4.4.1. Kiểm tra chất lượng theo Dược Điển Việt Nam IV
Soi bột: Có 4/77 mẫu không đạt tiêu chuẩn Dược Điển Việt Nam IV. Khi soi bột 4 mẫu dược liệu này phát hiện các sợi nấm có kích thước và
hình dạng khác biệt so với mô tả sợi nấm của dược liệu Bạch phục linh. Ví dụ như mẫu số 6 khi soi bột thấy một số sợi nấm dạng hạt khá nhỏ và có kích thước khá đều nhau (khác với tiêu chuẩn của Dược Điển Việt Nam IV).
Hình 4.1. Hình ảnh soi bột mẫu 6
Nhận xét: Dựa vào đặc điểm của hình ảnh soi bột cũng như kết quả định tính phát hiện tinh bột của một số mẫu trong số các mẫu không đạt tiêu chuẩn của Dược Điển Việt Nam IV về soi bột, có thể kết luận các mẫu này có chứa tinh bột trong thành phần.
Định tính, xác định tạp chất:
- Sau khi tiến hành định tính xác định sự có mặt của tinh bột bằng dung dịch iod đối với 77 mẩu kết quả cho thấy chỉ có 2 mẫu có trộn lẫn tinh bột, tỷ lệ là khá thấp. Kết quả này là phù hợp với nghiên cứu trước đó của của Vụ Y Dược cổ truyền vào năm 2012.[2]
- Qua quá trình tìm hiểu, chúng tôi biết được trước đây dược liệu Bạch phục linh đến 80% được làm giả bằng calci carbonat [2],[5] nên đã tiến hành định tính xác định sự có mặt của calci carbonat trong Dược liệu. Kết quả chỉ có 2 mẫu dược liệu xác định có chứa calci carbonat. Kết quả này cho thấy tỷ lệ làm giả dược liệu bằng cách trộn calci carbonat trên địa bàn thành phố Huế là thấp.
So sánh chất lượng dược liệu được thu vào hai thời điểm khác nhau (tháng 9/2013 và tháng 3/2014)
Kết quả thử bằng test thống kê χ2 cho thấy không có sự ảnh hưởng của điều kiện thời tiết (nhiệt độ và độ ẩm) đối với chất lượng của Bạch phục linh trong quá trình bảo quản tại các địa điểm được thu mẫu.
4.4.2. Kết quả định lượng β-glucan trong Bach phục linh:
- Kết quả cho thấy rằng hàm lượng hoạt chất β-glucan trong các mẫu dược liệu thu được tại thành phố Huế chênh lệch khá lớn, từ 1,32-9,66%.
- Theo tài liệu thì hàm lượng β-glucan trong Bạch phục linh chiếm khoảng 9% trọng lượng khô của Dược liệu [23].Vậy chỉ có khoảng 41,07% trong tổng số 56 mẫu dược liệu đạt tiêu chuẩn về hàm lượng này.
- Điều này có thể được lý giải vì :
+ Người ta làm giả dược liệu Bạch phục linh bằng cách trộn một ít bột vụn dược liệu này với lượng lớn các tạp chất khác. Vì vậy, mặc dù đảm bảo được các tiêu chuẩn Dược Điển nhưng hàm lượng hoạt chất trong các mẫu này vẫn rất thấp.
+ Dược liệu được thu mua từ Trung Quốc nên dược liệu có thể xuất phát từ nhiều nơi khác nhau, với điều kiện thổ nhưỡng và thời tiết khác nhau nên cũng ảnh hưởng đến hàm lượng hoạt chất trong dược liệu.
-Trong quá trình thu mẫu dược liệu chúng tôi nhận thấy rằng dược liệu được sơ chế thành nhiều dạng khác nhau (từ thể nấm ban đầu), gồm 3 dạng: dạng phiến hình khối vuông dẹt (dạng thông thường), dạng phiến lát mỏng, dạng khối lớn.
A B C
Hình 4.2. Các dạng sơ chế Bạch phục linh A: Dạng phiến lát mỏng; B: Dạng khối lớn;
Tiến hành so sánh giá trị trung bình của hàm lượng β-glucan của các mẫu Bạch phục linh dạng phiến hình khối vuông dẹt so với 2 dạng hình khối lớn và phiến lát mỏng. Chúng tôi thấy rằng hàm lượng β-glucan trung bình của các mẫu dược liệu dạng hình khối vuông dẹt thấp hơn so với 2 dạng còn lại.
