú thể phỏt triển thành tế bào trứng để thụ tinh và tạo phụi.
Mỗi chu kỳ động dục của bũ chỉ cú một trứng chớn và rụng (cỏ biệt cú 2 trứng). Do đặc điểm này cỏc đợt phỏt triển nang cũn đƣợc gọi là cỏc súng nang phỏt triển. Trong mỗi đợt súng nhƣ vậy sự tồn tại của cỏc nang khụng phải nang khống chế dao động từ 5-6 ngày Fortune và cs. 1988 [62]. Riờng nang khống chế cú thể phỏt triển nhanh sau ngày 18 của chu kỳ, tốc độ phỏt triển của nang khống chế vào thời điểm này cú thể đạt 1,6mm một ngày (Fortune và cs.1988) [62], (Savio và cs. 1988) [95].
Trờn cơ sở nghiờn cứu về về quy luật phỏt triển của nang trờn buồng trứng và những hiểu biết hormone điều khiển sinh sản, nhiều cỏc nhà khoa học đó tạo cho trứng rụng đồng loạt trong một chu kỳ và tạo đƣợc nhiều phụi cú chất lƣợng vào thời điểm đƣợc xỏc định bằng kỹ thuật gõy rụng trứng nhiều. Kỹ thuật gõy rụng trứng nhiều đƣợc tiến hành nghiờn cứu khỏ sớm vào những năm đầu thế kỷ 20. gõy rụng trứng nhiều (GRTN) lần đầu tiờn đƣợc nghiờn cứu trờn chuột (Engle, 1927) [57]; trờn bũ và cừu (Cole và Miller.
1933) [46]; (Parker và Hammond, 1940) [87]. Cỏc phƣơng phỏp GRTN trong giai đoạn này bƣớc đầu nghiờn cứu chủ yếu trờn cơ sở về mối tƣơng quan tuyến yờn - buồng trứng và sự phỏt hiện hormone ECG và estrogen ở phụ nữ cú thai và ngựa. Kết quả GRTN ở giai đoạn này cũn rất hạn chế, vỡ vậy tỷ lệ thụ thai sau cấy phụi chỉ đạt từ 2-10%.
Nghiờn cứu của nhiều tỏc giả cho thấy sự rụng trứng chỉ xảy ra ở cỏc nang đó phỏt triển tới độ chớn cần thiết, bao gồm sự tăng tối đa kớch thƣớc nang và xoang chứa dịch nang, và sự chớn noón đƣợc thể hiện qua cỏc hiện tƣợng tan màng nhõn, phõn lập cầu cực 1, và phõn bố thể nhiễm sắc ở giai đoạn metaphase II (M II) (Thibault, 1985) [105], (Blerk Van và Bell, 1986) [44].
Điều kiện cần thiết để cỏc quỏ trỡnh chớn và rụng trứng xảy ra là sự tăng cƣờng phõn tiết LH của tuyến yờn trong mỏu ngoại vi. Sự chớn và rụng trứng chỉ xảy ra sau khi xuất hiện đỉnh LH. Quan sỏt ở bũ cho thấy trong chu kỳ bỡnh thƣờng, sự tan màng nhõn xuất hiện khoảng 5 giờ sau đỉnh LH, sự hỡnh thành nhiễm sắc thể M II xảy ra khoảng 17-22 giờ sau đỉnh LH, và rụng trứng xảy ra 22 giờ sau đỉnh LH (Dieleman 1993) [52]. Vào thời điểm sắp rụng trứng, sự tăng cỏc thể tiếp nhận LH đƣợc quan sỏt thấy trong cỏc nang khống chế sẽ dẫn tới tăng tổng hợp Progesterone và PGF. Cỏc hormone này cú tỏc động gõy sự vỡ nang thụng qua sự kớch thớch hoạt động co cỏc cơ trơn nằm ở lớp màng ngoài buồng trứng (Akamura và cs, 1972) [37]; (Virutamanen, 1972) [101], (Chaning và cs, 1980) [49] hoặc tăng sự tổng hợp cỏc enzyme gõy tan màng nang nhƣ plasmin, hyaluronidaza (Beer, 1975) [43]; (Espey, 1974) [59]. Những nghiờn cứu này gúp phần đƣa ra cỏc chỉ dẫn về vai trũ và phƣơng thức sử dụng LH hoặc HCG trong gõy rụng trứng nhiều. Ngoài ra, đó cú rất nhiều tỏc giả nghiờn cứu về cỏc phƣơng phỏp và sử dụng cỏc loại hormone khỏc nhau để GRTN ở bũ cho phụi.
