Sau khi cú ủược vacxin chỳng tụi tiến hành kiểm tra cỏc chỉ tiờu vacxin: vụ trựng, an toàn, hiệu lực. ðõy là cỏc chỉ tiờu cơ bản và quyết ủịnh chất lượng của mỗi loại vacxin
4.2.1. Mẫu:
Lấy mẫu theo TCN số 160-92 “Vacxin thú y - Qui trình lấy mẫu và sử dụng mẫu trong kiểm nghiệm ”.[3]
Mẫu phải cú tớnh dại diện, lấy ngẫu nhiờn tỷ lệ quy ủịnh và ủược bảo quản ở ủiều kiện phự hợp và an toàn, khi ủến phũng kiểm nghiệm phải ủược tiến hành ngay các thủ tục kiểm nghiệm trong thời gian ngắn nhất. Và cũng giữ mẫu này trong vòng 6 tháng sau khi hết hạn sử dụng ghi trên nhãn vì chúng có thể giúp ủỏnh giỏ những vấn ủề xảy ra trong quy trỡnh sử dụng vacxin. Ở ủõy chỳng tụi
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp……… 57 tiến hành lấy mẫu ở mỗi lô vacxin là 5 mẫu (5 chai vacxin)
4.2.2. Kết quả kiểm tra vô trùng vacxin
- Mỗi lụ vacxin ủược kiểm tra trờn cỏc mụi trường với số lượng như sau:
+ 2 ống nước thịt dinh dưỡng.
+ 2 ống thạch máu.
+ 2 ống môi trường yếm khí.
+ 2 ống môi trường thạch nấm.
- Lượng vacxin cấy kiểm tra bằng 1-2% dung tích môi trường.
- Mụi trường ủó cấy kiểm tra ủược theo dừi 7 ngày ở nhiệt ủộ 370C. Riờng mụi trường nấm ủể ở nhiệt ủộ phũng (25-300C).
- Vỡ ủõy là vacxin vụ hoạt (cú dựng chất diệt trựng) nờn ủể mẫu ở nhiệt ủộ 25- 300C trước khi kiểm tra 24-72 giờ.
* Vacxin ủược kiểm tra trờn mụi trường nước thịt theo 2 bước:
o Bước 1: Cấy mẫu vào 2 lọ nước thịt 50ml, theo dõi ở 370C/3ngày.
o Bước 2: Cấy chuyển từ 2 lọ nước thịt trên sang 2 ống nước thịt, theo dõi ở 370C/7 ngày.
Kết quả kiểm tra vô trùng vacxin theo tiêu chuẩn TCN 161-92 của Cục Thú y như sau:
Bảng 4.8. Kết quả kiểm tra vô trùng của 5 lô vacxin PTH lợn vô hoạt Lô
vacxin
Thời gian theo dõi
Thạch máu
Thạch thường
Nước thịt ống
Yếm khí
Lọ nước thịt 50ml
Thạch nấm
Sal 1 7 ngày - - - -
Sal 2 7 ngày - - - -
Sal 3 7 ngày - - - -
Sal 4 7 ngày - - - -
Sal 5 7 ngày - - - -
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp……… 58 Ghi chú: - = vi khuẩn không mọc
Kết quả trên cho ta thấy không có bất cứ vi khuẩn nào mọc trên các môi trường kiểm tra trong thời gian theo dõi. Như vậy theo 10 TCN 161-92 (do Cục thỳ y quốc gia ban hành) thỡ cả 5 lụ vacxin ủều ủạt chỉ tiờu vụ trựng.
Kết quả kiểm tra vô trùng vacxin giống với kết quả kiểm tra vô trùng bỏn thành phẩm, chứng tỏ trước khi ra chai và sau khi ra chai ủều ủạt yờu cầu vô trùng.
4.2.3. Kết quả kiểm tra an toàn vacxin
An toàn là chỉ tiêu quan trọng của một vacxin. Một vacxin khi sử dụng phũng bệnh cho ủộng vật phải ủạt ủược chỉ tiờu này.