Điều này có thể được lý giải như sau : qua quá trình tìm hiểu ở các địa điểm thu mẫu, chúng tôi biết được rằng một số cơ sở YHCT không thu mua dược liệu Bạch phục linh đã sơ chế sẵn từ Trung Quốc, thông thường ở dạng phiến hình khối vuông dẹt mà chỉ thu mua thể nấm nguyên vẹn , sau đó tự sơ chế thành các dạng khác nhau như dạng phiến lát mỏng hoặc dạng khối lớn (quá trình sơ chế dễ dàng hơn). Các cơ sở làm điều này để đảm bảo tránh mua phải dược liệu giả, kém chất lượng từ Trung Quốc. Vì vậy, chất lượng của các mẫu dược liệu này khá đảm bảo .
Nhận xét: Dược liệu sơ chế sẵn nhập từ Trung Quốc không đảm bảo về hàm lượng hoạt chất.
Chương 5
KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ
KẾT LUẬN
Qua quá trình thực nghiệm, đề tài đã thu được những kết quả sau:
1. Đã kiểm tra chất lượng của Bạch phục linh theo tiêu chuẩn của Dược Điển Việt Nam IV, kết quả là có 21/77 mẫu không đạt chiếm tỷ lệ 27,27%. Không có sự khác nhau giữa tỷ lệ mẫu đạt trong 2 đợt thu mẫu vào tháng 9/2013 và tháng 3/2014.
2. Đã xây dựng được quy trình và thẩm định phương pháp định lượng polysacchride dạng β-glucan trong Bạch phục linh:
+ Quy trình xử lý mẫu, chiết xuất: dược liệu làm mịn thành bột, chiết bằng NaOH 0,5N ở nhiệt độ 800C đến khi dịch chiết không hiện màu với thuốc thử phenol-sulfuric. Kết tủa hoạt chất bằng cồn 96o, rửa tủa nhiều lần bằng cồn 800.
+ Xây dựng phương pháp định lượng β-glucan bằng quang phổ UV- VIS với chất tạo màu là phenol-sulfuric.
+ Đã thẩm định phương pháp phân tích với các chỉ tiêu: tính chọn lọc, khoảng nồng độ tuyến tính, độ chính xác, độ đúng, giới hạn định lượng. Kết quả cho thấy phương pháp đạt yêu cầu đối với phép phân tích định lượng.
3. Đã áp dụng phương pháp xây dựng để định lượng β-glucan trong 56 mẫu dược liệu Bạch phục linh ,kết quả cho thấy: có 23/56 mẫu đạt tiêu chuẩn về nồng độ hàm lượng β-glucan (tỷ lệ 41,07%).
Vậy có 23/77 mẫu đạt tiêu chuẩn về Dược Điển Việt nam IV và tiêu chuẩn về hàm lượng hoạt chất β-glucan, chiếm tỷ lệ 29,87%.
KIẾN NGHỊ
Để có thể đánh giá thực trạng và quản lý chất lượng dược liệu Bạch phục linh, chúng tôi đề xuất một số vấn đề sau:
- Tiếp tục kiểm tra chất lượng Bạch phục linh với số lượng mẫu lớn hơn để đánh giá toàn diện hơn.
- Áp dụng phương pháp định lượng hoạt chất β-glucan trong Bạch phục linh đã xây dựng trong kiểm tra chất lượng đối với dược liệu Bạch phục linh
- Khuyến nghị các cơ quan chức năng tăng cường kiểm tra giám sát thị trường thuốc đông y nhằm ngăn chặn việc lưu hành dược liệu kém chất lượng, giả mạo có thể gây ảnh hưởng đến sức khỏe người tiêu dùng.
TÀI LIỆU THAM KHẢO
Tài liệu Tiếng Việt
1. Bộ Y tế (2012), Chỉ thị số 03/CT-BYT ngày 24/2/2012 của Bộ Y tế về
việc tăng cường quản lý cung ứng, sử dụng dược liệu, thuốc đông y, thuốc từ dược liệu trong các cơ sở khám chữa bệnh, chữa bện bằng y học cổ truyền.
2. Bộ Y tế (2012), Công văn số 6143/BYT-YDCT ngày 12/9/2012 về
việc tăng cường quản lý chất lượng thuốc YHCT.
3. Bộ Y tế (2010), Dược điển Việt Nam IV, Nhà xuất bản Y học.
4. Đinh Thanh Huề (2012), “Phương pháp điều tra trên mẫu”, Phương
pháp dịch tễ học, Đại học Y Dược Huế, trang 66-89.
5. Nguyễn Đăng Lâm, Tạp chí Cây thuốc quý, số 216/2012, trang 18-19. 6. Đỗ Tất Lợi (2004), những cây thuốc và vị thuốc việt nam, Nhà xuất bản Y Học, trang 222-223.
7. Lê Thị Lan Phương, Lâm Ngọc Thọ, Nguyễn Ngọc Khôi (2010),
Xây dựng quy trình định lượng polysaccharide trong cao mã đề bằng phương pháp đo quang, trang 147-149.
8. Trần Thị Vân Thi, Nguyễn Thị Hoài, Lê Trung Hiếu (2012), Chiết xuất, xác định hàm lượng, khảo sát tác dụng dược lý của phân đoạn polysaccharide từ nấm Linh chi (Ganoderma culidum) nuôi trồng tại Thừa Thiên Huế,Tạp chí Dược học (Bộ Y tế),Tập 5, Số 433, Trang 18-23.
9. Nguyễn Văn Tuấn (2011), Phương pháp ước tính cỡ mẫu cho một
nghiên cứu y học, trang 10-13.
10. Lê Thị Bích Vân (2010), Xây dựng quy trình định lượng glucose
trong chế phẩm Linh chi , Luận văn tốt nghiệp, Đại học Y Dược Huế 2010.
11. Sở y tế tỉnh Bình Dương (2014), Thông báo số 213/SYT-QLD của
tỉnh Bình Dương về kết quả kiểm tra chất lượng dược liệu, thuốc đông y, thuốc từ dược liệu và phương thức xử lý các tồn tại, trang 2-3.
Tài liệu Tiếng Anh
12. Ding Qiong, Zhang Lina (2000), Isolation and structural analysis of polysaccharides from poria cocos mycelia, The Chinese University of hong Kong,Hong Kong.
13. Dubois M. et al (1956), Colorimetric method for Determination of
Sugars and Related Substances, Analysis Chemistry 28, pp.350 – 356.
14. Gaosong Jian, Savan Vathansan (2000), MALDI-MS and HPLC
Quanlification of Water-Soluble β-glucan from Ten Barley Varieties,
pp.3305-3310.
15. JL Riós (2011),Chemical constituents and pharmacological
properties of poria cocos, University of Valencia, Spain, pp.24-25.
16. Lee Chen Kun (2011), Determination on the contents of
pachymanin in Poria cocos (Schw.) Wolf ., Journal of Traditional Chinese
Medicine, pp.61-63.
17. Meng Yunlian, Cai Lihua, Wu Huifeng, Zhang Lina (2007),
Immunohistochemical Observation on the Anti-tumor Effect of the Pachyman Polysaccharides Modified by Chemical Technique, pp.67-69.
18. Qiong Ding, Lina Zhang, Xiaojuan Xu, Xufeng Zhang, Chi Wu (2000), Solution properties of pachyman from poria cocos mycelia in
dimethyl sulfuxide, Wuhan University, China, pp.147-148.
19. The United States Pharmacopoeia 29 (2006), pp.1189-1190.
20. U.S Departement of health and human services FDA, Center for evaluation and research, Center for Veterinary medicine (2001), Guidance for
industry Bioanalytical method validation.
21. WHO (2000), Development of National policy on Traditional Medicine, pp.36-41.
22. Zha Sheng-lan, ZhaoRong-hua,Chen Dong,Wei Hua (2006),
Optimal Extracting of Pachyman from Poria cocos Peels,Yunan College of
Traditional Chinese Medicine.
Nguồn từ Internet 23. http://en.wikipedia.org/wiki/Polysaccharide (updated: 11/10/2013) 1. 24. http://danhba.bacsi.com/category/nha-thuoc/location/thua- thien-hue/ (updated: 5/3/2014) 25. http://www.howdor.com/extract/Poria-extract.asp (updated: 20/10/2013) 26. http://duoclieu.hup.edu.vn/?p=1094 (updated: 16/11/2013)
ST T
Ngày thu mẫu Dạng sơ chế của dược liệu Nơi lấy mẫu (phường) 1 30/9/2013 Phiến hình khối vuông dẹt An Cựu 2 29/9/2013 Phiến hình khối vuông dẹt An Cựu 3 30/9/2013 Phiến hình khối vuông dẹt An Cựu 4 29/9/2013 Phiến hình khối vuông dẹt An Cựu
5 15/9/2013 Phiến lát mỏng Kim Long
6 29/9/2013 Phiến hình khối vuông dẹt Kim Long
7 29/9/2013 Phiến lát mỏng Phú Cát
8 29/9/2013 Phiến hình khối vuông dẹt Phú Hòa 9 30/9/2013 Phiến hình khối vuông dẹt Phú Hòa 10 29/9/2013 Phiến hình khối vuông dẹt Phú Hòa 11 29/9/2013 Phiến hình khối vuông dẹt Phú Hòa 12 15/9/2012 Phiến hình khối vuông dẹt Phú Hòa 13 29/9/2013 Phiến hình khối vuông dẹt Phú Hòa 14 29/9/2013 Phiến hình khối vuông dẹt Phú Hòa 15 15/9/2013 Phiến hình khối vuông dẹt Phú Hòa 16 30/9/2013 Phiến hình khối vuông dẹt Phú Hội 17 29/9/2013 Phiến hình khối vuông dẹt Phú Hội 18 29/9/2013 Phiến hình khối vuông dẹt Phú Hội 19 15/9/2013 Phiến hình khối vuông dẹt Phú Hội
20 15/9/2013 Phiến lát mỏng Phường Đúc
21 30/9/2013 Phiến lát mỏng Phường Đúc
22 15/9/2013 Phiến hình khối vuông dẹt Phường Đúc 23 30/9/2013 Phiến hình khối vuông dẹt Tây Lộc
24 30/9/2013 Phiến lát mỏng Tây Lộc
25 29/9/2013 Phiến hình khối vuông dẹt Thuận Lộc
26 15/9/2013 Hình khối lớn Thuận Lộc
27 29/9/2013 Phiến hình khối vuông dẹt Thuận Thành 28 29/9/2013 Phiến hình khối vuông dẹt Thuận Thành
29 29/9/2013 Phiến lát mỏng Thuận Thành
30 29/9/2013 Phiến hình khối vuông dẹt Thuận Thành 31 15/9/2014 Phiến hình khối vuông dẹt Trường An
35 29/9/2013 Phiến hình khối vuông dẹt Vĩnh Ninh 36 29/9/2013 Phiến hình khối vuông dẹt Vĩnh Ninh 37 15/9/2013 Phiến hình khối vuông dẹt Xuân Phú 38 15/9/2013 Phiến hình khối vuông dẹt Xuân Phú 39 31/3/2014 Phiến hình khối vuông dẹt An Cựu 40 31/3/2014 Phiến hình khối vuông dẹt An Cựu 41 31/3/2014 Phiến hình khối vuông dẹt An Cựu 42 31/3/2014 Phiến hình khối vuông dẹt An Cựu
43 31/3/2014 Phiến lát mỏng Kim Long
44 31/3/2014 Phiến hình khối vuông dẹt Kim Long
45 3/3/2014 Phiến lát mỏng Phú Cát
46 3/3/2014 Phiến hình khối vuông dẹt Phú Hòa 47 31/3/2014 Phiến hình khối vuông dẹt Phú Hòa 48 31/3/2014 Phiến hình khối vuông dẹt Phú Hòa 49 31/3/2014/ Phiến hình khối vuông dẹt Phú Hòa 50 3/3/2014 Phiến hình khối vuông dẹt Phú Hòa 51 30/3/2014 Phiến hình khối vuông dẹt Phú Hòa 52 10/3/2014 Phiến hình khối vuông dẹt Phú Hòa 53 31/3/2014 Phiến hình khối vuông dẹt Phú Hòa 54 3/3/2014 Phiến hình khối vuông dẹt Phú Hội 55 3/3/2014 Phiến hình khối vuông dẹt Phú Hội 56 31/3/2014 Phiến hình khối vuông dẹt Phú Hội 57 31/3/2014 Phiến hình khối vuông dẹt Phú Hội 58 31/3/2014 Phiến hình khối vuông dẹt Phước Vĩnh 59 30/3/2014 Phiến hình khối vuông dẹt Phước Vĩnh
60 10/3/2014 Phiến lát mỏng Phường Đúc
61 31/3/2014 Phiến lát mỏng Phường Đúc
62 31/3/2014 Phiến hình khối vuông dẹt Phường Đúc
63 31/3/2014 Phiến lát mỏng Tây Lộc
64 31/3/2014 Phiến hình khối vuông dẹt Tây Lộc
65 30/3/2014 Hình khối lớn Thuận Lộc
66 30/3/2014 Phiến hình khối vuông dẹt Thuận lộc 67 10/3/2014 Phiến hình khối vuông dẹt Thuận Thành 68 30/3/2014 Phiến hình khối vuông dẹt Thuận Thành 69 31/3/2014 Phiến hình khối vuông dẹt Thuận Thành
70 30/3/2014 Phiến lát mỏng Thuận Thành
74 31/3/2014 Phiến hình khối vuông dẹt Vĩnh Ninh 75 3/3/2014 Phiến hình khối vuông dẹt Vĩnh Ninh 76 30/3/2014 Phiến hình khối vuông dẹt Vĩnh Ninh 77 30/3/2014 Phiến hình khối vuông dẹt Xuân Phú
Lưu ý:
• Từ 1-38: mẫu thu vào tháng 9/2013 • Từ 39-77: mẫu thu vào tháng 23/2014