Lá Sen chứa nhiều hợp chất khác nhau trong đó nhóm alkaloid và flavonoid được
xem là hai thành phần chính chiếm tỉ lệ tương đối lớn và cho tác dụng sinh học chủ yếu. Ngoài ra, các hợp chất khác như: tanin, saponin, đường khử, các acid hữu cơ (acid palmitic, acid citric, acid tartric, acid succinic, acid ascorbic,…), các terpen steroid (β-sitostenon, stigmasta-4,22-dien-3-on,…), các tinh dầu trans-caryophyllen, trans-isolimonen, 4-methyl-1-isopropyl-3-cyclohexen-1-ol,
camphor, 2-acetylen-1-alcohol, chất béo, sáp, chất nhày cũng được tìm thấy trong lá Sen. [7], [114],[116]
1.2.1.1. Thành phần alkaloid
Hàm lượng alkaloid toàn phần của lá Sen chiếm từ 0,77 - 0,84% tùy theo điều kiện khí hậu, thổ nhưỡng. Có khoảng 15 alkaloid đã được xác định. Các alkaloid trong lá Sen có cấu trúc isoquinolin bao gồm các phân nhóm aporphin, proaporphin, benzylisoquinolin và bisbenzylisoquinolin.
Alkaloid khung aporphin: các alkaloid có cấu trúc aporphin chiếm phần lớn về tỉ lệ cũng như số lượng trong alkaloid toàn phần của lá Sen. Các alkaloid đã biết thuộc nhóm này được trình bày ở Bảng 1.2.
8
Bảng 1.2. Các alkaloid khung aporphin có trong lá Sen[7], [8],[10], [114], [117]
Alkaloid khung proaporphin: alkaloid thuộc nhóm này chỉ có một alkaloid là
pronuciferin (C19H21NO3). Chất này có thể chuyển thành nuciferin trong môi trường acid.[17], [43]
pronuciferin nuciferin
Alkaloid khung benzylisoquinolin: alkaloid thuộc nhóm này trong lá Sen được biết
với 04 alkaloid điển hình là armepavin, N-norarmepavin, N-methyl coclaurin và N-methyl isococlaurin.
Bảng 1.3. Các alkaloid khung benzylisoquinolin có trong lá Sen [36], [83], [92]
CTPT R1 R2 R3
N
O H R1O
R2O R3
Armepavin C19H23NO2 -CH3 -CH3 -CH3
N-methyl coclaurin C18H21NO3 -CH3 -H -CH3
N-methyl isococlaurin C18H21NO3 -H -CH3 -CH3
N-norarmepavin C18H21NO3 -CH3 -CH3 -H
Alkaloid khung bisbenzylisoquinolin: alkaloid thuộc nhóm này trong lá Sen được biết với neferin, isoliensinin với hàm lượng thấp. Cấu trúc hai chất này được trình bày ở Bảng 1.5[7].
CTPT R1 R2 R3
N H R1O
R2O R3
Nuciferin C19H21NO2 -CH3 -CH3 -CH3
N-nor-nuciferin C18H19NO2 -CH3 -CH3 -H O-nor-nuciferin C18H19NO2 -H -CH3 -CH3
Lirinidin C18H19NO2 -CH3 -H -CH3
Roemerin C18H17NO2 -CH2- -CH3
Anonain C17H15NO2 -CH2- -H
Dehydronuciferin C19H19NO2 -CH3 -CH3 -CH3
N R1O
R2O OR3
Dehydroroemerin C18H15NO2 -CH2- -CH3
Dehydroanonain C17H13NO2 -CH2- -H
9
Ngoài ra, trong lá Sen còn có cepharadion B và lysicamin [114].
