Hàm lượng Cl = *BSL
2.2.13 Phương pháp kiểm tra nấm men nấm mốc.
Mục đích: hướng dẫn cho chúng ta thực hiện kiểm tra chỉ tiêu nấm men nấm mốc.
Phạm vi áp dụng: sản phẩm bột ngọt, tinh bột biến tính..
An toàn lao động: trang bị khẩu trang, găng tay, lưới trùm đầu thích hợp khi tiến hành thao tác thí nghiệm.
Thiết bị và dụng cụ: - Máy đo pH.
- Bể ổn nhiệt độ 45ºC±1ºC.
- Đĩa petri thủy tinh (ít nhất 15*90mm).
- Dụng cụ chứa pipet, đĩa petri để bảo vệ thích hợp.
- Nhiệt kế thủy ngân có khoảng đo phù hợp, độ chính xác đạt tiêu chuẩn. - Máy đếm khuẩn lạc có đèn chiếu sang thích hợp và buồng đếm màu tối có vạch kẻ ô.
- Ống nghiệm 10ml, có nắp vặn vô trùng.
- Bình thủy tinh borosilicate 500ml, 1000ml có nút cao su hoặc có nắp vặn bằng nhựa vô trùng.
- Nồi hấp tiệt trùng. - Tủ cấy.
- Cân kỹ thuật.
Môi trường và thuốc thử
- NaOH 1M: cân 4g NaOH, hòa tan và định mức đến 100ml nước cất. - HCl 1M: cho 8.5ml HCl 37% vào bình định mức chứa sẵn ít nước cất và định mức đến 100ml.
- Nước pha loãng: lấy 2.5ml dung dịch đệm photphat, định mức 2000ml bằng nước cất. Cho vào mỗi bình 90ml, 1000ml, tiệt trùng ở 121°C trong thời gian 15 phút.
- Dịch canh khuẩn:
+ Môi trường Potato Dextose Agar (PDA): cân 39g môi trường PDA hòa tan trong nước cất đến 1000ml, chỉnh pH bằng NaOH 1M hay HCl 1M sao cho sau khi tiệt trùng pH bằng 5.6±0.2. Sau đó rót vào bình tam giác 500ml, để tiệt trùng 121°C trong thời gian 15 phút.
+ Môi trường Acid Tartaric 10%: cân 10g tartaric hòa tan bằng nước cất và định mức đến 100ml và tiệt trùng qua màng lọc có kích thước lỗ 0.45μm.
Các bước kiểm nghiệm:
- Môi trường PDA đã tiệt trùng làm nguội khoảng 42-45°C, cho thêm dung dịch acid tartaric 10% sao cho pH cuối cùng của môi trường đạt 3.5±0.1 (10ml acid tartaric 10% trong 1000ml môi trường PDA) xoay nhẹ cho đều. Rót khoảng 15-20ml môi trường vào các đĩa petri, để nguội cho đông đặc dưới điều kiện vô trùng.
- Cân 10g mẫu, thêm vào 90ml nước pha loãng, đồng nhất mẫu khoảng 2 phút. Tiếp tục pha loãng đến nồng độ thích hợp bằng cách hút 1ml mẫu ở nồng độ trước vào ống nghiệm chứa 9ml nước pepton, lắc đều và hút 1ml mẫu cấy vào đĩa petri, mỗi mẫu cấy 2 đĩa.
- Tráng đều, phơi khô, đậy nắp, lật úp đĩa và nuôi trong tủ ấm ở 35°C với 48 giờ.
Tính kết quả
(cfu/g) =
Áp dụng phương pháp làm tròn với 2 chữ số có nghĩa đầu tiên.