Theo Elsden và cs. (1974) [56], gõy rụng trứng nhiều bằng PMSG và PGF2 trờn bũ cho kết quả rất tốt. Bũ đƣợc tiờm PMSG vào giữachu kỳỡ động dục với liều 1500 -2000 UI, sau 48h tiờm 2 liều 1,9mg PGF2 cỏch nhau 12 h. Trong tổng số 24 bũ đƣợc tiến hành gõy rụng trứng nhiều cú 18 bũ động dục trong vũng 5 ngày kể từ khi tiờm PGF2. Trong số đú cú 14 bũ động dục vào ngày thứ 2 và 4. Bằng phƣơng phỏp phẫu thuật để đỏnh giỏ kết quả cho thấy rằng cả 24 bũ đều cú phản ứng mạnh và cú số trứng rụng bỡnh quõn là 13,219, trong đú cú 20 bũ cú noón bào khụng rụng bỡnh quõn là 3,3. Thớ nghiệm khỏc trờn 35 bũ với liều 2000 UI, PMSG tỏc dụng vào ngày thứ 16 của chu kỳ động dục, kết quả chỉ cú 24 bũ phỏt hiện cú phản ứng với PMSG bằng phƣơng phỏp khỏm lõm sàng qua trực tràng. Khi mổ khỏm cú 7 bũ trong số 29 bũ khụng rụng trứng và cú u nang buồng trứng. Trờn 17 bũ bỡnh quõn trứng rụng là 8,01,5 cú 4 bũ vẫn cũn noón bào khụng rụng. Một nghiờn cứu nữa đƣợc tiến hành trờn 10 bũ với sự kết hợp cả PMSG và PGF2 đó phối giống trong thời gian động dục. Trong tổng số 141 trứng rụng đó thu đƣợc 97 phụi (đạt tỷ lệ 69% trứng rụng), trong đú cú 88% phụi thụ tinh. Từ những kết quả thu đƣợc tỏc giả cú nhận xột rằng kết hợp PMSG với PGF2 cho kết quả tốt hơn khi dựng một mỡnh PMSG để gõy rụng trứng nhiều trờn bũ. (Boland và cs, 1978) [45], (Chupin và Procureur, 1982) [50], (Newcomb và cs, 1976) [85], cho thấy việc sử dụng ECG để GRTN ở bũ thƣờng kốm theo cỏc hạn chế cú thể ảnh hƣởng õm tớnh lờn kết quả thụ tinh và sự phỏt triển phụi nhƣ thời điểm xuất hiện động dục khụng chớnh xỏc, động dục kộo dài. Trong cỏc trƣờng hợp này tỷ lệ bũ cú phản ứng rụng trứng cao (89% cú phản ứng), nhƣng chỉ cú hơn 44% bũ cú trờn 5 phụi/1 lần, và chỉ cú 25% số phụi đạt tiờu chuẩn tốt. Trong thực tiễn khả năng gõy rụng trứng nhiều lặp lại trờn cựng một cỏ thể cho phụi (Hasler và cs, 1983) [92], đó làm thớ nghiệm so sỏnh kết quả gõy rụng trứng nhiều bằng ECG lặp lại nhiều lần trờn bũ sữa Holstein cho thấy số trứng rụng khụng giảm (10 thể
vàng), nhƣng tỷ lệ thu phụi và tỷ lệ trứng thụ tinh cú thể giảm từ 30-40% ở những lần GRTN lặp lại. (Savage và Maletoft,1984) đó sử dụng Estradiol -17 hoặc GnRH với FSH-P.Với số bũ là 54 đƣợc gõy rụng trứng nhiều từ ngày 10- 12 của chu kỳ động dục với liều 28 FSH-P, mỗi ngày tiờm hai lần với liều giảm dần, trong 4 ngày liờn tục. Sau khi tiờm 48h mỗi bũ đƣợc tiờm 500mg PGF2. Số trứng rụng trung bỡnh là 12,32.3, số trứng đƣợc thụ tinh là 6,35,4 trờn tất cả bũ thớ nghiệm, (Trớch theo Tăng Xuõn Lƣu, 1999) [16].
Theo Boland và cs (1978) [45], thụng bỏo kết quả gõy rụng trứng nhiều trờn 30 bũ cỏi tơ với liều 2500UI PMSG tiờm vào ngày thứ 9-12 của chu kỳ động dục. Sau khi tiờm PMSG 48h, mỗi bũ đƣợc tiờm 1mg Fenprostalene và đó cú 27 bũ đó động dục sau khi tiờm Fenprotalen từ 2-5 ngày. Trung bỡnh số trứng rụng là 11,5 (từ 1-25 trong đú cú 17 bũ cú số trứng rụng lớn hơn 10). Trong số trứng phụi thu đƣợc cú 72% trứng đó thụ tinh và 74% trong số đú phỏt triển bỡnh thƣờng.