Liriodenin Lysicamin Cepharadion B Tính chất của một số alkaloid chính trong lá Sen [114], [116]
Nuciferin: dạng base, là tinh thể hình lăng trụ không màu, tnc: 163-164 oC, góc quay cực ở 27o là +145 o (c = 0,67 %; EtOH), phát huỳnh quang xanh lục sáng
ở 245 nm. Phổ UV có ba cực đại hấp thu trong dung môi EtOH lần lượt là 311 nm, 271 nm và 232 nm với giá trị logɛ lần lượt là 3,83; 4,32 và 4,36.
N-nornuciferin: dạng base là một chất lỏng như dầu, dạng muối chlorid là tinh thể không màu, tnc: 156 – 157 oC, góc quay cực ở 27 o là +144 o (c = 0,5 %; EtOH). Phổ UV có ba cực đại hấp thu trong dung môi EtOH lần lượt là 311 nm, 271 nm, 230 nm với giá trị logɛ lần lượt là 3,67; 4,43 và 4,37.
N-norarmepavin: kết tinh ở dạng muối oxalat là tinh thể hình kim không màu, tnc: 209 – 210 o C, αD27= + 20 o (c= 0,2%; MeOH). Phổ UV có ba cực đại hấp thu
trong dung môi EtOH lần lượt là 254 nm, 283 nm, 227 nm.
1.2.1.2. Thành phần flavonoid
Hàm lượng flavonoid toàn phần của lá Sen từ 0,67-0,89 % có khi lên đến 1,64 % tùy theo điều kiện khí hậu, thổ nhưỡng. Có khoảng 16 flavonoid đã được xác định trong lá Sen. Flavonoid trong lá Sen thuộc các nhóm flavonol, flavon,
catechin, leucoanthocyanidin, trong đó hàm lượng cao nhất được tìm thấy là quercetin 3-O-β-D-glucuronid [7], [8]
Nhóm flavonol: Chiếm tỉ lệ lớn trong các flavonoid với hàm lượng nhiều hơn của các aglycon như: myricetin, quercetin, kaempferol, isorhamnetin và các glycosid với đường glucosyl, rhamnosyl như: myricetin 3-O-β-D-glucopyranosid, quercitrin,
isoquercitrin, hyperin, rutin, kaempferol 3-O-β-D-glucosepyranosid,
10
isorhamnetin 3-O-α-L-rhamnopyranosyl, isorhamnetin 3-O-β-D-glucopyranosid, isorhamnetin 3-O-α-D-lyxopyranosyl-O-β-D-glucopyranosid.[7], [99], [118], [39]
Nhóm flavon: Các dẫn chất flavon chiếm tỉ lệ nhỏ với hàm lượng thấp của luteolin và luteolin O-β-D- glucopyranosid. [109]
Nhóm catechin: Các dẫn chất catechin điển hình là catechin. [7], [29], [39]
Nhóm leucoanthocyanidin: Các dẫn chất leucocyanidin điển hình là leucodelphenidin, leucocyanidin chiếm hàm lượng rất thấp trong lá Sen [7] .
1.2.2. Hóa học của tâm Sen
Hầu hết các nghiên cứu về thành phần hóa học của tâm Sen đều tập trung vào các alkaloid, là thành phần chính chiếm tỉ lệ lớn và được cho là có nhiều tác dụng sinh học nhất trong tâm Sen. Chỉ có một vài công trình nghiên cứu về thành phần
flavonoid và các chất khác trong tâm Sen như: asparagin, tanin, triterpen, đường khử, các acid hữu cơ [7], [8].
1.2.2.1. Thành phần alkaloid của tâm Sen
Tâm Sen có hàm lượng alkaloid toàn phần khoảng từ 0,85 - 0,96 % và thay đổi
theo điều kiện khí hậu, thổ nhưỡng. Có khoảng 12 alkaloid được biết trong tâm Sen, bao gồm các alkaloid khung bisbenzylisoquinolin, tetrahydroisoquinolin,
benzylisoquinolin, aporphin, proaporphin. Hàm lượng alkaloid cao nhất trong tâm Sen, được tìm thấy là isoliensinin hoặc neferin tùy vùng khí hậu và thổ nhưỡng[7],[8].
