4. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN
4.1.2. Mô cơ cá giò 7 ngày sau khi tiêm các loại vắc xin và nhũ dầu
4.1.2.1. Mô cơ cá giò 7 ngày sau khi tiêm các loại vắc xin và nhũ dầu, x100
Hình 4.2. Mô cơ cá giò 7 ngày sau khi tiêm nhũ dầu, x100
Quan sát trên tiêu bản mô cơ 7 ngày sau khi tiêm nhũ dầu (Hình 4.2), nhận thấy mô cơ có sự biến ựổi. Mô cơ bắt màu hồng của Eosin, các sợi cơ xếp
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ....... 24
song song, một số bị ựứt gãy, mất liên kết và không có hiện tượng hoại tử nghiêm trọng Trong cơ xuất hiện khá nhiều giọt dầu.
Hình 4.3. Mô cơ cá giò 7 ngày sau khi tiêm vắc xin V1,V6 ,V4-1,V4-2, x100 Quan sát tiêu bản 7 ngày sau khi tiêm vắc xin V1 thấy xuất hiện một vùng mô cơ bị biến ựổi rộng lớn ngay dưới da, lan rộng và gây hoại tử một vùng cơ lớn bắt màu tắm của thuốc nhuộm Hematocylin. Vùng bị biến ựổi này ựược gọi là vùng viêm. Các giọt dầu (O) với nhiều kắch thước khác nhau. Ngoại vi vùng viêm không bị hoại tử, cấu trúc tế bào cơ bình thường bắt màu hồng của Eosin. Quanh giọt dầu có những sợi cơ chun lại và rách nát.
Quan sát tiêu bản mô cơ cá giò cắt ngang sau 7 ngày tiêm vắc xin V6 ở ựộ phóng ựại x100 thấy vùng viêm xuất hiện. Các sợi cơ hoại tử không còn hình dạng bình thường. Vùng viêm bắt màu tắm ựậm của thuốc nhuộm Hematoxylin. Vùng viêm này lớn hơn so với ựối chứng nhưng so với 3 loại vắc xin trên thì bé hơn.
Quan sát tiêu bản mô cơ cá giò cắt ngang sau 7 ngày tiêm vắc xin V4-1 ở ựộ phóng ựại x100 thấy vùng viêm gây hoại tử nghiêm trọng một vùng cơ lớn.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ....... 25
Vùng viêm bắt màu tắm của thuốc nhuộm Hematocylin khác với vùng mô bình thường bên cạnh chưa bị biến ựổi. Vùng viêm xuất hiện rất nhiều giọt dầu có kắch thước bé, rải rác có giọt dầu kắch thước lớn hơn. Vùng viêm khi tiêm vắc xin V4-1 lớn hơn rất nhiều so với khi tiêm ựối chứng nhũ dầu.
Sau 7 ngày tiêm vắc xin V4-2 vùng viêm xuất hiện dưới da bắt màu tắm ựậm thuốc nhuộm Hematoxylin. Bên cạnh là vùng mô bình thường chưa bị biến ựổi bắt màu hồng thuốc nhuộm Eosin.
Như vậy, sau 7 ngày tiêm 4 loại vắc xin nhũ dầu V1,V4-1,V4-2 và V6 ựều xuất hiện vùng viêm và biến ựổi mô học rõ rệt tại vùng tiêm vắc xin. Bên trong vùng viêm có các giọt dầu với nhiều kắch thước khác nhau. Sợi cơ bị hoại tử hoàn toàn, không còn cấu trúc bình thường. Vùng viêm bắt màu ựậm của thuốc nhuộm Hematocylin. So với khi tiêm nhũ dầu thì tiêm các loại vắc xin nhũ dầu gây biến ựổi mô học rõ rệt, sợi cơ hoại tử nghiêm trong. Nhận thấy khi tiêm vắc xin V4-1,V4-2 xuất hiện vùng viêm rộng nhất.
4.1.2.2. Biến ựổi mô cơ sau 7 ngày tiêm các loại vắc xin, x400
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ....... 26
Hình 4.5. Biến ựổi mô cơ sau 7 ngày tiêm vắc xin V1, x400
Hình 4.6. Biến ựổi mô cơ sau 7 ngày tiêm vắc xin V6, x400
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ....... 27
Hình 4.8. Biến ựổi mô cơ sau 7 ngày tiêm vắc xin V4-2, x400
Quan sát mô cơ cá giò sau 7 ngày tiêm nhũ dầu ở ựộ phóng ựại x400 thấy rải rác các giọt dầu (O). Một số sợi cơ bị ựứt gãy, xuất hiện ựám tế bào máu xen kẽ giữa các sợi cơ, ựám tế bào máu bắt màu ựậm thuốc nhuộm Hematocylin. Các sợi cơ bắt màu hồng thuốc nhuộm Eosin (Hình 4.4).
Tế bào máu tập trung dày ựặc xung quanh giọt dầu sau 7 ngày tiêm vắc xin V1. Sợi cơ bị hoại tử nghiêm trọng, không còn cấu trúc bình thường. Các tế bào máu phá hủy sợi cơ, rải rác các mảnh sợi cơ còn lại bắt màu hồng thuốc nhuộm Eosin. đám tế bào máu bắt màu tắm ựậm thuốc nhuộm Hematocylin
(Hình 4.5).
