3.5.3.1 Nguyên tắc:
Mẫu được đồng nhất hóa được cấy một lượng nhất định lên môi trường tăng sinh BGBL. Sau đó phân lập sang môi trường EMB và khẳng định bằng các thử nghiệm trong nghiệm pháp IMViC.
Phương pháp định tính này giúp ta kết luận phát hiện hay không phát hiện
3.5.3.2 Môi trường nuôi cấy và thuốc thử
- Dung dịch pha loãng saline peptone water - Brilliant green bile lactose broth (BGBL) - Eosin Methyl blue agar (EMB)
- Trypton Soya Agar (TSA) - Tryptone broth
- Methyl Red – Voges Proskauer broth (MR – VP broth) - Simmons Citrate
- Thuốc thử Kovac,s - Thuốc thử Methyl red
- Dung dịch α – napthol 5% trong cồn tuyệt đối - Dung dịch KOH 40%
Quy trình: Quy trình định tính E. coli gồm các bước sau:
- Cấy tăng sinh: Hút 1ml dịch mẫu đã pha loãng ở nồng độ 10-1 cấy vào ống nghiệm có chứa 10ml môi trường tăng sinh BGBL, ủ ở 440C/24 giờ. Quan sát thấy ống nghiệm có sinh hơi trên bề mặt môi trường, và trong ống Durham, môi trường chuyển sang đục, đây là những mẫu dương tính.
- Phân lập: Chọn ống cho kết quả dương tính, dùng que cấy vòng cấy phân lập sang môi trường EMB, ủ 370C /24 giờ.
- Tiếp theo ta nhận dạng khuẩn lạc: Trên môi trường EMB, E. coli cho khuẩn lạc có ánh kim, tròn, dẹt bờ đều, đường kính khoảng 0,5mm.
- Khẳng định: Chọn ít nhất 2 khuẩn lạc nghi ngờ ở môi trường phân lập, cấy sang môi trường rắn không chọn lọc TSA, ủ ở 370 C/24 giờ. Cấy sang môi trường thử nghiệm sinh hóa. E. coli cho kết quả thử nghiệm sinh hóa là:
Các thử nghiệm : Kết quả
Indol +
Methyl red +
Voges Proskauer -
Simmons Citrate -
Chương 4
KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN