CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU
3.1. Chiết xuất, phân lập, xác định cấu trúc alkaloid, flavonoid từ lá và tâm Sen
3.1.4. Xác định độ tinh khiết các alkaloid, flavonoid phân lập từ lá và tâm Sen
được tiến hành kiểm tra độ tinh khiết bằng SKLM và HPLC/PDA. Kết quả được trình bày ở Bảng 3.28.
Bảng 3.28. Độ tinh khiết các alkaloid, flavonoid, phân lập từ lá và tâm Sen (Nelumbo nucifera Gaertn.).
STT Chất phân lập
Tinh khiết SKLM
Tinh khiết trên HPLC/PDA (%) PTN-1
ISO/GLP
PTN-2 ISO/GLP
PTN-3
ISO 17025 PTN-4 Trung bình
1 LN-1 + 99,3 99,43 99,24 97,83 98,93
2 LN-2 + 96,65 96,57 96,49 96,85 96,64
3 LN-3 + 99,25 99,20 99,22
4 LN-4 + 95,57 96,25 95,91
5 LN-5 + 95,62 95,87 95,75
6 LN-6 + 95,57 95,49 95,53
7 LN-7 + 96,21 95,87 96,04
8 LN-8 + 97,36 97,36
9 LN-9 + 98,54 97,23
10 LN-10 + 98,58 98,20
11 LF-1 + 98,52 98,48 98,50
12 LF-2 + 99,10 98,96 99,03
13 LF-3 + 97,81 97,80 98,02 97,65 97,82
14 LF-4 + 98,72 98,63 98,68
15 LF-5 + 99,34 98,86 99,10
16 LF-6 + 99,69 99,54 99,62
17 LF-7 + 96,93 97,12 97,03
18 LF-8 + 96,85 97,10 96,98
19 EN-1 + 96,24 97,05 96,60 96,50 96,60
20 EN-2 + 95,23 96,16 96,30 96,81 96,13
21 EN-3 + 95,25 95,15 95,88 95,78 95,52
22 EN-4 + 98,24 98,10 98,20
23 EN-5 + 95,83 96,27 95,89
24 EN-6 + 98,16 98,16
25 EN-7 + 96,52 96,52
26 EN-8 + 98,45 98,45
27 EN-9 + 97,23 97,23
28 EN-10 + 98,34 98,34
29 EN-11 + 98,40 98,40
30 TF-1 + 97,38 97,82 97,60
31 TF-2 + 98,70 98,70
32 TF-3 + 97,20 98,14 97,67
33 TF-4 + 98,44 98,10 98,27
34 TF-5 + 98,72 97,89 98,31
35 TF-6 + 97,65 97,65
Nhận xét: Độ tinh khiết các chất phân lập được đều trên 95 % khi được kiểm tra bằng SKLM và HPLC/PDA.
64
3.1.5. Xác định cấu trúc các alkaloid và flavonoid phân lập 3.1.5.1. Xác định cấu trúc các alkaloid
Các tính chất lý hóa và các kết quả phổ học (UV, IR, MS, NMR) để xác định cấu trúc LN-1, LN-2, LN-3, LN-4, LN-5, LN-9, LN-10, được khảo sát và trình bày ở các Bảng 3.29, 3.30, 3.31, 3.32.
Hợp chất LN-1, LN-2, LN-3, LN-4 (dữ liệu phổ tham khảo PL-2.1, 2.2, 2.3, 2.4) Bảng 3.29. Dữ liệu tonc, 𝛼𝐷25, UV, MS của các alkaloid LN-1, LN-2, LN-3, LN-4.
LN-1 LN-2 LN-3 LN-4
Cảm quan Tinh thể hình lăng trụ không màu.
Tinh thể hình khối, không màu.
Tinh thể hình rẽ quạt, màu trắng.
Tinh thể hình kim, màu nâu nhạt.
Độ tan Dễ tan trong CHCl3, MeOH, không tan trong nước.
tonc 162-163 0C 173-174 0C 203-204 0C 121-123 0C [𝛼]24
𝐷 -145,6 0
(0,5%; EtOH)
-140,5 0 (0,5%; EtOH)
-176 0
(0,5%;MeOH) -
UV/MeOH λmax (nm)
Dạng phổ UV của alkaloid khung aporphin 310, 272, 232
IR (υ , cm-1) 2992, 2805, 1421,1372, 757
3296, 2995,805, 1587, 1448, 756
3315,2978, 2810, 1607,
1358, 757
3398, 2967, 1616, 1339, 756 ESI-MS (+)
ESI-MS (-)
[M+H]+ 296,01
[M+Na]+ 318,05 [M+H]+ 282,32 [M+H]+ 268,20 [M+H]+ 268,15 [M-H]- 266,10
M 295,01 281,25 267,20 267,11
Công thức nguyên C19H21NO2 C18H19NO2 C17H17NO2 C17H17NO2
Độ bất bão hòa 10 10 10 10
Bảng 3.30. Dữ liệu phổ 13C- NMR (CDCl3, 125 MHz) LN-1, LN-2, LN-3, LN-4.
δC, ppm
Vị trí C LN-1 LN-2 LN-3 LN-4
C-1 145,2 s 142,9 s 141,4 s 143,7 s
C-1a 126,9 s 125,7 s 119,1 s 125,9 s
C-2 152,0 s 148,1 s 145,9 s 149,3 s
C-3 111,3 d 114,1 d 110,0 d 115,1 d
C-3a 128,7 s 129,8 s 124,1 s 126,0 s
C-4 29,2 t 28,9 t 29,1 t 27,6 t
C-5 53,3 t 53,4 t 43,4 t 42,4 t
N-CH3 43,9 q 43,9 q - -
C-6a 62,3 d 62,4 d 53,6 d 53,2 d
C-6b 128,0 s 127,6 s 129,3 s 128,6 s
C-7 35,1 t 35,0 t 37,6 t 36,2 t
C-7a 136,5 s 131,9 s 132,5 s 131,8 s
C-8 127,8 d 127,2 d 127,7 d 127,8 d
C-9 127,3 d 128,1 d 126,7 d 127,4 d
C-10 127,0 d 127,5 d 126,9 d 127,7 d
C-11 128,3 d 127,3 d 128,4 d 128,1 d
C-11a 132,2 s 136,4 s 135,9 s 135,1 s
65
1-OCH3 60,2 q 60,4 s - 60,2 s
2-OCH3 55,9 q - 56,2 s -
Bảng 3.31. Dữ liệu phổ 1H- NMR (CDCl3, 500 MHz) LN-1, LN-2, LN-3, LN4.
