3.1. Nội dung nghiên cứu
Các nội dung của nghiên cứu bao gồm:
- Xác ựịnh các chỉ tiêu sinh lý gồm thân nhiệt, tàn số hô hấp, tần số tim của ngựa bạch nuôi tại Trang trại.
- Xác ựịnh các chỉ tiêu sinh lý máu ngựa gồm các chỉ tiêu về hệ hồng cầu, các chỉ tiêu hệ bạch cầu và số lượng tiểu cầu
- Xác ựịnh kắch thước tế bào hồng cầu và một số loại bạch cầu - Xác ựinh một số chỉ tiêu sinh hóa máu ngựa
Tất cả các chỉ tiêu ựều ựược xác ựịnh trên các nhóm tuổi ngựa bạch hiện ựang nuôi tại trung tâm
3.2. đối tượng, vật liệu và phương pháp nghiên cứu
3.2.1. đối tượng nghiên cứu
Căn cứ vào thực trạng phân bố tuổi của ựàn ngựa nuôi tại Trung tâm, các nhòm tuổi nghiên cứu bao gồm:
Nhóm ngựa dưới 2 tháng tuổi Nhóm ngựa khoảng 1 năm tuổi
Nhóm ngựa ỘchoaiỢ, 1,5 ựến 2,5 năm tuổi Nhóm ngựa mẹ
3.2.2. Vật liệu nghiên cứu:
- Dụng cụ kiểm tra các chỉ tiêu lâm sàng của ngựa: nhiêt kế và ống nghe, ựồng hồ bấm giây.
- Dụng cụ lấy mẫu máu:
Bông, cồn sát trùng
Kim cỡ 18, bơm tiêm loại 5ml Bông, cồn
Ống chứa mẫu có sẵn chất chống ựông EDTA Lam kắnh
- Máy phân tắch các chỉ tiêu sinh lý máu: Cell Dyn 3700 ( hãng Abbort-Hoa kỳ). - Kắnh hiển vi và hệ thống máy ảnh: kắch thước các tế bào máu ựược chụp và ựo bằng hệ thống gồm: kắnh hiển vi sinh học Primo star Carl Zeiss Ờ đức) và một máy tắnh. Camera MVV3000 có hệ thống phần mềm và thước ựo ựi kèm, ảnh có gắn thước ựo camera ựược quan sát, chụp và lưu trên máy tắnh.
- Các loại hóa chất: hematocin, eosin, xylen cồnẦ
3.3. Phương pháp nghiên cứu
3.3.1. Phương pháp theo dõi các chỉ tiêu lâm sàng
đo thân nhiệt (oC)
- Dụng cụ: nhiệt kế thủy ngân.
- Thao tác: ựiều chỉnh nhiệt kế về 36oC. Một tay cầm ựuôi ngựa nâng
lên, một tay cầm nhiệt kế nghiêng một góc 45o từ từ ựưa nhiệt kế vào hậu môn
ngựa ựến 1/2 nhiệt kế, ựể yên trong khoảng 5 phút. Nhiệt ựộ ựo ựược trên nhiệt kế là thân nhiệt của ngựa.
- Chỉ tiêu thân nhiệt ựược ựo vào buổi sáng trước khi cho ăn, mỗi ngựa ựo 1 lần
đo tần số tim (lần/phút)
- Dụng cụ: ống nghe và ựồng hồ bấm giờ.
- Thao tác: Cố ựịnh ngựa, dùng ống nghe, nghe vùng tim và ựếm số lần tim ựập trong 1 phút.
- Chỉ tiêu tần số tim ựược kiểm tra vào buổi sáng trước khi cho ăn, mỗi ngựa kiểm tra 3 lần và tắnh giá trị trung bình. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Kiểm tra tần số hô hấp (lần/phút)
- Dụng cụ: ựồng hồ bấm giờ.
- Thao tác: Cố ựịnh ngựa, quan sát và ựếm số lần lên xuống của hõm hông trong 1 phút.
- Chỉ số tần số hô hấp ựược kiểm tra vào buổi sang trước khi cho ăn, mỗi ngựa ựược kiểm tra 3 lần và tắnh giá trị trung bình.
3.3.2. Phương pháp xác ựịnh các chỉ tiêu sinh lý,sinh hóa máu Tiến hành lấy mẫu Tiến hành lấy mẫu
Cố ựịnh chắc chắn ngựa, lấy máu tĩnh mạch cổ. Xác ựịnh tĩnh mạch cổ và sát trùng vùng xung quanh tĩnh mạch cổ. Dùng tay trái ựè phần dưới tĩnh mạch cổ nhằm làm căng phồng tĩnh mạch cổ; ựưa kim lấy máu vào hút máu vào xilanh. Khi ựã ựủ lượng máu cần thiết rút xilanh ra, ựặt ựầu xilanh vào sát thành ống chứa mẫu ựẩy cho máu chảy theo thành ống ựến vạch quy ựịnh. đóng nắp ống chứa mẫu và xoay nhẹ nhàng nhiều lần cho chất chống ựông ựược ựảo ựều. đồng thời tiếp tục lấy máu phiết kắnh. đợi máu trên lam kắnh khô nhỏ cồn lên ựể cố ựinh mẫu. Bảo quản mẫu nơi khô mát sạch sẽ.
Mẫu máu chống ựông dùng ựể ựo các chỉ tiêu sinh lý máu ựược bảo
quản, vận chuyển về phòng thắ nghiệm và phân tắch trong vòng 24 giờ.
Phương pháp phân tắch các chỉ tiêu huyết học
Các chỉ tiêu huyết học ựược ựo trong vòng 24 giờ sau khi lấy mẫu bằng máy Cell Ờ Dyn 3700 (hãng Abbort Ờ Hoa kỳ) tại phòng thắ nghiệm Trung tâm, Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội.
Có 4 hệ thống hệ thống ựọc riêng rẽ trên máy cho ra các thông số huyết học:
Hình thái, kắch thước tế bào máu ngựa bạch
-Số lượng hồng cầu (RBC) (triệu/mm3) là số lượng hồng cầu có trong
1mm3 máu ựược ựo bằng phương pháp trở kháng.
-Hàm lượng huyết sắc tố (HGB) ựược tắnh bằng số gam hemoglobin có
trong 1 lắt máu (g/L) ựo bằng phương pháp quang phổ
-Hematocrit (HCT) (%): dung tắch hồng cầu là phần trăm của thể tắch
máu mà các tế bào máu( chủ yếu là hồng cầu) chiếm trong 1L máu toàn phần.
-Tổng số tế bào bạch cầu và các thành phần bạch cầu ựược xác ựịnh
-Thể tắch trung bình hồng cầu (MCV) (fl): ựược tắnh bằng thương của thể tắch khối hồng cầu và số lượng hồng cầu
-Lượng huyết sắc tố trung bình trong một hồng cầu (MCH): ựược tắnh
bằng hàm lượng huyết sắc tố chia cho số lượng hồng cầu. (pg)
-Nồng ựộ huyết sắc tố trung bình (MCHC): ựược tắnh bằng lượng
huyết sắc tố chia cho dung tắch hồng cầu. (g%)
-Các chỉ tiêu về hệ bạch cầu số lượng bạch cầu (số lượng hồng cầu:
nghìn/mm3 và công thức bạch cầu ựược xác ựịnh như thường quy.
-Tổng số tiểu cầu ựo bằng phương pháp trở kháng.
3.3.4. Phương pháp nhuộm mẫu máu:
Mẫu máu ựã phiết kắnh và cố ựịnh cồn ựược ựưa về phòng thắ nghiệm nhuộm HE.
3.3.5. Phương pháp ựo kắch thước các tế bào máu: (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Sau khi nhuộm, tiêu bản máu ựược chụp và ựo bằng một hệ thống thiết bị gồm: camera MVV3000, kắnh hiển vi sinh học thông thường Primo star (hãng Carl Zeiss Ờ đức) và một máy tắnh. Camera MVV3000 có hệ thống phần mềm và thước ựo ựi kèm, ảnh có gắn thước ựo camera ựược quan sát, chụp và lưu trên máy tắnh. Sau ựó, chụp ảnh một thước chuẩn 1mm ở các ựộ phóng ựại khác nhau, ựộ phân giải khác nhau ựể tắnh ra kắch thước thật của các tế bào máu trên ảnh chụp ựược.
Số lượng tế bào ựược ựo kắch thước: các loại tế bào hồng cầu, bạch cầu ựa nhân trung tắnh, lâm ba cầu có số lượng nhiều ựo mỗi loại 50 tế bào trở lên; bạch cầu ái toan, bạch cầu ái kiềm và bạch cầu ựơn nhân lớn có số lượng ắt ựo mỗi loại khoảng 20 tế bào
3.4. Phương pháp xử lý số liệu
Số liệu thu ựược ựược tắnh toán bằng phần mềm Microsoft excel 2003.
Các sai khác có ý nghĩa ựược kiểm tra bằng kiểm ựịnh Khi bình phương (χ2-