Alkaloid khung benzylisoquinolin: Các alkaloid thuộc nhóm này được trình bày trong Bảng 1.4.
Bảng 1.4. Các alkaloid khung benzylisoquinolin có trong tâm Sen [8], [24],[34], [35], [48]
CTPT R1 R2 R3 R4
N-methyl coclaurin C19H23NO2 -CH3 -H -CH3 - N- demethyl coclaurin C19H23NO2 -H -H -H - N-methyl isococlaurin C19H23NO2 -H -CH3 -CH3 -
Lotusin C19H23NO2 -CH3 -H -CH3 -CH3
Alkaloid khung aporphin và proaporphin: Các dẫn chất này bao gồm nuciferin, roemerin và pronuciferin[17], [43].
11
Alkaloid khung bisbenzylisoquinolin: Các alkaloid thuộc nhóm được trình bày trong Bảng 1.5.
Bảng 1.5. Các alkaloid khung bisbenzylisoquinolin có trong tâm Sen [7], [15], [18] , [23]
CTPT R R1 R2
Neferin C38H44N2O6 -CH3 -H -CH3
Liensinin C37H42N2O6 -CH3 -H -H Isoliensinin C37H42N2O6 -H -H -CH3
Alkaloid khung tetrahydroisoquinolin: chỉ có một dẫn chất duy nhất là methylcorypallin [8].
Alkaloid khác: Các dẫn chất này bao gồm proto alkaloid kiểu phenylalkylamin [7].
Cinnamoyl-4-(2-aminoethyl)phenol Tính chất của một số alkaloid phân lập từ tâm Sen [34],[36],[110]
Neferin: Công thức phân tử: C38 H44N2O6. Khối lượng phân tử: 624,77. Bột kết tinh
màu trắng, tnc: 60 – 61 oC. Góc quay cực: -100 o (c = 0,24%; MeOH).
Neferin dạng base tan nhiều trong dung môi hữu cơ kém phân cực, kém tan trong nước, max: 282 nm (MeOH).
Liensinin: Công thức phân tử: C37H42N2O6. Khối lượng phân tử: 610,74. Dạng rắn màu trắng vô định hình, tnc: 95 – 99 o C. Góc quay cực: +15,85 o (c = 0,88%;
aceton). Liensinin dạng base tan nhiều trong dung môi hữu cơ kém phân cực, kém tan trong nước, max: 278 nm (MeOH).
Isoliensinin: Công thức phân tử: C37H42N2O6. Khối lượng phân tử: 610,74.
Dầu không màu hoặc tinh thể vàng nhạt. tnc: 69 – 71 oC. Góc quay cực: +50,68 o (c = 0,30%; aceton). Isoliensinin dạng base tan nhiều trong dung môi hữu cơ kém phân cực, kém tan trong nước, max: 284 nm (MeOH).
12 1.2.2.2. Thành phần flavonoid
Cho đến nay, mới chỉ có một vài nghiên cứu về thành phần flavonoid trong tâm Sen.
Các flavonoid được biết trong tâm Sen thuộc nhóm flavonol (rutin, kaempferol, hyperin) và nhóm catechin (catechin) [16],[24].
1.3. CHIẾT XUẤT VÀ PHÂN LẬP CÁC THÀNH PHẦN ALKALOID VÀ FLAVONOID TRONG LÁ, TÂM SEN
Đã có nhiều công trình nghiên cứu trên thế giới về chiết xuất và phân lập các alkaloid, flavonoid trong lá, tâm Sen bằng nhiều kỹ thuật khác nhau, từ những kỹ thuật đơn giản đến phức tạp, như được trình bày trong Bảng 1.6.
Bảng 1.6. Tóm tắt các nghiên cứu về chiết xuất phân lập alkaloid, flavonoid trong lá và tâm Sen.