δH m (J, Hz)
Vị trí H LN-1 LN-2 LN-3 LN-4
H-3 6,63 s 6,68 s 6,59 s 6,69 s
H-4 3,16 m
2,68 dd (16,5; 3,5)
3,13 d (6,0) 2,65 m
2,97 m 2,66 m
3,03 m 2,70 m H-5 eq: 3,03 m
ax: 2,51 m
eq: 3,03 m ax: 2,49 m
3,36 m 3,01 m
2,98 m 2,71 m
N-CH3 2,54 s 2,54 s -
H-6a 3,01 m 3,02 m 3,86 dd (9,5; 4,5) 3,89 dd (14,5;
4,5) H-7 eq: 3,08 dd (13,5; 4,0)
ax: 2,25 t (13,5)
3,09 dd (9,5; 4,0) 2,63 m
eq: 2,84 dd (9,0;
5,0)
ax: 2,73 t (13,5)
2,72 m 2,84 m
H-8 7,25 m 7,31 d (8,0) 7,23 m 7,25 m
H-9 7,22 m 7,26 m 7,31 m 7,33 m
H-10 7,30 m 7,22 m 7,19 m 7,22 m
H-11 8,4 d (7,5) 8,26 d (8,0) 8,39 d (8,0) 8,3 d (8,0)
1-OCH3 3,66 s 3,57 s - 3,60 s
2-OCH3 3,88 s - 3,91 s
So sánh dữ liệu phổ 13C và 1H của LN-1, LN-2, LN-3, LN-4 với các tài liệu đã công bố LN-1[25],[43],[114], LN-2[114], LN-3[31], [114], LN-4 [31],[32] lần lượt là nuciferin, 2-O-nornuciferin, caaverin, asimilobin, là những alkaloid khung aporphin. Trong đó,
caaverin, asimilobin, 2-O-nornuciferin lần đầu tiên được công bố trên lá Sen Việt Nam. Cấu trúc hóa học của 04 alkaloid được trình bày ở Hình 3.7.
Hình 3.7. Cấu trúc hóa học của LN-1, LN-2, LN-3, LN-4 Hợp chất LN-5 (dữ liệu phổ UV, IR, MS, NMR, tham khảo PL- 2.5)
Mô tả: Tinh thể hình kim màu trắng, kém tan trong CHCl3, dễ tan trong EtOAc và MeOH, góc quay cực riêng ở 24 oC là 162,4 o.
UV/MeOH: λmax (nm) 308, 276, 264.
66
IR (KBr) ( υ , cm-1): 3490, 2852, 1305, 1136, 1031, 826,753.
ESI-MS (ES+): m/z = 298,21 [M +H]+ và m/z = 267,08 [M –OCH3]+ ; m/z = 235 [M-OH-CH3-OCH3]+, LN-5 có khối lượng phân tử 297,21 và công thức nguyên
C18H19NO3 với độ bất bão hòa là 10.
Bảng 3.32. Dữ liệu phổ 13C, 1H-NMR, COSY, HMBC của LN-5.
LN-5 (DMSO-d6, máy 500 MHz)
Vị trí C DEPT δC δH m (J, Hz) COSY HMBC
C-1 C 141,7
C-1a C 119,6
C-2 C 146,7
C-3 CH 110,3 6,66 s H4 C1; C2;C6b
C-3a C 123,0
C-4 CH2 28,5 eq: 2,94 m
ax: 2,57 dd (11,0; 2,5)
H3; H5 C6b;C3a
C-5 CH2 52,9 eq: 2,34 m ax: 2,94 m
H4 C4;C6a; N-CH3
C-6a CH 62,6 2,80 dd (10,0; 3,5) H7
C-6b C 127,6
C-7 CH2 33,6 eq: 2,22 t (13,5) ax: 3,00 dd (9,5; 4,0)
H6; H8 C6a;C7a
C-7a C 126,2
C-8 CH 128,1 7,04 d (8,0) H7; H9 C7; C10;C7a
C-9 CH 113,3 6,58 dd (5,5; 2,5) H8 C7a; C10;C11
C-10 C 155,4
C-11 CH 115,5 7,80 d (2,5) C1a;C7a; C9;C10
C-11a C 133,1
2-OCH3 CH3 55,9 3,81 s H3 C2
6-N-CH3 CH3 43,6 2,41 s H5
So sánh dữ liệu phổ 1D và 2D-NMR với các tài liệu đã công bố[31],[32]. LN-5 là apoglaziovin, một alkaloid khung aporphin lần đầu tiên được công bố trên
cây Sen. Cấu trúc hóa học của LN-5 và các tương tác xa được trình bày ở Hình 3.7.
Hình 3.8. Cấu trúc hóa học và các tương tác xa của LN-5
67
Hợp chất LN-8 và LN-9 (dữ liệu phổ UV, MS, NMR, tham khảo PL- 2.6,2.7) Bảng 3.33. Dữ liệu về cảm quan, tonc, 𝛼𝐷25, UV, MS của các alkaloid LN-8, LN-9.
Tính chất LN-8 LN-9
Mô tả Tinh thể hình kim không màu, dễ tan trong CHCl3, MeOH, tan ít trong nước
Dạng bột vô định hình, màu trắng, dễ tan trong CHCl3, MeOH, không tan trong nước.
[𝛼]24𝐷 + 99,5 o (0,5%; CHCl3) + 20,6 o (0,5%;CHCl3)
tonc - 132-133 oC
UV/MeOH λmax (nm)
Dạng phổ UV với các alkaloid khung proaporphin 212, 232, 282
IR (υ , cm-1)
- 3424, 2847, 1619,
1289, 986 ESI-MS (+)
ESI-MS (-)
[M+H]+ 312,25 [M+ Na]+ 334,45
[M+H]+ 328,26 [M-O]+ 311,41
ESI-MS/MS (+) 282, 268, 253 311, 282, 268, 253
Khối lượng phân tử 311,25 327,26
Công thức nguyên C19H21NO3 C19H21NO4
Độ bất bão hòa 10 10
Bảng 3.34. Dữ liệu phổ 13C và 1H- NMR (DMSO-d6, máy 500 MHz) LN-8, LN-9
LN-8 LN-9
δC δH m (J, Hz) C δC δH m (J, Hz) HMBC COSY 143,6 s 1 144,2 s
152,6 s 2 153,1 s
111,8 d 6,77 (1H, s) 3 112,3 d 6,81 (1H, s) C1; C2; C3a; C3b; C4
134,7 s 3a 133,9 s
127,6 s 3b 127,9 s
27,0 t 2,77 (2H, m) 4 24,5 t 2,78 (2H, m) C3; C3a; C3b; C5 H5
54,3 t 3,03 (1H, m) 2,37 (1H, m)
5 66,9 t 3,03 (1H, m) 2,37 (1H, m)
C3a; C3b; C6a H4
65,0 d 3,44 (1H, m) 6a 75,8 d 5,23 (1H, m) C3a; C13a H7
46,8 t 2,28 (m, 1H) 2,14 (1H, t, 11,0)
7 42,7 t 2,28 (1H, m) 2,18 (1H, t, 11,0)
C6a; C8; C13; C13a,C12
H6a
154,2 d 7,05 (1H, dd 10,0; 2,5)
8 154,4 d 7,05 (1H, dd 10,0; 2,5)
C1; C4a; C6 H9
127,4 d 6,29 (1H; dd, 10,0; 2,0)
9 127,1 d 6,29 (1H, dd 10,0; 2,0)
C11; C13 H8
185,2 s 10 186,5 s C1; C8a; C10
126,5 d 6,17 (1H, dd, 10,0; 2,0)
11 126,0 d 6,17 (1H, dd 10,0; 2,0)
C9; C13 H12
150,8 d 7,16 (1H, dd 10,0; 2,5)
12 149,9 d 7,17 (1H, dd 10,0; 2,5)
C7; C8; C10; C13 H11
50,7 s 13 49,4 s
132,2 s 13a 133,0 s
60,2 q 3,48 (3H,s) 1-OCH3 57,5 q 3,48 s C1
56,1 q 3,74 (3H, s) 2-OCH3 56,7 q 3,74 s C2
43,2 q 2, 25 (3H, s) 6-NCH3 59, 5 q 3,20 s C3b;C5; C6a
68
So sánh dữ liệu phổ của 13C và 1H của LN-8[59],[87] , LN-9[59] với các tài liệu đã công bố. LN-8, LN-9 lần lượt là pronuciferin và pronuciferin N-oxid, là những alkaloid khung proaporphin. Trong đó, pronuciferin N-oxid lần đầu tiên được công bố trên cây Sen. Cấu trúc hóa học của 02 alkaloid này được trình bày ở Hình 3.9.
