Hàm lượng Cl = *BSL
2.2.14 Phương pháp kiểm nghiệm khuẩn chịu nhiệt.
Phạm vi áp dụng: kiểm tra khuẩn chịu nhiệt trong sản phẩm tinh bột biến tính, MSG và các mẫu theo yêu cầu.
Dụng cụ:
- Pipet vô trùng 1ml có chia vạch. - Đĩa petri đường kính Ø 90mm. - Ống nghiệm 10ml có chia vạch. - Muỗng cân.
- Đèn cồn, tủ cấy, tủ ấm duy trì ở nhiệt độ: 55±1°C. - Bồn nước duy trì ở nhiệt độ 70-100°C.
- Đồng hồ bấm thời gian.
- Máy đếm khuẩn lạc có đèn chiếu sang thích hợp và có buồng đếm màu tối có vạch kẻ ô.
- Cân kỹ thuật.
Môi trường thuốc thử
- HCl 1M: cho 8.5ml HCl 37% vào bình định mức chứa sẵn một ít nước cất và định mức lên 100ml.
- NaOH 1M: cân 4g NaOH cho vào nước cất hòa tan và định mức đến 100ml. - Môi trường B: cân 22g pepton, 33g yeast extract, 10g NaCl cho vào cốc hòa tan
bằng nước cất, chỉnh pH 7.2-7.4 và cho thêm nước cất đến 2000ml, lấy 2/3 môi trường này cho vào nồi đun cho đến khi bắt đầu sôi, 1/3 môi trường còn lại cho vào sau. Sau đó cho từ từ agar (40g) vào, vừa cho vừa khuấy đều, đun đến sôi, rót môi trường vào bình tam giác 500ml và tiệt trùng trong nồi hấp ở 121°C trong thời gian 30 phút.
- Đệm photphat: cân 34g KH2PO4 hòa tan trong 500ml nước cất, chỉnh về pH 7.2 bằng NaOH 1M, định mức bằng nước cất đến 1000ml, tiệt trùng 121°C trong thời gian 15 phút, bảo quản trong tủ lạnh.
- Nước pha loãng: lấy 1.25ml dung dịch đệm photphat, cho thêm nước cất đến 1000ml. Phân phối vào các bình thủy tinh, ống ngiệm và tiệt trùng ở 121°C trong thời gian 15 phút.
Các bước kiểm nghiệm
- Đối với mẫu MSG: cân 10g mẫu hòa tan trong 90ml nước pha loãng, đồng nhất mẫu trong khoảng 2 phút, hút 5ml vào các ống nghiệm có nắp đậy, đem gia nhiệt 100°C trong 10 phút.
- Đối với mẫu tinh bột biến tính và các mẫu khác: cân 10g mẫu, thêm vào 40ml nước pha loãng, lắc đều và hút 1ml mẫu vào ống nghiệm chứa 9ml nước pha loãng. Sau đó đem gia nhiệt ở nhiệt độ 70°C trong 20 phút hoặc 80°C trong 30 phút hoặc 100°C trong 10 phút (hoặc các yêu cầu điều kiện nhiệt độ, thời gian khác tùy theo yêu cầu của khách hàng hoặc công ty). Nồng độ pha loãng có thể cao hơn tùy thuộc vào lượng vi sinh vật tồn tại trong mẫu.
- Dùng pipet vô trùng hút 1ml mẫu đã gia nhiệt ở bước trên cho vào đĩa petri, mỗi mẫu cấy 2 đĩa.
- Tiếp theo rót khoảng 15-20ml môi trường B (duy trì ở nhiệt độ 42-45°C) vào đĩa, lắc đều, đợi khô, lật úp đĩa và nuôi cấy ở nhiệt độ 55±1°C trong 48 giờ (hoặc ở điều kiện nhiệt độ, thời gian theo yêu cầu của khách hàng hoặc công ty). Đếm số khuẩn lạc mọc trên đĩa.
Công thức tính
(cfu/g)=