Chuẩn bị ống nghiệm ựựng sữa, ống nghiệm phải ựược ựánh bằng chữ A,B,C,D và hấp sấy vô trùng. Nguyên tắc ựánh ký hiệu bằng chữ như sau:
A. Vú phải trước B. Vú phải sau C. Vú trái trước D. Vú trái sau
Khi bầu vú ựã ựược rửa sạch dùng bông thấm cồn 70oC sát trùng núm vú. Trước khi vắt sữa bỏ mấy giọt sữa ựầu, sau ựó lấy mẫu sữa vào ống nghiệm chú ý tránh núm vú chạm vào miệng ống nghiệm. Vắt sữa vào ống nghiệm vô trùng theo ựúng thứ tự ở trên.
Trước khi sử dụng làm ấm sữa bằng cách ngâm vào nước ấm 370C trong khoảng 15 phút rồi lắc mạnh khoảng 25 lần trong 7 giây ựể mẫu sữa tan, trước khi sử dụng trộn lại vài lần.
2.4.2. Phương pháp kiểm tra vi khuẩn trong sữa.
Mẫu sữa sau khi xử lý ựược tiến hành theo sơ ựồ sau: Sơ ựồ xét nghiệm vi khuẩn hiếu khắ
Sơ ựồ kiểm tra vi khuẩn trong sữa (theo Carter G.R, 1995)
CMT California Mastitis Mẫu sữa ựã xử lý Phiết kắnh nhuộm Methylene blue, ựếm tế bào bạch cầu Ly tâm 2500-3000 vòng/phút trong 15 phút, lấy cặn
Thạch máu (B.A)
Chọn những khuẩn lạc khác nhau, làm tiêu bản nhuộm gram, kiểm tra hình thái
Tiến hành một số phản ứng ựặc biệt ựể nhận biết, phân lập trên các môi trường ựặc biệt, kiểm tra ựặc tắnh sinh
Sơ ựồ phân lập Streptococcus và Staphylococcus
(Theo Trung tâm chẩn ựoán thú y Trung ương)
` Cặn sữa Thạch máu (B.A) Gram Catalase (-), khuẩn lạc nhỏ, trong suốt Edward medium Streptococcus (khuẩn lạc tròn, nhỏ, trong, dạng S) Giám ựịnh
Kiểm tra ựặc tắnh nuôi cấy (Thạch thường, nước thịt,
thạch máu)
Kiểm tra ựặc tắnh sinh hóa
Catalase (-), khuẩn lạc to, ựục trắng hoặc vàng có thể
có
Staphylococcus medium (hoặc Sapman)
Staphylococcus (Môi trường có màu vàng)
Giám ựịnh
Kiểm tra ựặc tắnh nuôi cấy (Thạch thường, nước thịt,
gelatin)
Kiểm tra ựặc tắnh sinh hóa
* Phương pháp giám ựịnh một số vi khuẩn
Sau khi nhận biết khuẩn lạc của vi khuẩn trên thạch máu và các ựặc ựiểm hình thái của chúng, tiến hành kiểm tra các ựặc tắnh sinh hóa cơ bản, sử dụng một số biện pháp ựể phân biệt một số loài vi khuẩn gây bệnh chắnh.
+ Phương pháp ựịnh danh Steptococcus gây viêm vú bò sữa:
Phương pháp CAMP: phản ứng CAMP sử dụng ựể phân biệt các Steptococcus nhóm B (các Steptococcus gây bệnh viêm vú bò thuộc nhóm B). Phản ứng dựa trên nguyên lý: Steptococcus nhóm B sản sinh một chất có thành phần giống Protein ựược gọi là CAMP factor, nó có thể cộng hoạt với tốc ựộ β Hemolysin của Staphylococcus aureus tạo ra một vòng dung huyết hoàn toàn, hình mũi tên trên vùng dung huyết không hoàn toàn (β) của Staphylococcus aureus.
Ngày nay, phản ứng CAMP ựược cải tiến bằng cách cho thêm vào môi trường làm phản ứng 0,1% Esculinvà 0,01% Ferric Citrat ựể xác ựịnh các Steptococcus có khả năng phân giải Esculin và phản ứng ựược gọi là CAMP- Esculin test.
Tiến hành: Cấy một ựường thẳng Staphylococcus aureus chủng chuẩn (dung huyết 2 vòng α và β) chia ựôi ựĩa thạch (0,1% Esculin và 0,01% Ferric Citrat). Sau ựó cấy các Streptococcus cần phân biệt theo hướng vuông góc và cách ựường cấy Staphylococcus trên từ 2-3mm. Bồi dưỡng ở 37 0C/24h (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Kết quả CAMP (+): Xuất hiện vùng dung huyết hoàn toàn hình mũi tên nơi tiếp giáp giữa ựường cấy Steptoccocus với vùng dung huyết β của staphylococus aureus.
CAMP- Esculin test cho phép phân biệt các loại Streptococcus theo bảng sau:
Vi khuẩn CAMP Esculin Dung huyết
Strep. agalactiae + - α,β
Strep.dysgalactiae - - Α
Strep- uberis (-) hoăc (+) + O,α,γ
+ Phương pháp ựịnh danh một số loại Staphylococcus.
Staphylococcus bao gồm các chủng gây bệnh của Straphylococcus aureus ựã ựược xác ựịnh là men Coagulase ựược sinh ra trong quá trình sống. Người ta có thể
dựa vào sự có mặt của men này ựể phân biệt các Straphylococus gây bệnh với Staphylococcus khác. Phản ứng dùng ựể phân biệt này gọi là Coagulase test.
- Nguyên lý của phản ứng: Các chủng Staphylococcus aureus trong quá trình sống có khả năng tiết ra một loại men Coagulase phân giải Fibrinogen thành Fibrin làm ựông huyết tương của một số ựộng vật.
- Phản ứng Coagulase trên phiến kắnh: Chuẩn bị ựĩa cấy vi khuẩn cần phân biệt, nước sinh lý trên một lam kắnh vô trùng, dùng que cấy lấy một vùng huyết tương thỏ Citrat hóa trộn ựều với hỗn hợp trên. Nếu phản ứng dương tắnh thì hiện tượng ựông vón sẽ xuất hiện sau vài giây.
2.4.3. Phương pháp kiểm tra viêm vú phi lâm sàng bằng thuốc thử CMT (California Mastitis Test)
Dụng cụ: - Khay thử CMT (có 4 ô riêng biệt)