STT TLTK Hợp chất phân lập được Kỹ thuật ứng dụng Phân lập alkaloid từ lá Sen loài Nelumbo lutea Willd.
1 [48]
Nuciferin, armepavin, N-norarmepavin, N-nornuciferin
Phân lập nuciferin và N-nornuciferin bằng sắc ký cột cổ điển (pha tĩnh:
alumina trung tính, pha động:
benzen- aceton).
Phân lập (-)-N-norarmepavin bằng 2 phương pháp: kết tinh dưới dạng muối oxalat và sắc ký cột (pha tĩnh: alumina trung tính, pha động: aceton- methanol).
Phân lập được (±)-armepavin bằng sắc ký lớp mỏng chế hóa kết hợp sắc ký cột với điều kiện sắc ký như phân lập (-)-N- norarmepavin.
Phân lập alkaloid từ lá Sen loài Nelumbo nucifera Gaertn.
2 [62] Nuciferin, roemerin Sắc ký cột cổ điển pha thuận 3 [63] Nuciferin, nor-nuciferin, roemerin Sắc ký cột pha thuận cổ điển
4 [83] dl-Armepavin Sắc ký cột pha thuận cổ điển
5 [46] Pronuciferin, liriodenin, annonain, demethyl coclaurin
Sắc ký cột pha thuận cổ điển.
6 [5] Nuciferin
Sắc ký lớp mỏng điều chế với bản mỏng silica gel G và hệ dung môi khai triển toluen-aceton-cồn tuyệt đối-amoniac (45:45:7:3)
7 [6],[9] Nuciferin Sắc ký cột pha thuận cổ điển
8 [99] (R)-Coclaurin, N-methyl coclaurin, (S)-Norcoclaurin
Sắc ký cột với với các loại pha tĩnh khác nhau: Dianion HP20, Sephadex LH- 20, MCI-gel CHP20P. Hệ dung môi rửa giải là H2O-MeOH (10 :1)
9 [53] Nuciferin (độ tinh khiết >98%) HPLC điều chế 10 [117] Nuciferin,
N-Nornuciferin, O-nornuciferin
Sắc ký cột sử dụng resin hấp phụ kích thước lớn
13
11 [50] Nuciferin, O-nornuciferin, roemerin Màng nhũ tương lipid 12 [86] Nuciferin, roemerin,
N-methylasimilobin, anonain
Sắc ký cột cổ điển với hệ dung môi benzen-aceton, pha tĩnh silica gel,
với O-nornuciferin sử dụng pha tĩnh alumina
13 [72]
Anonain, pronuciferin, N-nornuciferin, nuciferin, nornuciferin
Chiết bằng cồn 90% acid (pH 2) ở 80 oC, cao cồn được hòa tan trong HCl 0,25 %, kiềm hóa và xử lý dịch kiềm qua nhựa trao đổi anion để thu dịch alkaloid sạch hơn. Sau đó qua cột cổ điển hấp phụ để thu 5 alkaloid.
14 [116]
Nuciferin, liriodenin, 2-hydroxy-1-methoxyaporphin, pronuciferin, dehydroroemerin, dehydronuciferin, roemerin
Kết hợp phương pháp chiết phân bố, nhựa trao đổi ion và sắc ký cột cổ điển 15 [122] Nuciferin, N-nornuciferin,
O-nornuciferin
Chiết hỗ trợ siêu âm dựa trên pha lỏng ionic (ILMAE)
16 [43] N-Nornuciferin, armepavin, anonain, pronuciferin, nuciferin
Sắc ký ngược dòng tốc độ cao (HSCCC)
với hệ dung môi của 2 pha gồm PE- EtOAc-MeOH-nước (3:5:3:5) cho
N-nornuciferin, armepavin và 1:5:1:5 cho anonain, pronuciferin và nuciferin.