Hình 3.9. Cấu trúc hóa học của LN-8, LN-9.
Hợp chất EN-1, EN-2, EN-3, EN-4, EN-5 (dữ liệu phổ UV, IR, MS, NMR, tham khảo PL- 2.8, 2.9, 2.10, 2.11, 2.12).
Các tính chất lý hóa và các phép phổ nghiệm (UV, IR, MS, NMR) để xác định cấu trúc EN-1, EN-2, EN-3, EN-4, EN-5 được khảo sát và trình bày ở các Bảng 3.35, 3.36, 3.37, 3.38, 3.39.
Bảng 3.35. Dữ liệu về cảm quan, tonc, 𝛼𝐷25, UV, IR, MS của các alkaloid EN-1, EN-2, EN-3.
Tính chất EN-1 EN-2 EN-3
Cảm quan Dạng bột trắng mịn, dễ tan trong CHCl3, MeOH
𝛼𝐷25 +53,6 o
(0,5%; MeOH)
+15,5 o (0,5%; aceton)
-100,4 o (0,5%; MeOH),
tonc 70-71 oC 74-75 oC 93-94 oC
UV/MeOH λmax (nm)
Dạng phổ UV của alkaloid khung bibenzylisoquinolin 212, 225, 282 212, 225, 283 212, 225, 285 IR (υ, cm-1)
3386, 2958, 1614, 1515, 1276, 1125,
806
3450, 2960, 1620, 1520, 1252, 1125, 805
3421, 2935, 1612, 1461, 1372, 1249, 1134, 805 ESI-MS (+)
ESI-MS (-)
[M+H]+ 611,28 [M+H]+ 611,28 [M+H]+ 625,20 [M-H]- 623,26 ESI-MS/MS (+) 489, 418, 314,
296, 192, 121.
503, 282, 206,
190, 121 503, 418, 297, 206, 190, 121
Khối lượng phân tử 610,28 610,28 624,20
Công thức nguyên C37H42N2O6 C37H42N2O6 C38H44N2O6
Độ bất bão hòa 18 18 18
69
Bảng 3.36. Dữ liệu phổ 13C; 1H- NMR (CDCl3, máy 500 MHz) EN-1, EN-2, EN-3.
δC δH m (J, Hz)
C EN-1 EN-2 EN-3 EN-1 EN-2 EN-3
1 64,4 d 65,1 d 64.4, d 3,65 m 3,69 m 3,62 m 1’ 64,7 d 64,7 d 64,8 d 3,57 m 3,50 m 3,59 m 2-NCH3 43,1 q 42,7 q 42,8 q 2,36 s 2,55 s 2,49 s 2’-NCH3 42,9 q 41,8 q 42,6 q 2,48 s 2,49 s 2,45 s 3 47,6 t 48,2 t 47,3 t 3,08 m 3,12 m 3,13 m 3’ 46,7 t 45,3 t 46,8 t 2,78 m 2,97 m 2,81 m 4 26,7 t 26,5 t 26,2 t eq:2,81 m
ax:2,62 m
eq:2,84 m ax:2,67 m
eq:2,81 m ax:2,62 m 4’ 25,9 t 21,9 t 25,3 t eq:2,78 m
ax:2,49 m
eq:2,95 m ax:2,59 m
eq:2,83 m ax:2,52 m 4a 130,6 s 130,6 s 130,6 s
4a’ 129,2 s 129,1 s 129,2 s 6 148,9 s 148,7 s 149,0 s 6’ 145,7 s 146,4 s 146,4 s
6-OCH3 55,5 q 55,5 q 55,5 q 3,56 s 3,87 s 3,54 s 6’-OCH3 55,7 q 55,8 q 55,7 q 3,78 s 3,49 s 3,80 s 7 142,5 s 143,3, s 143,0, s
7’ 143,4 s 147,3 s 147,2 s
7’-OCH3 - 55,9 q 55,9 q - 3,80 s 3,82 s
8 120,0 d 119,9 d 120,1 d 6,41 s 6,45 s 6,39 s
8’ 111,6d 110,9 d 110 6 d 6,12 s 5,96 s 6,01 s
8a 131,1 s 131,1 s 131,2 s 8a’ 125,8 s 125,5 s 125,8 s H-9 eq
H-9 ax 40,1 t 40,9 t 40,7 t 3,06 m 2,72 m
3,14 m 2,69 m
3,02 m 2,76 m H-9’eq
H-9’ax 39,8 t 40,1 t 39,9 t 2,93 m 2,80 m
3,08 m 2,62 m
2,98 m 2,82 m 10 131,3 s 131,3 s 131,5 s
10’ 131,8 s 131,5 s 132,0 s 12’ 144,6 s 144,7 s 144,8 s 13 157,8 s 155,6 s 157,8 s 13’ 145,2 s 145,5 s 145,5 s
13-OCH3 55,1 q - 55,1 q 3,75 s - 3,73 s
14 113,9 d 115,7 d 113,5 d 6,70 d (8,2) 6,77 d (8,2) 6,70 d (8,0) 14’ 115,9 d 115,4 d 115,4 d 6,81 d (8,0) 6,75 d (8,0) 6,85 d (8,0) 15 130,3 d 130,4 d 130,5 d 6,87 d (8,0) 6,96 d (8,5) 6,90 d (9,0) 15’ 119,5 d 119,4 d 119,3 d 6,49 d (2,5) 6,53 d (2,5) 6,55 d (2,0)
So sánh dữ liệu phổ 13C, 1H-NMR của EN-1, EN-2, EN-3 với các tài liệu đã công bố EN-1[15], [61],[68],[95], EN-2[15],[68], EN-3[15],[95] lần lượt là isoliensinin, liensinin
và neferin trong đó isolienin và liensinin lần đầu tiên được công bố trong tâm Sen Việt Nam. Cấu trúc hóa học của 03 alkaloid này được trình bày ở Hình 3.10.
70
Hình 3.10. Cấu trúc hóa học của EN-1, EN-2, EN-3.
Bảng 3.37. Dữ liệu cảm quan, tonc, 𝛼𝐷25, UV, IR, MS của alkaloid EN-4, EN-5.
Tính chất EN-4 EN-5
Cảm quan
Kết tinh trong DCM-aceton (30:70) Kêt tinh trong CHCl3,.
Dạng bột vô định hình, không màu. Dễ tan trong MeOH, kém tan trong CHCl3
[𝛼]24𝐷 +75.5 o (0,5%; MeOH) +79,4 o (0,5%; MeOH)
tonc 77-78 oC 81-82 oC
UV/MeOH λmax (nm)
Dạng phổ UV với các alkaloid khung bibenzylisoquinolin 209, 225, 282
IR (υ, cm-1) 3386, 2925, 2836, 2790, 1611, 1512, 1270, 1117, 956, 826
3546, 3378, 2952, 2833, 1613, 1464, 1326, 1128, 965, 812.
