Thực hiện ủề tài chỳng tụi ủó sử dụng cỏc phương phỏp nghiờn cứu thực nghiệm và nghiờn cứu thực ủịa [29].
Sử dụng phương phỏp lấy mẫu ngẫu nhiờn ủơn giản và phương phỏp lấy mẫu phân tầng [29].
Sử dụng cỏc phương phỏp xột nghiệm ủang ủược ỏp dụng tại cỏc phũng thí nghiệm ký sinh trùng ở các trường ðại học Nông nghiệp và Viện nghiên cứu ký sinh trùng.
3.3.1. Tỷ lệ, cường ủộ nhiễm
Thí nghiệm theo phương pháp nghiên cứu cắt ngang, lấy mẫu theo phương pháp lấy mẫu phân tầng [26].
- Thu thập sỏn trưởng thành bằng phương phỏp mổ khỏm toàn diện ủường tiêu hóa của trâu, bò, dê theo phương pháp mổ khám của K.I.Skjrabin [10].
đánh giá cường ựộ nhiễm Fasciola spp và Eurytrema spp theo trị số Min (nhỏ nhất) và Max (lớn nhất). Trong ủú:
+ Min: là số sán ít nhất trên một gia súc mổ khám + Max: là số sán nhiều nhất trên một gia súc mổ khám
- Tìm trứng của Fasciola spp và Eurytrema spp bằng phương pháp gạn rửa sa lắng [10].
- đánh giá cường ựộ nhiễm trứng Fasciola spp và Eurytrema spp trong phõn bằng phương phỏp ủịnh tớnh theo quy ủịnh như sau:
+ Nhiễm nhẹ: có 1 trứng trên một vi trường kính hiển vi, ký hiệu bằng dấu (+) + Nhiễm trung bình: có 2-3 trứng trên một vi trường kính hiển vi, ký hiệu bằng dấu (++)
+ Nhiễm nặng: có ≥ 4 trứng trên một vi trường kính hiển vi, ký hiệu bằng dấu (+++).
3.3.2. ðịnh loại Fasciola spp và Eurytrema spp
Theo khúa ủịnh loại của Phan Thế Việt, Nguyễn Thị Kỳ, Nguyễn Thị
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………28
Lê, 1977 [40].
3.3.3. Tình hình người nhiễm Fasciola spp và Eurytrema spp
Dùng phương pháp nghiên cứu cắt ngang, thu thập số liệu tại các bệnh viện trờn ủịa bàn tỡnh Thỏi Bỡnh.
3.3.4. Tình hình sử dụng một số loại rau làm thức ăn sống cho người
ðiều tra 10 nhà hàng ăn: vịt nướng, thịt chó, lòng lợn tiết canh và 30 gia ủỡnh nụng dõn ở mỗi vựng nghiờn cứu.
Cỏch ủỏnh giỏ: sử dụng thường xuyờn, sử dụng ớt.
3.3.5. Tình trạng nhiễm Aldolescaria Fasciola spp, Eurytrema spp ở một số loại rau thường sử dụng làm thức ăn sống cho người
Tìm Aldolescaria của Fasciola spp, Eurytrema spp trong rau muống cạn, rau muống nước, rau ngổ bằng cách nạo vét bề mặt thân rau, gạn rửa sa lắng và ly tâm cặn.
Phân biệt Aldolescaria Fasciola spp với Aldolescaria Fasciolopsis buski, Paramphistomum spp, Echinostomum spp, Eurytrema spp theo Trịnh Văn Thịnh, 1963 [31]; FAO, 1994 [42]; Phan ðịch Lân, 1980 [12].
3.3.6. Kích thước của Eurytrema spp gây bệnh cho trâu, bò, dê ở Việt Nam ðịnh loài Eurytrema spp (theo Phan Thế Việt, Nguyễn Thị Kỳ, Nguyễn Thị Lê, 1977) [40]. ðo kích thước của sán trưởng thành bằng phương pháp số học trờn thước ủo cú chia vạch ủến ủơn vị mm.
ðo kích thước của trứng Eurytrema spp bằng trắc vi thị kính và trắc vi vật kính [29].