17 [44]
Nuciferin, dehydronuciferin, N-nornuciferin, O-nornuciferin, roemerin,
Chiết bằng lưu chất siêu tới hạn CO2 (2 giờ, 70 oC, áp suất 30 Mpa)
18 [118]
Nuciferin (1020 mg), O-nornuciferin (120 mg), roemerin (96 mg)
Sắc ký ngược dòng liên tục với vùng pH xác định (pH-Zone-refining CCC) với
hai pha không đồng tan từ hệ PE-EtOAc-MeOH-nước (5:5:2:8), thêm triethylamin (10 mM) vào pha hữu
cơ trên như là chất lưu giữ và HCl 5 mM vào pha nước như là chất rửa giải.
19 [92]
Nuciferin (45,3 mg; 96%), roemerin (26,6 mg; 92%), N- demethylarmepavin (7,4 mg; 90%)
Sắc ký ngược dòng liên tục với vùng pH xác định với hai pha không đồng tan từ hệ hexan: EtOAc-MeOH-H2O (1:6:1:6) thêm triethylamin (10 mM) vào pha hữu cơ trên như là chất lưu giữ (retainer),
và HCl 5 mM vào pha nước như là chất rửa giải
Phân lập flavonoid từ lá Sen loài Nelumbo nucifera Gaertn.
1 [119] Quercetin, myricetin, kaemferol-3O-
glc, isoquercitrin, luteolin 7-O-glc Sắc ký cột cổ điển 2 [82] Isoquercitrin, hyperosid, astragalin.
HPLC điều chế với cột Symmetry Prep C18, pha động: nước-acetonitril, tốc độ dòng 5 mL/phút
3 [66] Catechin, quercetin, isoquercitrin,
hyperosid, rutin, astragalin. Sắc ký cột cổ điển 4 [75]
Isoquercitrin: 6 mg (96%) Hyperosid: 9,1 mg (97,5%) Astragalin: 3 mg (98,3%)
HSCCC: Hệ thống hai pha n-hexan- EtOAc- MeOH- H2O (1:5:1:5). Xác định độ tinh khiết bằng HPLC/PDA
5 [78] Quercetin 3-O-D-GlcA, rutin Sắc ký cột cổ điển
6 [81] Quercetin 3-O-D-GlcA: 6,1 mg HSCCC: Hệ thống hai pha EtOAc-
14 (97 %)
Astragalin: 20,2 mg (95,4 %)
Myricetin 3-O-β-D-glucopyranosid:
14,18 mg (96,2 %)
Ethanol- H2O- acid acetic (4:1:5:0,025).
Kiểm tra độ tinh khiết bằng HPLC.
7 [10] Thiết lập chất đối chiếu, kaempferol,
nuciferin (độ tinh khiết 98,9 %) Sắc ký cột cổ điển pha thuận
8 [109]
10 Octacosanol; 3,7,8-trimethoxy-1- hydroxy xanthon; rhamnetin 3-O-β- D-glucopyranosid; chrysoeriol 7-O- β-D-glucosid (9); quercetin 3-O-β- D-glucopyranosid; hyperosid;
quercetin 3-O-rutinoside;
astragalin;; isorhamnetin 3-O-α-D- lyxopyranosyl-β-D-
glucopyranoside; isorhamnetin 3-O- β-D-glucopyranoside; isorhamnetin 3-O-α-L-rhamnopyranosyl; β-D- glucopyranosid; quercetin;
kaempferol; dehydronuciferin;
roemerine; stigmast-7-en-3-O-β-D- glucopyranosid
Kết hợp sắc ký cột cổ điển pha thuận silica gel, cột Sephadex LH-20 và kỹ thuật HSCCC
Phân lập alkaloid từ tâm Sen loài Nelumbo nucifera Gaertn.