ESI-TOF [M+H]+ 627,3133 [M+H]+ 627,2691
ESI-MS/MS (+) 610,31; 418,20 296,99; 208,10;
192,14; 121,20
610,26; 505,23; 313,17;
192,16; 121,03
Khối lượng phân tử 626,3133 626,2691
Công thức nguyên C37H42N2O7 C37H42N2O7
Độ bất bão hòa 18 18
Bảng 3.38. Dữ liệu phổ 1D và 2D-NMR của EN-4.
EN-4 (CD3OD, máy 500 MHz)
C δC δH, m (J, Hz) HMBC COSY NOESY
1 66,0 d 3,66 m C4a H9
H1, H3, H9, 2-N-CH3
1’ 79,1 d 4,41 dd (7,5; 3,0) C9’, C10’, C8’a H9’ H9’, 2’-N-CH3
2-NCH3 42,7 q 2,52 s C1, C3 H1, H3 H1, H3 ,H9, H11
2’-NCH3 55,6 q 3,22 s C1’, C3’ H1’, H3’ H1’, H3’, H9’
3 47,8 t H3eq: 3,18 m
H3ax: 2,76 m C1, C4, C4a H2, H4 H1, H4, 3’ 62,2 t H3’eq: 3,44 m
H3’ax: 3,33 m C1’, C4’a H2’, H4’ 2’-N-CH3
4 26,7 t H4eq: 2,9 m
H4-ax: 2.73 m C3, C3, C5 H3, H5 H3 H1, 2-N-CH3
4’ 25,9 t H4’eq: 3,2 m
H4’ax 2,75 m C4’a , C5’ H3’, H5’ H1’, H3’, 2-N-CH3
4a 130,9 s 4a’ 126,5 s
71
5 114,1 d 6,79 s C4 ,C6, C7 H4 H4, 6-OCH3
5’ 112,3 d 6,62 s C4’, C7’, C8’a H4’ H4’, 6’-OCH3,
2’-N-CH3
6 150,6 s
6’ 146,2 s
6-OCH3 56,4 q 3,78 s C6 H5
6’-OCH3 56,5 q 3,80 s C7’ H5’, H8’
7 144,2, s
7’ 148,8 s
8 120,3 d 6,06 s C1, C6, C7,C8a H1, H9, H11, 8’ 112,3 d 6,35 s C6’, , C7’, C4a’ H1’,H9’, H11’
8a 130,9 s 8a’ 122,9 s
9 40,3 t H9eq: 3,08 dd (13,6; 4,0)
H9ax :2,72 m C10, C15 H1 H1, H8, H11, H15
2-N-CH3
9’ 39,2 t H9’eq: 3,58 dd (14,6; 3,0) H9,ax: 2,97 dd (14,6; 7,9)
C10’, C11’,
C8a’ H1’
H1’,H8’, H11’
2’-N-CH3
10 132,5 s 10’ 129,1 s
11 131,6 d 6,91 d (8,5) C12, C13, C14 H12 H1, H9, H12
11’ 119,6 d 6,21 d (1,7) C12’, C13’, C15’ H1’,H8, H8’ H9’
12 114,7 d 6,68 d (8,5) C10, C13, C14 H14 H11,H14’ , 13-OCH3
12’ 146,6 s 13 159,4 s 13’ 147,7 s
13-OCH3 55,6 q 3,70 s C13 H8, H11, H12
14 114,7 d 6,68 d (9,0 ) C10, C12, C13 H12, H15 H11,H14’,13-OCH3
14’ 117,8 d 6,84 d (8,2) C10’, C12’ H15’ H11 , H12
15 131,6 d 6,91 d (8,5) C12, C13, C14 H11, H14 H1 H15’, H9, H12
15’ 125,5 d 6,77 d (2,0) C9’ ,C11’, C13’
H11’,
H14’ H15, 2’-N-CH3
72
Hình 3.11. Cấu trúc hóa học và các tương tác xa của EN-4 Bảng 3.39. Dữ liệu phổ 1D và 2D-NMR của EN-5.
EN-5 (CD3OD, máy 500 MHz)
C δC δH, m (J, Hz) HMBC COSY NOESY
1 79,7 d 4,43 d (6,5) C9 H9 H3, H9, 2-N-CH3
1’ 65,7 d 3,68 m C3’,C8’, C10’, C8’a H9’ H9’, 2’-N-CH3
2-NCH3 55,0 q 3,30 s H1, H3 H1, H3ax, H9
2’-NCH3 42,7 q 2,47 s H1’, H3’ H1’, H3’, H9’
3 62,4 t H3eq: 3,74 m H3ax: 3,51 m
C1, C4 H2, H4 H1, H4, 2-N-CH3
3’ 48,3 t H3’eq: 3,08 m H3’ax: 2,69 m
C1’, C4’, C4’a H2’, H4’ 2’-N-CH3
4 26,4 t H4eq: 3,34 m H4ax: 3,06 m
C3, C5 H3, H5 H3, H5, 2-N-CH3
4’ 26,3 t H4’eq: 2,80 m H4’ax: 2,57 m
C3’, C4’a, C5’ H3’, H5’ H1’, H5’, 2-N-CH3
4a 127,6 s
4a’ 129,9 s
5 113,6 d 6,88 s C6, C7, C8a H4 H4, 6-OCH3
5’ 112,7 d 6,58 s C4’, C7’ H4’ H4’, 6’-OCH3
6 151,4 s
6’ 147,9 s
6-OCH3 56,4 q 3,82 s H5
6’-OCH3 56,5 q 3,82 s H5’, H8’
7 145,3 s
7’ 145,7 s
73
8 119,6 d 6,20 s C1, C7, C4a H1, H9 , H11
8’ 115,5 d 6,22 s C1’, C6’, , C7’, C4’a’ H1’,H9’, H11’
8a 126,9 s
8a’ 125,7 s
9 38,8 t H9eq: 3,66 m, H9ax: 2,83 m
C1, C11, C15 H1
H1, H8, H11, H15
9’ 40,4 t H9’eq: 3,08 m
H9’ax: 2,79 m C1’, C11’, C15’ H1’ H1’,H8’, H11’
10 132,0 s
10’ 131,3 s
11 130,0 d 6,93 d (8,5) C9, C12, C13 H12 H1, H8, H9, H12
11’ 120,6 d 6,29 d (1,5) C9’, C10’, C12’, C13’ H1’, H8’, H9’
12 115,2 d 6,70 d (8,50) C10, C11, C13, C14 H14 H11,13-OCH3
12’ 145,4 s
13 159,9 s
13’ 147,3 s
13-OCH3 55,6 q 3,69 s C12, C13, C14 H11
14 115,2 d 6,70 d (8,5) C10, C12, C13 H12, H15 H11,13-OCH3
14’ 117,5 d 6,78 d (8.5) C10’, C12’, C13’ H15’ H15’
15 130,0 d 6,93 d (8,5) C9, C10, C13, C14 H11, H14 H1, H9, H12
15’ 126,3 d 6,75 dd (8,2; 1,5) C11’, C13’ H11’, H14’ H14’, H9’
Hình 3.12. Cấu trúc hóa học và các tương tác xa của EN-5
74
Biện giải cấu trúc hai hợp chất mới EN-4 và EN-5
Hợp chất EN-4 và EN-5 được chiết xuất bằng dung môi cồn acid và được phân lập bằng các kỹ thuật sắc ký cột Sephadex LH-20 với dung môi 100% MeOH; hệ DCM-Aceton (30:70). Sau đó, tiến hành phân lập bằng phương pháp sắc ký phân bố
ly tâm nhanh (FCPC) từ phân đoạn alkaloid phân cực. Trên SKLM với hệ CHCl3- MeOH-NH4OH (85:15:0,5) EN-4 và EN-5 cho hai vết rất phân cực phía dưới
bản mỏng, tách nhau hoàn toàn, dương tính với thuốc thử Dragendorff và cách xa các vết isoliensinin, liensinin, neferin. Từ đó, có thể kết luận EN-4 và EN-5 là hai alkaloid rất phân cực trong tâm Sen.