Vùng cơ chưa bị phá hủy nhiều nhưng ựã xuất hiện ổ viêm sau 7 ngày tiêm vắc xin V6. Lân cận ổ viêm quan sát thấy cấu trúc sợi cơ bình thường. Bên trong ổ viêm xuất hiện dòng tế bào máu xâm nhập (Hình 4.6).
Sau 7 ngày tiêm vắc xin V4-1 ở ựộ phóng ựại x400 thấy xuất hiện nhiều giọt dầu với nhiều kắch thước khác nhau. Các sợi cơ bị hoại tử nhưng vẫn còn dấu hiệu của sợi cơ. Xung quanh các giọt dầu lượng tế bào máu tập trung ắt
(Hình 4.7).
Tiêm vắc xin V4-2 sau 7 ngày ở ựộ phóng ựại x400 nhận thấy ổ viêm bắt màu tắm ựậm của thuốc nhuộm Hematocylin. Dòng tế bào máu tâp trung xung quanh và xâm nhập vào bên trong giọt dầu (Hình 4.8).
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ....... 28
4.1.2.3. Các lớp tế bào xuất hiện trong mô cơ sau 7 ngày tiêm vắc xin và nhũ dầu, x1000
Ớ Các lớp tế bào sau 7 ngày tiêm nhũ dầu, x1000
Hình 4.9.Lớp tế bào sau 7 ngày tiêm nhũ dầu, x1000 ( hồng cầu (e);bạch cầu (WBC))
Quan sát trên kắnh hiển vi ở ựộ phóng ựại lớn hơn (Hình 4.9) có thể thấy rõ sự biến ựổi mô học cũng như phản ứng của cơ thể trước tác nhận lạ. Tại vùng viêm (Hình 4.9A) có những mảnh của sợi cơ chưa bị hoại tử hoàn toàn, do có cấu trúc ưa axắt, chủ yếu là protein nên bắt màu hồng của Eosin. Quan sát ựược các tế bào tham gia phản ứng viêm. Xuất hiện rải rác tế bào hồng cầu (e) và bách cầu (WBC) di chuyển xen kẽ giữa các sợi cơ ựang bị phân hủy tới trung tâm vùng viêm (Hình 4.9B,C) nhưng chưa thể xác ựịnh ựược ựó là loại bạch cầu gì. Chủ yếu là các tế bào bạch cầu có nhân, hình dạng kắch thước khác nhau và rải rác có các tế bào hồng cầu. Bạch cầu không có Hemoglobin nên không có màu, nhân ưa kiềm bắt màu tắm của Hematocylin. Có 2 loại bạch cầu gồm: bạch cầu hạt (bạch cầu ựa nhân) và bạch cầu không hạt (bạch cầu ựơn nhân). Bạch cầu có hạt ựảm nhiệm chức năng thực bào bao vây và tiêu diệt tác nhân lạ.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ....... 29
Ớ Các lớp tế bào sau 7 ngày tiêm vắc xin V1, x1000
Hình 4.10.Lớp tế bào sau 7 ngày tiêm vắc xin V1, x1000 ( Hồng cầu (e); bạch cầu (WBC)
Các tế bào hồng cầu và bạch cầu trung tắnh xâm nhập và bao vây xung quanh giọt dầu. Xuất hiện rất nhiều bạch cầu trung tắnh nhân phân thùy.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ....... 30
Ớ Các lớp tế bào sau 7 ngày tiêm vắc xin V6, x1000
Hình 4.11.Lớp tế bào sau 7 ngày tiêm vắc xin V6, x1000 Bạch cầu (WBC), ựại thực bào (M)
Quan sát tiêu bản mô ở ựộ phóng ựại lớn x1000 thấy tại trung tâm vùng viêm, các tế bào bạch cầu vây quanh và xâm nhập các giọt dầu. Dòng tế bào tham gia phản ứng viêm xâm nhập vào bên trong giọt dầu (Hình 4.11A). Các tế bào bạch cầu bắt màu tắm ựậm của thuốc nhuộm Hematocylin tập trung nhiều xung quanh giọt dầu (Hình 4.11B,D). đối với các giọt dầu bị dòng tế bào xâm nhập, những giọt dầu ựó ựược gọi là ổ viêm. Tại ổ viêm có thể quan sát ựược 2 lớp tế bào ựược hình thành, bao vây và tham gia tiêu diệt tác nhân gây bệnh
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ....... 31
kắch thước lớn hơn so với những tế bào khác và bắt màu thuốc nhuộm khá nhạt. Lớp 2 gồm các tế bào bạch cầu có nhân lớn, bắt màu tắm ựậm của Hematocylin.
Ở giai ựoạn 7 ngày sau khi tiêm vắc xin V6, quan sát trên tiêu bản mô học thấy vùng viêm chưa rộng, số lượng nhũ dầu ắt. Tại ổ viêm xuất hiện rất nhiều tế bào bạch cầu trung tắnh và ựại thực bào tham gia vào phản ứng viêm.