STT TLTK Hợp chất phân lập được Kỹ thuật ứng dụng 1 [18] Liensinin, kết tinh dưới dạng
muối liensinin perchlorat
Sắc ký cột cổ điển pha thuận 2 [61] Isoliensinin, kết tinh dưới dạng
muối isoliensinin HCl
Sắc ký cột cổ điển pha thuận
3 [32] Nuciferin, pronuciferin, lotusin Phương pháp chiết phân bố lỏng- lỏng kết hợp sắc ký cột pha thuận cổ điển
4 [35] Lotusin, demethyl coclaurin Dịch chiết n-butanol được nạp lên cột trao đổi cation Amberlit CG-50
5 [85] Isoliensinin, neferin, methylcorypallin
Chiết phân bố lỏng - lỏng kết hợp sắc ký cột pha thuận cổ điển dùng pha tĩnh Al2O3 với hệ dung môi benzen - chloroform
6 [107]
Lotusin, nuciferin, neferin, pronuciferin, liensinin và isoliensinin
Chiết phân bố lỏng - lỏng kết hợp sắc ký cột pha thuận cổ điển
7 [114] Liensinin perclorat và isoliensinin hydroclorid.
Chiết phân bố lỏng - lỏng kết hợp sắc ký cột pha thuận cổ điển
8 [95] Neferin, isoliensinin Sắc ký cột nhanh (FC) pha tĩnh silica gel, hệ dung môi: benzen- EtOAc-TEA (7:2:1) 9 [76]
Liensinin (100 mg),
isoliensinin (95 mg), neferin (350 mg) với độ tinh khiết trên 95 %
Sắc ký ngược dòng tốc độ cao (HSCCC) với hệ dung môi hai pha sử dụng EtOAc-CCl4 - MeOH-H2O (1:6:4:1)
10 [54] Neferin với độ tinh khiết 98,85 %
Sắc ký cột nhanh pha thuận
11 [36] Neferin, liensinin và isoliensinin
Sắc ký cột pha thuận cổ điển với dung môi rửa giải chloroform- methanol, nồng độ methanol tăng dần từ 1% đến 20%
12 [106] Neferin, liensinin, isoliensinin Sắc ký cột trao đổi ion trên 3 loại nhựa (AKS-W, AB-8 và H21)
15
13 [56] Neferin, liensinin, isoliensinin Chiết hỗ trợ vi sóng, sử dụng chất lỏng ionic 14 [57] Liensinin, isoliensinin, neferin Tinh khiết hóa dịch chiết tâm Sen qua 2 cột
trao đổi ion AKS –W và D72
15 [55] Neferin Sắc ký cột trao đổi ion LSA-5B, rửa giải bởi ethanol 50%
16 [87] Pronuciferin Chiết bằng lưu chất siêu tới hạn CO2 kết hợp sắc ký cột cổ điển
17 [18] Liensinin Chiết phân bố lỏng - lỏng kết hợp sắc ký cột pha thuận cổ điển
18 [74]
Neferin (58,4 mg), liensinin (18,4 mg), isoliensinin (19,6 mg)
Sắc ký ngược dòng tốc độ cao (HSCCC) với hệ dung môi hai pha: n-hexan-EtOAc- MeOH- H2O (5:8:4:5)
19 [118]
Liensinin (118 mg),
isoliensinin (151 mg), neferin (572 mg, độ tinh khiết trên 95 %)
Sắc ký ngược dòng tốc độ cao, hệ dung môi hai pha n-hexan-EtOAc-MeOH-H2O (5:5:2:8) với pha hữu cơ thêm triethylamin 10 mM và pha nước thêm HCl 5 mM.
20 [15]
Neferin, isoliensinin, liensinin và nelumboferin, nelumborin A và B
Sắc ký cột cổ điển với hệ dung môi khai triển CHCl3- MeOH-NH4OH.