3.3.7. Thu thập trứng Fasciola spp và Eurytrema spp - Mổ tử cung sán trưởng thành:
Sán trưởng thành thu thập từ gan, ống dẫn mật (Fasciola spp), tuyến tụy (Eurytrema spp) của trâu, bò, là những sán có kích thước lớn, vùng tử
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………29
cung rộng, rõ, chứa nhiều trứng. Rửa sạch sán trong nước cất, dùng kéo tiểu phẫu, kim giải phẫu mổ tử cung sán. Chỉ thu thập phần cuối tử cung sán bằng cách dùng kéo tiểu phẫu cắt ngang phần thân sán ở phía trước và phía sau giác bụng 4mm. Dựng kim giải phẫu phỏ vỡ tử cung sỏn trong ủĩa petri cú chứa nước cất. Trứng sỏn ủược cho qua lưới lọc, làm sạch bằng phương phỏp gạn rửa sa lắng [19], ủếm và nuụi trứng trong cỏc mụi trường.
- Thu thập trứng sán từ chất chứa trong dịch mật trâu, bò nhiễm sán. Gạn rửa sa lắng [19] chất chứa trong dịch mật trâu bò.
- Phương phỏp ủếm trứng Eurytrema spp bằng buồng ủếm tự tạo:
Trứng sau khi ủược thu thập ủem pha loóng ở mật ủộ thớch hợp. Dựng một phiến kớnh sạch, hai cụng tơ hỳt sạch (một dựng ủể hỳt dung dịch cú chứa trứng, một dựng ủể hỳt nước cất). Lấy một vài giọt dung dịch chứa trứng bằng cụng tơ hỳt ủưa lờn phiến kớnh, ủếm toàn bộ số trứng cú trong cỏc giọt dung dịch ủú. Sau ủú dựng cụng tơ hỳt thứ hai hỳt nước cất rửa cỏc giọt dung dịch chứa trứng ủó ủược ủếm vào hộp lồng. Tiếp tục hỳt dung dịch chứa trứng và ủếm. Cứ tiến hành như vậy ủến khi ủếm ủược số lượng trứng cần thiết.
3.3.8. Sự phát triển của trứng Eurytrema spp
Nuụi trứng sỏn trong cỏc ủĩa petri, trong cỏc mụi trường cú ủộ pH khỏc nhau. Ở mỗi ủộ pH nuụi 100 trứng. Theo dừi sự phỏt triển của trứng:
- Trứng còn khả năng phát triển: tế bào trong trứng vẫn phát triển, tế bào vẫn phân chia.
- Trứng không còn khả năng phát triển: tế bào trong trứng không phát triển, trứng không phân chia.
3.3.9. Biện pháp phòng bệnh
Phương phỏp ủ sinh học phõn trõu, bũ ủể diệt trứng Fasciola spp và Eurytrema spp.
Phương phỏp xỏc ủịnh nhiệt ủộ: Sử dụng nhiệt kế cú ủầu dũ dài ủể xỏc
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………30
ủịnh nhiệt ủộ. Nhiệt ủộ ủược kiểm tra tại hai vị trớ tõm của ủống ủ và lớp vỏ trấu bờn ngoài ủống ủ. Nhiệt ủộ ủược ủo tại hai thời ủiểm trong ngày là 9 giờ sỏng và 16 giờ chiều. Mỗi vị trớ ủo 3 lần rồi lấy nhiệt ủộ trung bỡnh. Ngoài ra phải ủo nhiệt ủộ khụng khớ vào cỏc thời ủiểm như trờn ủể làm căn cứ theo dừi và ủỏnh giỏ sự tăng giảm nhiệt ủộ ủống ủ với nhiệt ủộ mụi trường.
Phương phỏp xỏc ủịnh ủộ ẩm:
+ Lấy mẫu: mẫu ủược lấy tại tõm của ủống ủ, ủựng trong tỳi plastic chuyên dụng và phân tích trong phòng thí nghiệm.
+ Cụng thức tớnh ủộ ẩm:
m1 – m2
ðộ ẩm (%) = x 100 m