EN-4 kết tinh trong DCM-Aceton (30:70) và EN-5 kết tinh trong CHCl3, cả hai đều là dạng bột mịn màu trắng, dễ tan trong MeOH.
Phổ UV/MeOH của EN-4 và EN-5 đều cho dãy I (235-215) và dãy II (275-230) với hai cực đại hấp thu là 283 và 225 nm giống với đặc tính phổ UV của các alkaloid khung bisbenzylisoquinolin đã biết trong Sen (isoliensinin, liensinin, neferin).
Phổ IR của EN-4 và EN-5 có dạng tương tự và đều cho thông tin của các nhóm chức
-OCH3, -OH, -N-CH3, -C=C- nhân thơm..., giống với alkaloid isoliensinin.
Tuy nhiên, có sự xuất hiện trên phổ IR của EN-4 và EN-5 đỉnh khác biệt ở số sóng 956 cm-1 (EN-4) và 965 cm-1 (EN-5), đặc trưng cho liên kết -N=O (-N→O)[16],[132]. Phổ ESI-MS-TOF và MS2 (được trình bày trong Bảng 3.37) đã cung cấp thêm thông tin quan trọng cho việc xác định cấu trúc EN-4 và EN-5.
Phổ ESI-TOF kiểu positive cho thấy EN-4 có phân tử lượng là 626,3133 và EN-5 có phân tử lượng là 626,2691 khác 16 đvC tương ứng với m/z của nguyên tử O so với các alkaloid khung bisbenzylisoquinolin (isoliensinin, liensinin có phân tử lượng là 610,28) đã được công bố từ tâm Sen[95],[118].
Phổ ESI-MS2 của EN-4 và EN-5 đều thấy xuất hiện phân mảnh m/z 610,31 và 610,27
theo thứ tự trong phổ phân mảnh từ ion mẹ m/z 627,3133 và 627,2691 [M+H]+. Do đó, có thể sơ bộ kết luận đã có một oxi bị phân mảnh trong quá trình này và cấu
trúc của EN-4 và EN-5 đã có thêm một nguyên tử oxygen so với m/z 610,28.
Thêm vào đó, các phân mảnh khác thu được trong phổ phân mảnh (418,08; 296,15;
75
192,18; 121,08) giống với các phân mảnh thu được khi đo khối phổ ESI-MS2 cho
hợp chất EN-1 (isoliensinin) trên thực nghiệm cũng như so sánh tài liệu tham khảo[68],[95]. Từ các dữ kiện về SKLM, UV, IR và MS, EN-4 và EN-5 được dự
đoán hình thành từ phân tử isoliensinin liên kết với một nguyên tử O vào N tạo thành hợp chất isoliensinin N-oxid (tham khảo kết quả ESI-TOF và ESI-MS2 của EN-4, EN-5 ở các PL- 2.11, 2.12)
Việc dự đoán cấu trúc của EN-4 và EN-5 như trên sẽ được khẳng định bằng kết quả đo phổ 1D và 2D-NMR của EN-4 và EN-5.
Phổ 13C, DEPT từ Bảng 3.41 và 3.42 cho thấy trong cấu trúc của hai hợp chất này gồm có 37 C trong đó:
- 13 carbon bậc IV, thuộc các carbon của vòng thơm với 7 carbon mang nhóm thế oxy tương ứng với các C-6, 6’; C-7,7’; C-13,13’; C-12’.
- 13 carbon bậc III, trong đó có 11 Carbon thuộc vòng thơm và 2 carbon sp3 ứng vị trí C-1,1’.
- 06 carbon bậc II lai hóa sp3.
- 3 nhóm methyl đặc trưng của nhóm methoxy (δc 56,4-56,6 ppm), 01 nhóm methyl đặc trưng của nhóm N-methyl (δc 42,7) và 01 nhóm methyl có độ dịch chuyển khác hơn bình thường δc 55,56.
Phổ 1H, HSQC, HMBC từ Bảng 3.41 và 3.42 cho thấy EN-4 và EN-5 có 42H trong phân tử trong đó:
- 03 tín hiệu đơn (s) (δH 3,7-3,8) có cường độ mạnh ứng với các proton 6-OCH3; 6’-OCH3; 13-OCH3
- 02 tín hiệu đơn (s) có δH 2,52 và 3,22 có cường độ mạnh ứng với các proton 2-N-CH3; 2’-N-CH3.
- 04 tín hiệu đơn có δH 6,1-6,8 có cường độ trung bình ứng với các proton H-5, 5’ và H-8,8’.
- 06 tín hiệu đôi (d) với J đa phần 8-9 Hz ứng với H-11,12, 14, 14’, 15; H-12 có J= 1.7Hz.
- Các tín hiệu còn lại đều là mũi đa (m)
76
Nhận xét: Số lượng và bậc cũng như độ dịch chuyển hóa học của các carbon trong EN-4 và EN-5 gần như tương tự isoliensinin ở Bảng 3.39 và các tài liệu đã công bố
[68],[95],[118]. Chỉ có ba vị trí của C có sự khác biệt về độ chuyển dịch hóa học so với isoliensinin:
- EN-4: C-1’ (79,1/64,7); 2’-N-CH3 (55,6/42,9); C-3’(62,2/46,7) - EN-5: C-1 (79,7/64,4); 2 -N-CH3 (55,0/43,1) C-3 (62,4/47,6)
EN-4 và EN-5 không chỉ có cùng 42 proton mà các proton này còn có độ dịch chuyển hóa học, hằng số ghép và vị trí gắn với C cũng tương tự như hợp chất isoliensinin.
Chỉ có ba vị trí của H có sự khác biệt về độ chuyển dịch hóa học so với isoliensinin - EN-4: H-1’ (4,41/3,57); 2’-N-CH3 (3,22/2,36); H-3’(3,44/2,78)
- EN-5: H-1 (4,44/3,65); 2 -N-CH3 (3,3/2,48) H-3 (3,74/3,08)
Điều này được dự đoán là do nguyên tử O đã tham gia liên kết phối trí với N trong nhóm N-methyl ở vị trí số 2’ (EN-4) và 2 (EN-5) tạo thành nhóm N-oxid (N→O) trên vòng no, làm thay đổi môi trường điện tử xung quanh nó do hiệu ứng rút điện tử về phía O dẫn đến sự giảm chắn và gây hiệu ứng giảm trường (downfield) với C-1,1’; 2,2’-N-CH3; C-3,3’ H-1,1’; 2,2’-N-CH3; H-3,3’[16], [132].
Phổ Cosy của EN-4 cho thấy H1’ có J (7,5; 3,0) là do tương tác ae và ee giữa H1’ và H9’. Do đó, H1’ có hướng e. Công thức isoliensinin có liên kết C1’ và C9’ là α
nên H1’ là β. Như vậy H1’ có dạng (e, β). Hơn nữa, phổ Noesy của EN-4 cho tương tác cùng phía giữa H1’ và H9a’ nên cấu hình của EN-4 tương tự isoliensinin ở
C1’ (PL- 2.11). Biện giải tương tự cho các vị trí C1 trong EN-4 và C1, C1’ cho EN-5.