Qua các tài liệu trên nhận thấy hầu như tất cả các kỹ thuật chiết xuất từ cổ điển đến hiện đại đã được sử dụng để chiết alkaloid, flavonoid có trong lá và tâm Sen
(Nelumbo nucifera Gaertn.):
Chiết xuất các cao alkaloid, flavonoid toàn phần
- Thu alkaloid toàn phần: hầu hết các nghiên cứu đều tiến hành chiết nguyên liệu Sen ban đầu theo phương pháp cổ điển là chiết ngâm lạnh, ngấm
kiệt hoặc chiết hồi lưu (HRE) với MeOH, EtOH (70 - 96%) hoặc với cồn acid để thu alkaloid toàn phần dạng muối, sau đó tiến hành kiềm hóa (NH4OH, NaOH) và chiết phân bố với chloroform, ether, n-butanol và cô dưới áp suất giảm. Một số trường hợp làm ẩm dược liệu với kiềm (NH4OH) và chiết trực tiếp bằng dung môi hữu cơ để thu alkaloid toàn phần dạng base.
- Thu flavonoid toàn phần: thường được chiết bằng MeOH, EtOH (70 – 96 %) hoặc có thể tẩm nguyên liệu với H2SO4 2 % sau đó chiết với EtOAc để thu được hầu hết các dạng của flavonoid. Sau đó làm bay hơi MeOH (cồn) hay EtOAc để thu được cao đặc.
- Một số nghiên cứu đã áp dụng các phương pháp chiết hiện đại hơn nhằm cải thiện hiệu suất chiết, rút ngắn thời gian chiết cũng như thu những phân đoạn
chứa alkaloid hay flavonoid sạch hơn như:
16
o Chiết hỗ trợ vi sóng (MAE) [105], chiết hỗ trợ vi sóng (ILMAE) với dung môi là chất lỏng ionic [122]
o Sử dụng nhựa resin hấp phụ kích thước lớn [117]
o Màng nhũ tương lipid [50]
o Chiết bằng lưu chất siêu tới hạn [87],[46]
Phân lập các alkaloid, flavonoid từ cao toàn phần
Sau khi thu được các alkaloid, flavonoid toàn phần, nhiều phương pháp đã được áp dụng cho việc phân lập các thành phần chính này trong đó phương pháp sắc ký
được sử dụng phổ biến với các loại pha tĩnh khác nhau như: silica gel, Sephadex
LH-20, Diaion HP-20, trao đổi ion, silica gel pha đảo,… với các hệ dung môi triển khai khác nhau từ phân cực trung bình đến phân cực.
1.4. CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH THÀNH PHẦN ALKALOID, FLAVONOID TRONG LÁ VÀ TÂM SEN.
Để phân tích thành phần alkaloid, flavonoid có trong lá, tâm Sen phương pháp phân tích thế tích, sắc ký lớp mỏng, UV-Vis đến các phương pháp hiện đại hơn như sắc ký lỏng hiệu năng cao với các loại đầu dò khác nhau hay phương pháp điện di mao quản đã được áp dụng và được trình bày trong Bảng 1.7.
Bảng 1.7. Tóm tắt các nghiên cứu định tính và định lượng alkaloid, flavonoid trong lá và tâm Sen.