ðộ an toàn thực chất của một vacxin phải ủược chứng minh sớm trong giai ủoạn hỡnh thành sản phẩm và sau khi sản xuất
Khi tiờm cho ủộng vật một liều bằng liều sử dụng hoặc liều gấp ủụi liều sử dụng mà ủộng vật ủú khụng bị chết hoặc cú bất cứ một triệu chứng lõm sàng nào thỡ vacxin ủú ủược ủỏnh giỏ là an toàn. Thụng thường người ta tiờm an toàn cho bản ủộng vật hoặc ủộng vật thớ nghiệm
Theo quy ủịnh: vacxin vụ hoạt ủể kiểm tra an toàn người ta dựng liều gấp ủụi liều sử dụng. ðối với vacxin này chỳng tụi sử dụng 1iều tiờm an toàn tương ủương với liều 1MLD ủối với bản ủộng vật.
ðể kiểm tra chỉ tiêu an toàn vacxin, chúng tôi tiến hành kiểm tra an toàn bằng cả 2 phương pháp: phương pháp thay thế trên chuột lang và phương pháp trọng tài (tiêm trên lợn con mới cai sữa).
Phương pháp trọng tài
Tiêm dưới da cho 3 lợn mới cai sữa, mỗi con 1 liều vacxin sử dụng.
Theo dõi trong 21 ngày. Lợn có thể có phản ứng nhẹ (kém ăn, nơi tiêm hơi sưng) nhưng sau 2–3 ngày phải trở lại bỡnh thường. Khụng ủược cú cỏc triệu chứng nặng khác (ỉa chảy, sốt kéo dài, gầy yếu).
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp……… 59 Bảng 4.9. Kết quả kiểm tra an toàn vacxin trên lợn mới cai sữa
(phương pháp trọng tài) Lô
Vacxin
Số lợn Tiêm
Liều tiêm (ml/con)
Vị trí tiêm
Tỷ lệ Chết/sống
Tỷ lệ sống (%)
Sal 1 3 1 dưới da 0/3 100
Sal 2 3 1 dưới da 0/3 100
Sal 3 3 1 dưới da 0/3 100
Sal 4 3 1 dưới da 0/3 100
Sal 5 3 1 dưới da 0/3 100
Tổng hợp 15 0/15 100
Qua bảng trờn ta thấy cả 3 lợn ủược tiờm 1ml vacxin và theo dừi trong 21 ngày, toàn bộ số lợn ủược tiờm vacxin ủều khỏe mạnh ủạt 100% (hơi viờm nhẹ chỗ tiêm, nhưng hết trong 2 ngày), ngoài ra không có các biểu hiện phản ứng mạnh như sốt cao, bỏ ăn,…như vậy cả 5 lụ vacxin ủều ủạt tiờu chuẩn về an toàn.
Phương pháp thay thế
Mỗi lô vacxin chúng tôi tiến hành tiêm dưới da cho 3 chuột lang khỏe mạnh (250–400g) mỗi con 0,6ml vacxin (tương ủương 3/5 liều vacxin sử dụng). Theo dõi trong 10 ngày. Kết quả như sau:
Bảng 4.10. Kết quả kiểm tra an toàn vacxin trờn ủộng vật thớ nghiệm (phương pháp thay thế trên chuột lang)
Kết quả
Sống Không
phản ứng
ðánh giá an toàn Lô
vacxin
Số chuột kiểm tra(con)
Liều tiêm (ml/con)
Vị trí tiêm
con Tỷ lệ (%)
con Tỷ lệ (%)
Tỷ lệ (%)
Sal1 5 0,6 dưới da 5 100 0 100 100
Sal2 5 0,6 dưới da 5 100 0 100 100
Sal3 5 0,6 dưới da 5 100 0 100 100
Sal4 5 0,6 dưới da 5 100 0 100 100
Sal5 5 0,6 dưới da 5 100 0 100 100
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp……… 60 Kết quả trờn cho thấy, tất cả số chuột lang ủược tiờm vacxin ủều khoẻ mạnh bỡnh thường (100% số chuột ủược tiờm ủều sống khỏe mạnh) sau 10 ngày tiêm. Theo dõi vị trí tiêm sau khi tiêm có nốt phồng dưới da tại vị trí tiêm nhưng sau 3 ngày nốt phồng xẹp xuống hoàn toàn, chuột ăn uống bình thường. ðiều này chứng minh rằng cả 5 lụ vacxin ủều ủạt tiờu chuẩn an toàn.