Gõy rụng trứng nhiều bằng Norgestomet và FSH đó đƣợc Hill và cs (1986) tiến hành. Thớ nghiệm đƣợc chia thành 5 ụ ký hiệu từ A tới E và Norgestomet đó đƣợc cấy vào cỏc thời gian khỏc nhau của chu kỳ động dục: ngày 0-3 (A); ngày 4-8 (B); ngày 8-11 (C); Ngày 16-20 (D); Cũn FSH (37mg) tiờm vào ngày thứ 7 sau khi cấy Norgestomet với liều giảm dần trong 4 ngày, mỗi ngày 2 lần. Norgestomet đƣợc lấy ra sau khi cấy đƣợc 9 ngày. Nhúm đối chứng (F) cũng đƣợc tiờm 37mg FSH vào ngày thứ 8-13 của chu kỳ động dục. PGF2 liều 25mg đƣợc tiờm cho tất cả bũ thớ nghiệm và đối chứng sau khi tiờm FSH 48h và 60h. Trung bỡnh số trứng rụng và phụi đảm bảo chất lƣợng cho tất cả bũ thớ nghiệm là 10,31.8 và 6,51,9. Cũn cỏc lụ đối chứng là 8,81,4 và 5,41,0 tƣơng ứng. Khụng cú sự khỏc nhau đỏng kể trong cỏc lụ thớ nghiệm từ A tới E. Cỏc tỏc giả đó rỳt ra kết luận rằng dựng Norgestomet kết hợp với FSH để gõy rụng trứng nhiều cho bũ cần quan tõm ngày của chu
kỳ động dục của bũ và đõy là một phƣơng phỏp tốt và cú hiệu quả. Bằng phƣơng phƣơng phỏp này chỳng ta khụng mất nhiều thời gian phỏt hiện động dục và tạo động dục đồng pha đối với bũ cho phụi trong kỹ thuật cấy truyền phụi bũ (Trớch theo Tăng Xuõn Lƣu, 1999) [16].
Gõy rụng trứng nhiều ở bũ bằng Synchromate B và Estradiol, PMSG và PGF2. Kết quả bũ đó động dục sau tiờm 96 h và cú 17,6% số bũ khụng động dục. Số bũ cú thể vàng từ 2-4; 5-10; 11-15 và trờn 15 tƣơng ứng là 3; 6; 2 và 4 con. Sau khi gõy rụng trứng nhiều bằng FSH và Estradiol. Dieleman và cs. (1987) [53] bỏo cỏo kết quả gõy rụng trứng nhiều ở bũ bằng sử dụng PMSG, PGF2 và anti-PMSG. Bỡnh quõn số trứng rụng noón bào tƣơng ứng là 15,72.5 và 15,41,6 cho mỗi bũ thớ nghiệm. Kết quả ở bũ thớ nghiệm cao gấp 2 lần so với bũ đối chứng về số lƣợng trứng rụng và độ tin cậy (P<0,05).
Kim và cộng sự (1987) [74], đó cụng bố kết quả của việc sử dụng PMSG và anti-PMSG. Thớ nghiệm đó tiến hành trờn 80 bũ và chia làm 3 lụ: lụ A: PMSG và anti-PMSG; lụ B: PMSG +monoanti-PMSG và lụ C: FSH tiờm 4 ngày mỗi ngày 2 lần. Bỡnh quõn số thể vàng trờn bũ là:12,4; 11,9 và 4,4, bỡnh quõn noón bào khụng rụng là 1,2; 2,2 và 0,4 tƣơng ứng cho cỏc lụ A; B; C. Số phụi tƣơng ứng cho cỏc loại A, B và C là 8,2 (66,1%); 7,3 (61,3%) và 3,9 (88,6%). Trong đú tỷ lệ phụi cú khả năng cấy trờn cỏc phụi thu đƣợc là 5,9 (71,9%); 5,11 (69,8%); và 3,6 (92,3%) tƣơng ứng cho cỏc lụ A; B; C. Kết quả tƣơng tự (Karaivanov, 1986) [73], về gõy rụng trứng nhiều ở bũ dựng PMSG và anti-PMSG.
Theo Ellington và cs (1987) [55], việc sử dụng Progesterone và PGF trong gõy rụng trứng nhiều để khống chế thời điểm, thời gian và mức độ động dục cú thể đem lại những cải tiến về số trứng rụng và chất lƣợng phụi. Trong trƣờng hợp bũ cho phụi cú hoạt động sinh sản kộm, kết quả gõy rụng trứng nhiều thấp, thỡ việc sử dụng PGF (50mg) tiờm nhiều lần (3 lần, cỏch nhau 6
giờ thay vỡ tiờm 2 lần cỏch nhau 12 giờ) cú thể tăng đỏng kể tỷ lệ động dục (96% so với 86 %), tỷ lệ phụi thụ tinh (62% so với 51%), số phụi tốt thu đƣợc 4 so với 3,8 (Donaldson, 1986) [54].
Estradiol cũng cú ảnh hƣởng quan trọng lờn kết quả gõy rụng trứng nhiều. Bổ sung 20mg estradiol-17 vào ngày thứ 1-2 sau khi xử lý ECG, làm tăng số nang phỏt triển và tăng số trứng thụ tinh. Kết quả sử dụng estradiol-17 bổ sung vào FSH hoặc ECG để gõy rụng trứng nhiều ở bũ Simental đƣợc Broadbent và cs (1995) thụng bỏo gần đõy là 15 thể vàng với số bũ đƣợc xử lý FSH, và 16 thể vàng với bũ đƣợc xử lý ECG (Trớch theo Tăng Xuõn Lƣu, 1999) [16].
Theo Crister và cs. (1988) [48] sử dụng FSH và ECG để GRTN tuy khụng dẫn tới sự khỏc nhau về số trứng rụng (10 thể vàng) nhƣng cú thể ảnh hƣởng dƣơng tớnh lờn chất lƣợng phụi. Tỷ lệ phụi cú thể cấy đƣợc ở lụ bũ đƣợc xử lý FSH cao hơn so với lụ bũ đƣợc xử lý ECG (58% so với 42%. Tuy vậy theo (Alcivar và cs, 1983) [38] trong thớ nghiệm so sỏnh sử dụng FSH (26mg, liều giảm dần) và Pergonal (1500IU) tiờm vào ngày 9-11 của chu kỳ, đó thụng bỏo những kết quả ngƣợc lại: số thể vàng và số phụi thu đƣợc ở lụ bũ đƣợc xử lý FSH (11 thể vàng, 9 phụi) cao hơn so với lụ dựng Pergonal (10 thể vàng, 7,5 phụi), song số phụi cấy đƣợc khụng khỏc nhau giữa 2 lụ (5 phụi cấy đƣợc). Theo Aoygi và cs, (1987) [41], sự biến đổi nồng độ hormone Progesterone và estradiol trong mỏu ngoại vi của bũ đƣợc gõy rụng trứng nhiều bằng FSH và ECG khụng khỏc nhau rừ rệt.
Theo Dieleman và cs (1993) [52], dựng anti-ECG bổ sung vào thời điểm động dục là phƣơng phỏp hiệu quả và đơn giản để tăng hiệu quả của ECG và chất lƣợng phụi thu đƣợc. Tuy vậy, anti-ECG cú thể cho những kết quả khỏc nhau tuỳ theo phƣơng phỏp sử dụng. Chất lƣợng phụi sẽ giảm sỳt khi anti-ECG đƣợc đƣa vào trƣớc khi xuất hiện đỉnh LH.
Theo Bergfelt và cs (1994), đó thụng bỏo nhƣ sau: bũ tơ Simental từ 17 đến 22 thỏng sau khi gõy rụng trứng nhiều đó động dục 100%, số trứng rụng và phụi tƣơng ứng là 16,41,89 và 10,11,79, trong đú số phụi cấy đƣợc bỡnh quõn cho mỗi bũ là 5,31,09 (Trớch Tăng Xuõn Lƣu, 1999) [16].
Trạng thỏi buồng trứng của bũ cho vào thời điểm gõy rụng trứng nhiều là yếu tố ảnh hƣởng quan trọng đến kết quả gõy rụng trứng nhiều. Theo Lindesell và cs (1986) [77], xử lý FSH vào ngày thứ 9 của chu kỳ của bũ cho kết quả rụng trứng và chất lƣợng phụi cao hơn hẳn so với xử lý vào ngày thứ 3 hoặc 6. (Gouding và cs, 1990) [66], cũng thụng bỏo kết quả tƣơng tự trờn đối tƣợng bũ thịt.
Về gúc độ sinh lý và mụi trƣờng, cỏc nghiờn cứu đó đƣợc cụng bố cho thấy cỏc yếu tố cỏ thể, giống, mựa vụ đề ảnh hƣởng rất lớn tới kết quả gõy rụng trứng nhiều ở bũ. Kết quả thớ nghiệm của Foote và Onuma (1976) [60], cho thấy tuỳ thuộc theo trạng thỏi cỏ thể phản ứng rụng trứng ở bũ cú thể dao động từ 0-14 trứng rụng/con.
Trong trƣờng hợp gõy rụng trứng nhiều bằng cựng một quy trỡnh, bũ cú trạng thỏi sinh sản bỡnh thƣờng cho 10 trứng rụng trong đú cú 6,4 trứng tốt, trong khi bũ vụ sinh chỉ cho 6 trứng rụng và 2,4 trứng dựng đƣợc. Phản ứng rụng trứng ở bũ cú chu kỳ ngắn hơn 15 ngày cũng kộm hơn so với bũ cú chu kỳ dài 15-27 ngày (Crister và cs, 1988) [48].
Tuổi bũ lỳc xử lý gõy rụng trứng nhiều cũng ảnh hƣởng quan trọng đến kết quả tạo phụi. Phản ứng rụng trứng nhiều ở bũ tơ chƣa đẻ và bũ đẻ 1-5 lần thƣờng cao hơn so với bũ đó đẻ trờn 6 lần (Grevet, 1982) [67]. Chất lƣợng phụi thu đƣợc sau gõy rụng trứng nhiều ở bũ sữa 12 thỏng tuổi kộm hơn bũ sữa đó đẻ 1-2 lứa; trong trƣờng hợp bũ tơ, số trứng rụng cú xu hƣớng cao hơn (22 thể vàng/con/lần), nhƣng tỷ lệ phụi đạt tiờu chuẩn cấy phụi rất thấp (2/22 phụi) (Schilling và cs, 1981) [96].
Theo Olivera-Angel và cs (1984) [86], nghiờn cứu về tỷ lệ thu phụi và chất lƣợng của phụi sau khi gõy rụng trứng nhiều bằng ECG (2000 IU) trờn bũ thịt tơ và bũ thịt đang cho bỳ cho thấy ở bũ tơ tỷ lệ thu phụi chỉ đạt 15% và tỷ lệ phụi phỏt triển bỡnh thƣờng là 40%, thấp hơn nhiều so với tỷ lệ thu phụi đạt 39% và tỷ lệ phụi phỏt triển bỡnh thƣờng 67% ở bũ đang cho bỳ.
Phản ứng rụng trứng nhiều cũng rất khỏc nhau giữa cỏc giống bũ. Theo Gauthier (1983) [64], số trứng rụng trung bỡnh trong cỏc xử lý gõy rụng trứng nhiều bằng ECG là 2,9 ở bũ Pir noir, 6,2 ở bũ Charolaise, 4,9 trứng ở bũ lai Holstein-Fresian, và 8,2 trứng ở bũ Holstein.
Theo thụng bỏo của Hasler và cs (1990) [69] phản ứng rụng trứng nhiều của bũ Holstein nuụi trong điều kiện ụn đới là 11 thể vàng nếu đƣợc xử lý vào mựa đụng - xuõn, và 9,5 thể vàng nếu đƣợc xử lý vào mựa hố-thu. Tƣơng tự, kết quả rụng trứng nhiều và thụ tinh ở bũ Holstein nuụi tại điều kiện nhiệt đới Chõu phi là 12 thể vàng, 73% phụi tốt, 95% trứng thụ tinh đối với bũ đƣợc xử lý ECG vào mựa đụng, và 7 thể vàng, 46% phụi tốt, 85% trứng thụ tinh đối với bũ đƣợc xử lý vào mựa hố (Gordon và cs, 1987) [65].
Qua kết quả nghiờn cứu về ứng dụng GRTN trong cấy truyền phụi của nhiều tỏc giả, cú thể đƣa ra nhận xột rằng hầu hết cỏc phƣơng phỏp GRTN đƣợc sử dụng phổ biến hiện nay, đều đƣợc sử dụng cỏc hormone sinh sản và ở mức độ cỏc cơ chế điều khiển nội tiết - thần kinh, thể dịch.
Nguyờn tắc chung của cỏc phương phỏp này là:
1) Khống chế thể vàng bằng cỏc hormone cú hoạt tớnh làm tiờu thể vàng nhƣ oestrogen, prostaglandin và dẫn xuất của chỳng. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});