Ớ Các lớp tế bào sau 7 ngày tiêm vắc xin V4-1, H&E, x1000
Hình 4.12.Lớp tế bào sau 7 ngày tiêm vắc xin V4-1, x1000 bạch cầu (WBC), ựại thực bào (M), giọt dầu (O)
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ....... 32
Trung tâm ổ viêm bị hoại tử nặng có nhiều khoảng trống lớn do có nhiều giọt dầu và vùng cơ xung quanh bị hoại tử tạo nên (Hình 4.12A,B). Tại trung tâm vùng viêm có sự xuất hiện của các bạch cầu nhân lệch một bên với mật ựộ chưa nhiều, bắt màu tắm ựậm của Hematocylin (Hình 4.12D).
Vùng gần giọt dầu (O) tập trung lượng lớn các tế bào ựại thực bào có chức năng thực bào và tiêu diệt tác nhân lạ xâm nhập vào cơ thể bên cạnh ựó ựại thực bào còn có chức năng trình diện kháng nguyên (Hình 4.12A,B).
Vùng cơ bị hoại tử tập trung nhiều ựám tế bào bắt màu tắm ựậm của Hematocylin ( ) bao quanh ngăn cách với vùng mô cơ chưa bị hoại tử, không cho ổ viêm lan rộng. Tại vùng cơ bị hoại tử thấy có vùng không tế bào chứa nhiều dịch keo bắt màu thuốc nhuộm không ựược tốt gọi là dịch rỉ viêm (Hình 4.12A). Chưa thấy xuất diện dòng tế bào máu bên trong giọt dầu (Hình 4.12C).
Ớ Các lớp tế bào tại ổ viêm sau 7 ngày tiêm vắc xin V4-2, x1000
Hình 4.13.Lớp tế bào tại ổ viêm sau 7 ngày tiêm vắc xin V4-2, x1000
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ....... 33
Quan sát tiêu bản mô cơ cá giò sau 7 ngày tiêm vắc xin V4-2 ở ựộ phóng ựại lớn nhận thấy ổ viêm rộng bắt màu tắm thuốc nhuộm Hematocylin.
A: Lớp 1: Vùng các tác nhân ựang bị bao vây, ựang bị tiêu diệt không nhìn rõ tế bào. Chủ yếu là các tế bào bạch cầu sau khi làm nhiệm vụ thực bào, mảnh vụn vi khuẩn sẽ bị tiêu diệt.
Lớp 2: Các vi khuẩn, bạch cầu, ựại thực bào, tổ chức hoại tử ựang bị tiêu diệt tạo thành ựám dịch keo dạng ựặc.
Lớp 3: Lớp tế bào ựại thực bào bắt màu thuốc nhuộm nhợt nhạt. Các tế bào này có khả năng thực bào những tế bào chết, vi khuẩn và các sản phẩm trong quá trình viêm, có chức năng trình diện kháng nguyên cho tế bào có thẩm quyền miễn dịch là Lympho bào.
Lớp 4: Gồm các tế bào bạch cầu nhân lớn bắt màu tắm ựậm của Hematocylin. Lớp tế bào này bao quanh ngăn cách giữa vùng viêm và vùng lành.
B: Xuất hiện ựám tế bào ựại thực bào gồm các tế bào lớn, bắt màu nhạt. Các tế bào này có khả năng thực bào những tế bào chết, vi khuẩn và các sản phẩm trong quá trình viêm.
C: Xung quanh giọt dầu xuất hiện rải rác tế bào ựại thực bào và Lympho bào. Vai trò của tế bào Lympho là thực hiện ựáp ứng miễn dịch. Việc tăng Lympho bào sẽ tăng khả năng sinh kháng thể nhằm chống lại kháng nguyên.
D: Tập trung dày ựặc dòng tế bào xung quanh ổ viêm phân thành 2 lớp:
Lớp 2: Các vi khuẩn, bạch cầu, ựại thực bào, tổ chức hoại tử ựang bị tiêu diệt tạo thành ựám dịch keo dạng ựặc.
Lớp 3: Vùng các tác nhân ựang bị bao vây, ựang bị tiêu diệt không nhìn rõ tế bào. Chủ yếu là các tế bào bạch cầu sau khi làm nhiệm vụ thưc bào, mảnh vụn vi khuẩn sẽ bị tiêu diệt. Lớp tế bào bạch cầu (WBC) ựang tập trung dày ựặc xung quanh giọt dầu. Trên bạch cầu có các thụ thể liên quan ựến khả năng thực bào, hóa ứng ựộng bạch cầu ựến ổ viêm và tiêu diệt vi khuẩn\ Khi cơ thể cá bị viêm, dịch thể và các tế bào máu sẽ di chuyển qua thành mạch máu ựi vào tổ chức tế bào ựang bị viêm.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ....... 34
Sau 7 ngày tiêm vắc xin V4-2 phản ứng viêm ựã xảy ra mạnh. Xuất hiện các dòng tế bào miễn dịch: Bạch cầu, ựại thực bào và Lympho bào. Có sự phân hóa lớp tế bào tại ổ viêm.