* Như vậy, theo tiêu chuẩn của Cục thú y (TCN 193 – 94) thì cả 5 lô vacxin phú thương hàn lợn ủều ủạt chỉ tiờu về an toàn.
4.2.4. Kết quả kiểm tra hiệu lực vacxin
ðể cú thể ủỏnh giỏ ủược khả năng phũng bệnh, bảo hộ cho vật nuụi thỡ yếu tố hiệu lực của vacxin là rất quan trọng. Vì vậy việc kiểm tra hiệu lực vacxin là công việc bắt buộc và cần thiết cho mỗi loại vacxin.
Vacxin cú hiệu lực là vacxin gõy ủược miễn dịch ở mức ủộ cao và bảo vệ ủược cơ thể ủộng vật lõu bền
Cú rất nhiều phương phỏp ủể kiểm tra hiệu lực vacxin Phú thương hàn lợn vô hoạt như:
Phương pháp dùng chuột lang:
Gây miễn dịch bằng cách tiêm dưới da cho 5 chuột lang (250–400g) mỗi con 1/5 liều vacxin sử dụng. Sau 7 ngày chuột ủược miễn dịch lần thứ hai với liều vacxin như lần một. Sau 14 ngày kể từ lần tiêm thứ hai, chuột miễn dịch cựng với hai chuột ủối chứng ủược thử thỏch với chủng vi khuẩn cường ủộc phó thương hàn lợn tương ứng, liều 1 MLD (250.000.000 vk/liều) vào dưới da. Theo dừi trong 3 tuần chuột ủối chứng phải chết, trong khi lụ chuột gõy miễn dịch sống ít nhất 3 con.
Phương pháp dùng bồ câu:
Gây miễn dịch bằng cách tiêm bắp thịt cho 5 bồ câu (250–350g) mỗi con 1/5 liều vacxin sử dụng. Sau 14–21 ngày, chim miễn dịch cựng 2 chim ủối chứng ủược thử thỏch với chủng vi khuẩn cường ủộc phú thương hàn lợn tương ứng, liều 1 MLD (250.000.000 VK/liều) vào bắp thịt. Theo dõi trong
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp……… 61 21 ngày, bồ cõu ủối chứng phải chết hết trong khi lụ gõy miễn dịch sống ớt nhất 3 con.
Hiện nay, chỳng tụi ủang sử dụng phương phỏp dựng ủộng vật kiểm nghiệm là chuột lang khỏe mạnh trọng lượng 250–400 gam. Tiêm dưới da cho 5 chuột lang, mỗi con 0,2 ml vacxin (bằng 1/5 liều sử dụng). Sau 21 ngày cụng cường ủộc cho mỗi con 1 MLD (250.000.000 VK/liều) cựng với 3 con ủối chiếu khụng ủược tiờm vacxin. Theo dừi trong 21 ngày, chuột ủối chiếu chết hết, trong khi lô chuột gây miễn dịch sống ít nhất là 3 con (3/5).
Bảng 4.11. Kết quả kiểm tra hiệu lực vacxin PTH lợn vô hoạt bằng phương pháp thay thế chuột lang
Lụ ủối chứng Lụ thớ nghiệm
Chết Sống
Lô vacxin
Số chuột ủối
chứng(con) Con Tỷ lệ (%)
Số chuột thí
nghiệm(con) con Tỷ lệ (%
ðánh giá bảo hộ (%)
Sal 1 3 3 100 5 5 100 100
Sal 2 3 3 100 5 5 100 100
Sal 3 3 3 100 5 5 100 100
Sal 4 3 3 100 5 5 100 100
Sal 5 3 3 100 5 5 100 100
Kết quả trờn ta thấy: sau khi cụng cường ủộc cho chuột lang ủó ủược tiờm miễn dịch và chuột ủối chiếu, theo dừi 21 ngày thấy toàn bộ chuột ủối chiếu chết hết (100%), tất cả chuột miễn dịch sống khỏe mạnh (100%). Như vậy tỷ lệ bảo hộ của vacxin ủạt 100% khi tiến hành trờn ủộng vật kiểm nghiệm.
Vậy cả 5 lụ vacxin phú thương hàn lợn ủều ủạt chỉ tiờu hiệu lực - xột theo tiêu chuẩn của Cục Thú y ban hành (TCN 193-94), [3].