So sánh dữ liệu phổ 13C và 1H-NMR của EN-4, EN-5 với các tài liệu đã công bố[68],[95] về isoliensinin kết hợp với dữ liệu phổ 2D- HSQC, HMBC, NOESY
và UV, IR, MS2 có thể khẳng định hợp chất EN-4 và EN-5 là alkaloid khung bisbenzylisoquinolin với tên gọi được đề nghị là EN-4: isoliensinin N2’-oxid và EN-5: isoliensinin N2-oxid lần đầu tiên được phân lập từ dược liệu.
Cấu trúc hai hợp chất này được xác định là những hợp chất mới khi tra cứu trên Sci-Finder ngày 03/08/2015.
77
Hợp chất EN-6, EN-7, EN-8, EN-9 (Phổ UV, MS, NMR tham khảo PL-2.13, 2.14)
Các tính chất lý hóa và các kết quả phổ học (UV, IR, MS, NMR) để xác định
cấu trúc EN-6, EN-7, EN-8, EN-9 được khảo sát và trình bày ở các Bảng 3.40, 3.41, 3.42.
Bảng 3.40. Dữ liệu tonc, 𝛼𝐷25, UV, IR, MS của các alkaloid EN-6, EN-7, EN-8, EN-9.
EN-6 EN-7 EN-8 EN-9
Cảm quan
Tinh thể hình kim, không màu, dễ tan trong CHCl3, MeOH, không tan trong nước.
Bột màu nâu nhạt, dễ tan trong CHCl3
và EtOAc.
Tinh thể hình lăng trụ, không màu, dễ tan trong CHCl3, MeOH, không
tan trong nước.
Tinh thể hình kim ngắn, màu vàng nhạt.
Dễ tan trong MeOH, H2O, không tan trong CHCl3.
[𝛼]24𝐷 -81 o (0,5%; MeOH)
-104,5 o (0,5%; MeOH)
-90,5 o (0,5%;M eOH)
-19,5 o (0,5%; MeOH) tonc 218-219 oC 145-146 oC 181-182 oC 202-203 oC UV/MeOH
λmax (nm)
Dạng phổ UV của alkaloid khung benzylisoquinolin 209, 226, 283
IR (υ, cm-1) 2836, 1611, 1510,1247, 830
2798,1616,
1508, 1238, 831 - 2860,
1610, 1503, 830 ESI-MS [M+H]+ 300,26
[M+Na]+ 322,22
[M+H]+ 314,26 [M-OCH3]+ 283,30
[M+H]+ 300,43 [M+H]+ 313,96 Phân mảnh
đặc trưng
283,22; 236,15;
207,16; 192,16
283,30; 220,52 206,30; 196,14
269,26; 253,34;
206,35;191,23
283,07; 269,05 206,32; 176,08
M 299,26 313,26 299,43 313,96
CTPT C18H21NO3 C19H23NO3 C18H21NO3 C19H23NO3
Độ bất
bão hòa 9 9 9 9
Bảng 3.41. Dữ liệu phổ 13C-NMR của EN-6, EN-7, EN-8 (CDCl3, 125 MHz) và EN-9 (CD3OD, 125 MHz).
δC
Vị trí C EN-6 EN-7 EN-8 EN-9
C-1 56,7 d 64,9 d 65,0 d 74,4 s
2-N-aCH3 - 42,3 q 43,1 q 53,0 q
2-N-bCH3 - - 51,4 q
C-3 40,2 t 46,5 t 46,3 t 53,0 t
C-4 29,1 t 25,0 t 25,2 t 24,4 t
C-4a 129,8 s 129,0 s 129.1 s 121,8 s
C-5 111,9 d 111,3 d 111,6 d 115,8 d
C-6 147,2 s 146,4 s 147,0 s 148,3 s
6-OCH3 56,0 q 55,8 q 55,7 q -
C-7 147,7 s 147,4 s 148,7 s 147,2 s
7-OCH3 55,9 q 55,6 q - 55,9 q
C-8 109,6 d 111,2 d 113,1 d 113,2 d
C-8a 127,0 s 125,6 s 125,8 s 121,8 s
C-9 41,5 t 40,4 t 40,5 t 38,2 t
78
C-10 129,4 s 131,4 s 131,5 s 127,3 s
C-11; C-15 130,4 d 130,8 d 130,7 d 132,6 d
C-12; C-14 115,9 d 115,2 d 115,4 d 116,5 d
C-13 155,5 s 154,4 s 154,8 s 158,0 s
Bảng 3.42. Dữ liệu phổ 1H-NMR của EN-6, EN-7, EN-8 (CDCl3, 500 MHz) và EN-9 (CD3OD, 500 MHz).
δH m (J, Hz)
Vị trí H EN-6 EN-7 EN-8 EN-9
H-1 4,15 m 3,71 dd (8,0; 5,5) 3,71 m 3,71 dd (13,0; 4,0)
2-N-aCH3 2,52 s 2,53 m 3,45 s
2-N-bCH3 3,16 s
H-3eq H-3ax
2,95 m 3,24 m
2,82 m 3,23 m
2,83 m 3,14 m
3,94 m 3,6 m H-4eq
H-4ax 2,76 t (6,0) 2,88 m 2,61 m
eq: 2,85 m
ax: 2,60 m 3,16 overlapped
H-5 6,59 s 6,56 s 6,58 s 6,7 s
6-OCH3 3,86 s 3,84 s 3,90 s -
7-OCH3 3,84 s 3,57 s - 3,42 s
H-8 6,67 s 6,03 s 6,15 s 5,69 s
H-9eq H-9ax
3,14 dd (9,5; 4,5) 2,86 m
3,12 dd (13,5; 5,5) 2,75 dd (14,0; 8,0)
3,10 dd (7,5; 5,5) 2,77 dd (7,5; 2,0)
3,64 dd (13,0; 4,0) 2,67 dd (12,5; 11,0) H-11; H-15 7,02 d (8,0) 6,92 d (8,5) 6,87 d (9,0) 6,86 (1H, d 8,5) H-12; H-14 6,64 d (8,0) 6,66 d (8,5) 6,70 d (9,0) 6,73 (1H, d, 8,5)
So sánh dữ liệu phổ 13C, 1H-NMR của EN-6, EN-7, EN-8, EN-9 với các tài liệu đã công bố. EN-6[36],[99],[114], EN-7[43],[99],[114], EN-8[34],[36],[99]., EN-9[35],[107] lần lượt là norarmepavin, armepavin, N-methylcoclaurin và lotusin. Trong đó, norarmepavin và armepavin lần đầu tiên được công bố trong tâm Sen. Cấu trúc hóa học của 04 alkaloid được trình bày ở Hình 3.13.
Hình 3.13. Cấu trúc hóa học của EN-6, EN-7, EN-8, EN-9 3.1.5.2. Xác định cấu trúc các flavonoid
Các tính chất lý hóa và các kết quả phổ học (UV, IR, MS, NMR) để xác định cấu trúc các flavonoid phân lập lập từ lá Sen (LF-1, LF-2, LF-3, LF-4, LF-5, LF-6,
79
LF-7, LF-8) và từ tâm Sen (TF-1, TF-3, TF-4, TF-5)được khảo sát và trình bày ở các Bảng 3.43, 3.44, 3.45, 3.46, 3.47, 3.48.
Hợp chất LF-1, LF-5, LF-6, LF-8, TF-1 (Phổ MS, NMR PL-2.16, 2.17, 2.18) Bảng 3.43. Dữ liệu phổ UV, MS của các flavonoid LF-1, LF-5, LF-6, LF-8, TF-1.
LF-1 LF-5 LF-6 LF-8 TF-1
Cảm quan
Dạng bột vô định hình màu vàng sậm.
Dạng bột vô định hình, màu vàng nhạt.
Dạng bột vô định hình, màu vàng tươi.
Dạng bột vô định hình, màu trắng.
Tinh thể hình kim, màu vàng nhạt.
Độ tan Dễ tan trong MeOH, kém tan EtOAc.
Kém tan trong MeOH, dễ tan trong EtOAc
Dễ tan trong MeOH, kém tan trong CHCl3, ethyl acetat.
UV/MeOH λmax (nm)
Dạng phổ UV của khung flavonol catechin khung isoflavonol 372, 255, 210 257, 210 257, 215 270, 210 291, 250, 222 ESI-MS [M+H]+ 303,62
[M-H]- 301,0
[M+H]+ 317,07 [M-H]- 315,04
[M-H]- 285,09
[M-H]- 289,05
[M+H]+ 285,23 [M-H]- 283,23 Phân mảnh
đặc trưng
179, 153, 137, 121
316, 301, 287, 245
269,193, 93
256, 181, 109
253, 236, 161, 123
M 302,62 316,07 286,09 290,05 284,23
CTPT C15H10O7 C16H12O7 C15H10O6 C15H14O13 C16H12O5
Độ bất
bão hòa 11 11 11 8 11
Bảng 3.44. Dữ liệu phổ 13C-NMR của LF-1, LF-5, LF-6, LF-8, TF-1 (DMSO-d6, 125 MHz)
δC
Vị trí C LF-1 LF-5 LF-6 LF-8 TF-1
2 146,8 s 146,8 s 146,8 s 80,9 d 153,3 d
3 136,2 s 135,8 s 135,6 s 66,3 d 123,4 s
4 175,5 s 175,8 s 175,9 s 27,8 t 174,5 s
5 161,2 s 160,7 s 160,7 s 156,1 s 127,1 d
6 98,2 d 98,2 d 98,1 d 95,1 d 115,2 d
7 165,6 s 163,9 s 163,8 s 156,4 d 161,7 s
8 93,4 d 93,6 d 93,4 d 93,8 d 102,2 d
9 156,3 s 156,1 s 156,1 s 155,3 s 157,4 s
10 103,2 s 103,0 s 103,0 s 99,0 s 116,6 s
1’ 122,4 s 121,9 s 121,6 s 130,6 s 124,7 s
2’ 114,5 d 111,7 d 129,4 s 114,5 d 116,4 d
3’ 147,5 s 147,3 s 115,5 d 144,8 s 146,2 s
4’ 148,0 s 148,8 s 159,1 s 144,8 s 147,5 s
5’ 115,2 d 115,5 d 115,5 d 115,0 d 112,1 d
6’ 121,7 d 121,7 d 129,4 s 118,4 d 119,4 d
5’-OCH3 - 55,8 q - -
4’-OCH3 - - - 55,0 q
80
Bảng 3.45. Dữ liệu phổ 1H-NMR của LF-1, LF-5, LF-6, LF-8, TF-1 (DMSO-d6, 500 MHz).
δH m (J, Hz)
H LF-1 LF-5 LF-6 LF-8 TF-1
2 - - - 4,47 d (7,0) 8,24 s
3 - - - 3,81 m
4 - - - 2,65 dd (16,0; 5,5)
2,34 dd (16,0; 8,0) -
5 - - - - 7,96 d (8,5)
6 6,20 d (2,0) 6,20 d (2,0) 6,20 d (1,5) 5,88 d (2,5) 6,92 dd (8,5;
2,0)
8 6,40 d (2,0) 6,40 d (2,0) 6,40 d (1,5) 5,68 d (2,0) 6,85 d (2,0) 2’ 7,80 d (2,5) 7,80 d (1,5) 8,00 d (9,0) 6,72 d (2,0) 7,03 d (1,5)
3’ - - 6,90 d (9,0) - -
4’ - - 8,00 d (9,0) - -
5’ 6,90 d (8,5) 6,90 d (8,0) 6,90 d (9,0) 6,68 d (8,5) 6,92 trùng lấp 6’ 7,65 dd (8,5;
2,5)
7,69 dd (8,5;
2,0) 8,00 d (9,0) 6,59 dd (8,0; 2,0) 6,92 trùng lấp
3’-OCH3 - 3,84 s - -
4’-OCH3 - - - 3,82 s
So sánh dữ liệu phổ 13C, 1H-NMR của LF-1, LF-5, LF-6, LF-8, TF-1với các tài liệu đã công bố LF-1[13],[58], LF-5[58],[77],[112], LF-6[58],[77], LF-8[80],[120], TF-1[120]lần lượt là quercetin, isorhamnetin, kaempferol, catechin và calycosin. Trong đó, isorhamnetin và calycosin lần đầu tiên được công bố trên cây Sen. Kaempferol, catechin lần đầu tiên được phân lập từ lá Sen Việt Nam. Cấu trúc hóa học của 05 flavonoid và rutin được trình bày ở Hình 3.14.
Hình 3.14. Cấu trúc hóa học của LF-1, LF-5, LF-6, LF-7, LF-8, TF-1
81 Hợp chất LF-2, LF-3, LF-4, TF-5, TF-4, TF-3
Bảng 3.46. Dữ liệu phổ UV, MS các flavonoid LF-2, LF-3, LF-4, TF-5, TF-4, TF-3.
LF-2 LF-3 LF-4 TF-5 TF-4 TF-3
Cảm quan Dạng bột vô định hình màu vàng nhạt
Độ tan Dễ tan trong MeOH, kém tan trong CHCl3, ethyl acetat.
[𝛼]24𝐷 - -22,4
(0,5%, EtOH) - - - -
tonc - 190-192 oC - 195-196 oC - 261-262 oC
UV/MeOH λmax (nm)
Dạng phổ UV của khung flavonol Khung flavon
359, 257 358, 260 335, 285 338, 269
ESI-MS
[M+H]+ 465,05 [M-H]- 463,16
[M+Na]+ 501,22 [M-H]- 477,36
[M+H]+ 465,0 [M-H]- 463,15
[M+H]+ 449,38 [M-H]- 447,38
[M+H]+ 477,41 [M-H]- 475,41
[M+H]+ 433,10 [M-H]- 431,10 Phân mảnh
đặc trưng 303, 16 303, 17 303, 16
448, 392, 301, 214 179, 121
286, 383, 192, 93
339, 269, 163, 93
M 464,05 478,36 464,15 448,38 476,41 432,10
CTPT C21H20O12 C21H18O13 C21H20O12 C21H20O11 C22H20O12 C21H20O10
Độ bất
bão hòa 12 13 12 12 13 12
Bảng 3.47. Dữ liệu phổ 13C-NMR của LF-3 (CD3OD, 125 M) và LF-2, LF-4, TF-5 (DMSO-d6, 125 MHz).
δC
Vị trí C LF-2 LF-3 LF-4 TF-5 TF-4 TF-3
2 156,1 s 159,3 s 156,1 s 156,1 s 160,9 s 162,6 s 3 133,3 s 135,8 s 133,4 s 134,0 s 103,8 s 102,5 d 4 177,4 s 179,5 s 177,4 s 177,7 s 182,1 s 182,1 s 5 161,2 s 163,0 s 161,2 s 161,3 s 146,0 s 160,4, s 6 98,6 d 99,9 d 98,6 d 98,7 d 130,5 d 98,2 d 7 164,0 s 166,1 d 164,1 s 163,8 s 151,8 s 164,0 s 8 93,4 d 94,8 d 93,5 d 93,6 d 94,3 d 104,6 s 9 156,3 s 158,5 s 156,3 s 157,1 s 149,0 s 156,0 s 10 103,9 s 105,8 s 104,5 s 104,2 s 105,8 s 104,1 s 1’ 121,1 s 122,7 s 121,1 s 120,8 s 121,7 s 121,6 s 2’ 116,2 d 118,2 d 115,5 d 115,7 d 128,7 d 129,0 d 3’ 144,7 s 145,9 s 144,7 s 145,7 s 115,8 s 115,9 d 4’ 148,4 s 149,9 s 148,4 s 148,4 s 161,1 s 161,2 s 5’ 115,1 d 116,2 d 115,1 d 115,5 d 115,8 d 115,9 d 6’ 121,5 d 122,8 d 121,7 d 121,0 d 128,7 d 129,0 d 1” 100,9 d 104,4 d 103,2 d 101,5 d 101,1 d 73,4 d 2” 74,0 d 77,6 d 71,5 d 71,3 d 73,1 d 70,9 d 3” 77,5 d 75,7 d 76,0 d 70,0 d 77,3 d 78,7 d 4” 69,9 d 73,4 d 70,0 d 70,5 d 75,9 d 81,8 d 5” 76,5 d 78,2 d 77,2 d 70,4 d 69,7 d 70,6 d 6” 60,9 t 176,2 s 60,5 t 17,4 s 169,1 s 63,1 t
6”-OCH3 - - - - 61,4 q -
82
Bảng 3.48. Dữ liệu phổ 1H-NMR của LF-3 (CD3OD, 500 M) và LF-2, LF-4, TF- 5, TF-4, TF-3 (DMSO-d6, 500 MHz).
δH m (J, Hz)
H LF-2 LF-3 LF-4 TF-5 TF-4 TF-3
H-3 6,81 s 6,78 s
H-6 6,20 d (2,0) 6,20 d (2,0) 6,20 d (2,0) 6,20 d (2,0) 6,27 s H-8 6,40 d (2,0) 6,40 d (2,0) 6,40 d (2,0) 6,40 d (2,0) 7,05 s
H-2’ 7,58 m 7,98 d (2,0) 7,65 m 7,30 d (2,0) 7,93 d (8,0) 8,00 d (9,0)
H-3’ - - - - 6,93 d (7,0)
H-5’ 6,84 d (9,0) 6,88 d (8,5) 6,82 d (9,0) 6,86 d (8,0) 6,93 d (7,0) 6,89 d (8,5) H-6’ 7,58 m 7,51 dd (8,5;
2,0) 7,52 d (2,5) 7,24 d (2,0) 7,93 d (8,0) 8,02 d (9,0)
H- 1” 5,46 d (7,5) 5,40 (d, 7,5) 5,38 d (8,0) 5,26 d (2,0) 4,95 d (9,0) 4,68 d (10,0)
H-2” 3,26 m 3,63 m 3,55 m
overlapped 3,50 m 3,50 m 3,83 m
H-3” 3,08 m 3,55 m 3,41 m 3,22 m 3,34 m 3,27 m
H-4” 3,08 m 3,60 m 3,45 m 3,16 m 3,26 m 3,23 m
H-5” 3,24 m 3.51 m 3,30 m 3,14 m 3,14 m 3,36 m
H-6”
3,58 dd (11,0; 4,0) 3,31m
- 3,58 m
3,31 m 0,82 d (6,0) - 3,76 m
3,52 m
H3COOC- - - - - 3,71 s -
So sánh dữ liệu phổ 13C, 1H-NMR của LF-2, LF-3, LF-4, TF-5, TF-4, TF-3 với các
tài liệu đã công bố LF-2[13],[26], LF-3[42,[47]], LF-4[26], TF-5[13], TF-4[20], TF-3[121]
lần lượt là isoquercitrin, quercetin 3-O-β-D-GlcA, hyperin và quercitrin, scutellarein 7-O-β-D-GlcA methyl ester, vitexin. Trong đó, quercitrin, scutellarein 7-O-β-D-GlcA methyl ester, vitexin lần đầu tiên được phân lập trên cây Sen. Quercetin 3-O-β-D-GlcA, hyperin lần đầu tiên được công bố từ lá Sen Việt Nam. Cấu trúc hóa học của 05 flavonoid này được trình bày ở Hình 3.15.
83
Hình 3.15. Cấu trúc hóa học của LF-2, LF-3, LF-4, TF-5, TF-4, TF-3.
Hợp chất LF-7
Mô tả: Dạng bột vô định hình màu vàng tươi, dễ tan trong MeOH, kém tan trong CHCl3. UV/ methanol có ba cực đại ở các bước sóng 359, 267, 257 nm.
ESI-MS (ES-): m/z = 608,69 [M-H]-; (ES+) m/z = 632,84 [M+Na]+. LF-7 có M= 609,69 và công thức nguyên C27H30O16 với độ bất bão hòa là 13.
1H NMR (CD3OD, 500 MHz) H : 6,21 (1H; d; 2,0 Hz; H-6); 6,43 (1H; d; 2,0 Hz;
H-8); 7,45 (1H; d; H-2’); 6,86 (1H; d; 9,0 Hz; H-5’); 7,40 (1H; dd; 2, 9Hz; H-6’);
5,32 (1H, d, 7,5Hz, H1-Glc); 5,21 (1H, d, 2,0 Hz, H1-Rham).
13C-NMR (DMSO-d6, 125 MHz) C: 157,3 (C-2); 134,1 (C-3); 178,2 (C-4); 161,1 (C-5); 99,0 (C-6); 164,5 (C-7); 94,1 (C-8); 158,3 (C-9); 104,3 (C-10); 122,1 (C-1’);
116,2 (C-2’); 145,5 (C-3’); 149,1 (C-4’); 116,0 (C-5’); 121,5 (C-6’); 101,5 (C1- G); 74,2 (C2-G); 77,3 (C3-G); 72,1 (C4-G); 76,5 (C5-G); 67,2 (C6-G); 102, 3 (C1- Rh); 70,5 (C2-Rh); 71,2 (C3-Rh); 72,1 (C4-Rh); 69,2 (C5-Rh); 18,6 (C6-Rh).
So sánh dữ liệu phổ của LF-7 với tài liệu đã công bố[13],[28]. LF-7 là rutin.
Nhận xét: Kết quả nghiên cứu của luận án đã phân lập và xác định cấu trúc các hợp chất như sau:
Từ lá Sen:
- 10 alkaloid: nuciferin, 2-O-nornuciferin, caaverin, asimilobin, apoglaziovin, norarmepavin, armepavin, pronuciferin, pronuciferin N-oxid, isoliensinin.
- 08 flavonoid: quercetin, isoquercitrin, quercetin 3-O-β-D-GlcA, hyperin, isorhamnetin, kaempferol, rutin, catechin.
Từ tâm Sen: