Tỉnh/thành Số mẫu Phú Thọ 20 Hà Nam 20 Thái Bình 25 Nam định 30 Quảng Ninh 20 Hải Phòng 20 Tổng số 135
Ghi chú: Chương trình ựang triển khai, chưa kết thúc.
2.3.4.2. Phân tắch sàng lọc
- Từng mẫu ựược ựồng nhất, tiến hành cân 3,0g ổ 0,1g mỗi mẫu ựã cho vào ống ly tâm. Từng lô mẫu có bố trắ 01 mẫu trắng và 01 mẫu thêm chuẩn.
- Tiếp theo chiết và làm sạch mẫu theo quy trình ựược lập dựng. - Dịch chiết cuối cùng ựưa vào tiến hành ELISA và tắnh toán kết quả.
2.3.4.3. Phân tắch khẳng ựịnh
Các mẫu dương tắnh bằng phương pháp sàng lọc ựược phân tắch khẳng ựịnh bằng LCMSMS theo quy trình nói trên.
- Từng mẫu ựược ựồng nhất, tiến hành cân 5,0g ổ 0,1g mỗi mẫu ựã cho vào ống ly tâm. Thêm 50 ộl dung dịch chuẩn nội β-agonists (salbutamol-d3, clenbuterol-d9) 100ppb, ựể yên 15 phút (tương ứng nồng ựộ nội chuẩn trong mẫu là 1ppb). Từng lô mẫu có bố trắ 01 mẫu trắng và 01 dương tắnh.
- Tiếp theo chiết và làm sạch mẫu theo quy trình ựược lập dựng.
2.3.4.4. Xác ựịnh yếu tố nguy cơ liên quan tới tồn dư β-agonists (clenbuterol và salbutamol) trong thịt lợn.
2.3.5. Phương pháp phân tắch số liệu
- Phần mền Masslyns 4.1 (lập dựng ựường chuẩn và tắnh kết quả phân tắch mẫu) cho phân tắch ựịnh lượng.
- Phần mền KC (lập dựng ựường chuẩn và tắnh kết quả phân tắch mẫu) cho phân tắch ựịnh tắnh.
- đánh giá phê duyệt phương pháp theo quyết ựịnh 657/2002/EC của EC. - Nhập và bảo quản số liệu bằng chương trình Excel.
- Phân tắch thống kê với các ựặc trưng sau: Giá trị trung bình ∑ = = n i xi n x 1 1 Tắnh ựộ lệch chuẩn (SD): Trong ựó: Tắnh ựộ thu hồi, R%
Trong ựó: R%: độ thu hồi, %
Cc: Nồng ựộ chuẩn thêm (lý thuyết)
Ctt: Nồng ựộ chất phân tắch trong mẫu trắng thêm chuẩn
Tắnh ựộ lệch chuẩn tương ựối RSD (CV)
Trong ựó: SD: độ lệch chuẩn n: Số lần thắ nghiệm
xi: Giá trị tắnh ựược của lần thử nghiệm thứỘiỢ x: Giá trị trung bình của các lần thử nghiệm RSD%: độ lệch chuẩn tương ựối
CV%: Hệ số biến thiên
- Phân tắch thống kê phân tắch bằng thử nghiệm:
* Thử nghiệm t-student ựể ựánh giá ựộ ựúng. Tắnh ttn (t thực nghiệm) theo công thức: trong ựó ộ là giá trị thực của ựại lượng cần xem xét, n là số lần thực nghiệm. So sánh ttn với t(f=0,95, n-1) tra bảng t-student.
* Dùng F-test ựể so sánh sự chắnh xác về kết quả giữa 2 phòng thắ nghiệm, phân tắch phương sai.
* Dùng hàm ANOVA ựể phân tắch hồi quy tuyến tắnh.
* Thống kê mô tả: sử dụng tỷ lệ phần trăm EpiCalc 2000 phiên bản 1.02 ựể xác ựịnh khoảng tin cậy. Thử nghiệm KhiỜbình phương ựể so sánh tỷ lệ % mẫu phát hiện thấy β-agonists.
Chương 3
KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.1. Kết quả chuẩn hóa phương pháp phân tắch
3.1.1. Kết quả chuẩn hóa phương pháp phân tắch ựịnh tắnh β-agonists (phương pháp sàng lọc ELISA)
3.1.1.1. Kết quả kiểm tra tắnh ổn ựịnh của kắt
Kiểm tra tắnh ổn ựịnh của kắt β-agonists ựã thực hiện theo hướng dẫn của nhà sản xuất. Hình ảnh dưới ựây là biểu thị mối tương quan giữa nồng ựộ chuẩn β-agonists và ựộ hấp thụ của kit (hình 3.1).
Hình 3.1. đường chuẩn biểu thị mối tương quan giữa nồng ựộ chuẩn β-agonists và ựộ hấp thụ
Thắ nghiệm lập lại 5 lần trên 5 bộ kắt thuộc 5 lô vào 5 ngày khác nhau. Lập lại thắ nghiệm này với phần còn lại của bộ kắt ựược bảo quản ở nhiệt ựộ 2-8oC trong thời gian 30 ngày theo hướng dẫn của nhà sản xuất. Kết quả trình bày trong bảng 3.1:
Beta-agonist