Lam được rửa bằng xà phịng và tráng qua nước cất, sau đĩ lau lại bằng cồn/ aceton (1:1). Cân 1,2g agarose pha trong 100 ml PBS pH7,2, cho thêm chất bảo quản merthiolate với nồng độ 0,01%. Hỗn hợp được chưng trong nồi cách thủy cho
đến khi agarose tan hồn tồn. Đổ thạch lên lam, phần thạch cịn lại cĩ thể bảo quản trong tủ lạnh đến khi sử dụng. Để 30 phút cho thạch đơng lại sau đĩ dùng khuơn để đục các hoa giếng. 1 lam cĩ thể đục từ 1 đến 3 cụm hoa giếng. Đặt vào mỗi giếng 10 µl kháng nguyên hoặc kháng thể.
Mẫu 1: Kháng nguyên ovalbumin được pha ra thành các độ pha sau: 50 µg/ml, 40 µg/ml, 30 µg/ml, 20 µg/ml, 10 µg/ml, 5 µg/ml được cho ở 6 giếng xung quanh. Giếng ở giữa cho huyết thanh thỏ thơ được lấy sau mũi tiêm thứ hai.
Mẫu 2: Kháng nguyên 20 µg/ml được cho vào giếng giữa. Kháng thể là huyết thanh thỏ thơ kháng ovalbumin lấy sau các mũi tiêm thứ 3, 4 được pha lỗng ra các nồng độ khác nhau cho vào các giếng xung quanh.
Tiêu bản được đặt vào hộp ẩm ở nhiệt độ phịng. Sau 24÷48 giờđọc kết quả
sơ bộ. Bước tiếp theo, ngâm tiêu bản trong nước muối sinh lí trong thời gian từ
24÷48 giờ. Trong khoảng thời gian này, thay đệm mỗi ngày hai lần. Sau đĩ, rửa nhanh tiêu bản 1 lần bằng nước cất. Tiêu bản được phủ lên bằng giấy lọc whatman
đểở nhiệt độ phịng hoặc 37oC đến khơ.
Tiến hành nhuộm màu bằng thuốc nhuộm Coomassie brillant blue thời gian ít nhất 10 phút, tẩy màu và rửa sạch với nước cất, để khơ.