STT TLTK Đối tượng phân tích Phương pháp ứng dụng Định tính và định lượng alkaloid trong lá Sen loài Nelumbo nucifera
1 [2] Alkaloid toàn phần Phương pháp chuẩn độ thể tích acid –base
2 [126] Nuciferin
Phương pháp SKLM- mật độ quang kế - Silica gel GF 254 có chứa NaOH 0,5 % - Hệ dung môi CHCl3-EtOAc-MeOH-H2O
(30:40:20:10)
- Bước sóng phát hiện 272 nm
- Giới hạn phát hiện của nuciferin: 0,5 μg/mL
3 [90]
N-nornuciferin, O-nornuciferin,
Nuciferin, Roemerin
Phương pháp HPLC-DAD-ESI/MS
- Cột VP-ODS (4,6 mm x 250 mm, 5 μm) - Pha động: Acetonitril- nước chứa 0,1 %
triethylamin
- Tốc độ dòng: 1 mL/phút - Bước sóng phát hiện: 280 nm
4 [60] Nuciferin Phương pháp HPLC/PDA
- Kromasil C18 (4,6 mm x 250 mm, 5 μm)
17
- Pha động: H2O-ACN-TEA-acid acetic băng (70,6:27:1,6:0,78)
- Tốc độ dòng: 1 mL/phút; nhiệt độ cột: 25
oC
- Bước sóng phát hiện: 280 nm - LOD của nuciferin 26,4 μg/mL
5 [124]
2-hydroxyl–1- Methoxyaporphin, Pronuciferin, Nuciferin, roemerin
Phương pháp HPLC/PDA
- Hypersil C18 (4,6 mm x 250 mm, 5 μm) - Pha động: ACN-TEA 0,1%, rửa giải
gradient
- Nhiệt độ cột: 35 oC; tốc độ dòng: 1 mL/phút
- Bước sóng phát hiện: 270 nm
6 [84] Nuciferin
Phương pháp HPLC/PDA
- Cột C18 (4,6 mm x 250 mm, 5 μm) - Pha động: H2O-ACN-acid acetic băng-
TEA (27:60:3:1)
- Tốc độ dòng: 1 mL/phút;
- Bước sóng phát hiện: 272 nm
7 [113]
Định tính điểm chỉ alkaloid, nuciferin được dùng làm chất đánh dấu sinh học để xác định các thành phần khác.
Áp dụng để kiểm soát chất lượng nguyên liệu lá Sen.
Phương pháp HPLC/PDA
- Diamonsil C18 (250 mm × 4,6 mm, 5 μm) - Pha động: MeOH-dung dịch acid
trifluoroacetic 0,01%, rửa giải gradient.
- Tốc độ dòng: 1,0 mL/phút - Nhiệt độ cột: 20 oC
- Bước sóng phát hiện: 270 nm.
Định tính và định lượng flavonoid trong lá Sen loài Nelumbo nucifera 8 [127]
Định tính và định lượng quercetin và nuciferin để chuẩn hóa chất lượng lá Sen.
- Định tính bằng SKLM
- Định lượng bằng HPLC/PDA
9 [39]
Quercetin, rutin, quercetin- glc, quercetin-gal, quercetin 3-O-GlcA.
Phương pháp HPLC/PDA
- Phenomenex C18 (25 cm x 2 mm, 3 àm) - Pha động: ACN-H2O chứa acid formic
0,1%, rửa giải gradient
10 [51] Định lượng đồng thời isoquercitrin và hyperin
Phương pháp HPLC/PDA
- Nova-Pak C18 (3,9 mm ì 150 mm, 5 àm) - Pha động: ACN-acid formic 0,1% (87:13) - Tốc độ dòng: 1,0 m/phút
- Bước sóng phát hiện: 255 nm - Nhiệt độ cột: 34°C
11 [71]
Định tính 13 flavonoid Định lượng đồng thời quercetin, rutin, quer 3-O- glc, quer 3-O-glcA, kaempferol 3-O-glc, isorhamnetin 3-O-glc
- Định tính bằng LC/ESI-MS/MS - Định lượng bằng HPLC-PDA/MS
o Cột Sunfire C18 (4,6x 150 mm; 3,5 àm)
o Pha động: HCOOH 0,5%- ACN chứa 0,1% acid formic, rửa giải gradient.
o Bước sóng phát hiện: 350 nm
o Điều kiện MS:
Thế ion hóa: 3,5 kV
Tốc độ dòng khí mang (N2): 11 lít/phút Nhiệt độ dòng khí : 350 oC;
Áp suất đầu phun: 45 psi Định tính và định lượng alkloid tâm Sen loài Nelumbo nucifera